Avaliação da reatividade cruzada entre antígenos de Leishmania spp e Trypanosoma cruzi na resposta sorológica de cães pela técnica de imunofluorescência indireta (RIFI)

Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by Leishmania spp. protozoa. Dog is the main parasite's reservoir, especially in urban areas. Indirect Immunofluorescent Antibody Test (IFAT) is commonly used for canine visceral leishmaniasis (CVL) diagnosis, by detection of antibodies against the parasite. However, Trypanosoma cruzi (T.cruzi) cross reactions can occur in serological diagnosis. In order to evaluate the occurrence of cross reactions between antigens of Leishmania spp. and T.cruzi, 150 blood samples of CVL epidemiological inquiry positive dogs were collected and sera were tested by IFAT. Dogs were culled at Zoonosis Control Center of Bauru (SP), an endemic area for VL. Another 150 dogs' blood samples were collected in Botucatu (SP), a non endemic area for LV, and sera were also tested by IFAT. Serum samples of dogs from Bauru were positive, both for Leishmania spp. and for T. cruzi, showing high cross-reactions incidence, reinforcing the need of diagnosis confirmation by other tests. Serum samples of dogs from Botucatu demonstrated low prevalence of positive results by IFAT, both for Leishmania spp. and T.cruzi. However,despite the low number of positive serological results for these parasites, the epidemiological and serological investigation for LV and Chagas disease in dogs from Botucatu must be kept, considering the importance of dog as domestic reservoir for both parasites.A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania. O cão é o principal reservatório do parasito, especialmente em áreas urbanas. A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) é comumente empregada para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), baseada na detecção de anticorpos contra o parasito. Entretanto, reações cruzadas com Trypanosoma cruzi podem ocorrer à sorologia. Com o objetivo de avaliar as reações cruzadas entre os antígenos de Leishmania spp. e de T.cruzi, foram colhidas 150 amostras de sangue de cães positivos para LVC em inquérito epidemiológico e os soros foram testados pela RIFI. Os cães foram submetidos à eutanásia no Centro de Controle de Zoonoses de Bauru (SP), área endêmica para LV. Outras 150 amostras de sangue de cães foram colhidas em Botucatu (SP), área não endêmica para LV, e os soros foram também testados pela RIFI. Os soros de cães procedentes de Bauru resultaram positivos, tanto para Leishmania spp. quanto para T.cruzi, demonstrando uma grande incidência de reações cruzadas, reforçando a necessidade da confirmação diagnóstica por outras técnicas. As amostras de soros de cães procedentes de Botucatu (SP), pela técnica de RIFI, demonstraram baixa prevalência de resultados positivos para Leishmania spp. e para T.cruzi. Entretanto, apesar do reduzido número de resultados positivos à sorologia para ambos parasitos, a investigação sorológica e epidemiológica para LV e doença de Chagas em cães de Botucatu deve ser mantida, considerando a importância do cão como reservatório doméstico no contexto destas zoonoses

Anti-leptospirosis agglutinins in Brazilian capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris)

Abstract Background The interest in commercial use of wild animals is increasing, especially regarding raising of capybaras. Although this wild species is potentially lucrative for the production of meat, oil and leather, it is suggested as a probable reservoir of leptospires. Methods Due to the economic importance of this species and the lack of studies concerning leptospirosis, the presence of anti-leptospirosis agglutinins was assayed in 55 serum samples of capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) from commercial and experimental breeding flocks located in São Paulo state, Paraná state, and Rio Grande do Sul state, Brazil. Samples were obtained through cephalic or femoral venipunction (5 to 10 mL). Microscopic agglutination test was used according to the Brazilian Health Ministry considering as cut-off titer of 100. Results Out of the 55 samples analyzed, 23 (41.82 %) tested positive. The most prevalent serovar was Icterohaemorrhagiae (56.52 %) in 13 samples, followed by Copenhageni in nine samples (39.13 %), Pomona in four samples (17.39 %), Djasiman and Castellonis in three samples each (13.04 %), Grippotyphosa, Hardjo, Canicola, and Cynopteri in two samples each (8.7 %), and Andamana and Bratislava in one sample each (4.34 %). Conclusions These results suggest the evidence of exposure toLeptospira spp. and the need of new studies to evaluate a higher number of capybaras from different regions to better understand the importance of leptospirosis infection in these animals and verify the zoonotic role of this species as a possible source of infection to humans and other animals

FIRST ISOLATION OF Leptospira kirschneri SEROVAR CANICOLA AND Leptospira interrogans SEROVAR PYROGENES IN URINE SAMPLES FROM SLAUGHTERED CATTLE IN MIDWEST REGION OF SÃO PAULO STATE, BRAZIL

A leptospirose é uma zoonose de grande importância em saúde pública. Cento e quatro (104) amostras de urina de bovinos abatidos na região centro-oeste do Estado de São Paulo, Brasil, foram avaliadas para detectar Leptospira spp. As amostras foram mantidas em PBS e em culturas de EMJH e Fletcher. Observamos crescimento de microrganismos em 13 amostras do meio Fletcher, embora não tenha sido observado no meio EMJH. Por PCR, 25 animais (amostras) foram positivos com os primers LEP1 / LEP2, sendo que 16 amostras foram mantidas em PBS, seis em meio Fletcher e três em meio EMJH. As 25 amostras foram submetidas a PCR com o gene LipL32 para verificação da patogenicidade. Uma amostra amplificada e por sequenciamento resultou em 99,77% de similaridade com Leptospira kirschneri sorovar Canicola e Leptospira interrogans sorovar Pyrogenes. Este é o primeiro relato de isolamento de Leptospira kirschneri sorovar Canicola e Leptospira interrogans sorovar Pyrogenes em amostra de urina bovina na Região Centro-Oeste do estado de São Paulo, Brasil. Concluímos a importância da leptospirose no rebanho avaliado e a atenção para o risco ocupacional, devido à possibilidade de urina contaminada nas pastagens e disseminação da infecção para outros animais e pessoas contactantes.Leptospirosis is a zoonosis of great importance in public health. One hundred and four urine samples from slaughtered cattle in Midwest region of São Paulo State, Brazil were evaluated to detect Leptospira spp. The samples were kept in PBS and in cultures of EMJH and Fletcher. We observed growth of microorganisms in 13 samples of Fletcher medium, although it was not observed in EMJH medium. By PCR, 25 animals (samples) were positive with LEP1/LEP2 primers, which of them 16 samples were kept in PBS, six samples in Fletcher medium and three in EMJH medium. The 25 samples were submitted to PCR with the LipL32 gene to verify the pathogenicity. One sample amplified and by sequencing resulted in 99.77% of similarity to Leptospira kirschneri serovar Canicola and Leptospira interrogans serovar Pyrogenes. This is the first report of isolation of Leptospira kirschneri serovar Canicola and Leptospira interrogans serovar Pyrogenes from bovine urine sample in the Midwest Region of São Paulo state, Brazil. We concluded the importance of leptospirosis in the herd evaluated and the attention for the ocupacional risk, because of the possibility of contaminated urine in the pastures and the spread of infection to other animals and contactants persons

Occurrence of antibodies to Toxoplasma gondii in opossums caught in urban areas of Bauru, state of São Paulo, Brazil

Toxoplasmosis is one of the most common zoonoses worldwide. It was initially described in rodents and rabbits. There are few data on the morbidity and mortality of this disease among Brazilian marsupial fauna, such as opossums. These animals are of great importance regarding the epidemiology of this disease, given that they are prey for felids and other carnivores. With the aim of ascertaining the serological response to Toxoplasma gondii among marsupials (Didelphis spp.), 38 animals that had been caught in 14 districts of the urban area of the municipality of Bauru, state of São Paulo, were evaluated. The modified agglutination test (MAT) showed that 26.3% (10/38) of the samples analyzed were seropositive. It can be suggested that the opossums’ behavior and persistent proximity to human housing results in contact with cats and T. gondii infection, based on the frequency found in this study. This was the first study on the seroprevalence of T. gondii in opossums caught in the urban area of the municipality of Bauru, SP, and it highlights the need for environmental and health authorities of the municipality to monitor this zoonosis. A toxoplasmose é uma das zoonoses mais comuns no mundo, tendo sido descrita inicialmente em roedores e em coelhos. Todavia, poucos são os dados sobre morbidade e mortalidade da toxoplasmose nos marsupiais da fauna brasileira, como os gambás, sendo de grande importância na epidemiologia da doença, como presas para felídeos e outros carnívoros. Com o objetivo de verificar a resposta sorológica para Toxoplasma gondii em marsupiais (Didelphis spp.), foram avaliados 38 animais capturados em 14 regiões da área urbana do município de Bauru-SP. Foi encontrada uma frequência, de acordo com o teste de aglutinação modificada (MAT), de 26,3% (10/38) nas amostras analisadas. Pode-se sugerir que o comportamento dos gambás e sua permanência próxima a habitações humanas resultam em contato com gatos e infecção por T. gondii, tendo em vista a frequência encontrada neste estudo. Este é o primeiro estudo de soroprevalência de T. gondii em gambás capturados na área urbana do município de Bauru-SP, alertando-se para a necessidade do monitoramento desta zoonose pelas autoridades de vigilância ambiental e sanitária do município

Extracellular vesicles in infectious diseases caused by protozoan parasites in buffaloes

Background: Extracellular vesicles (EVs) are small membrane-bound vesicles of growing interest in vetetinary parasitology. The aim of the present report was to provide the first isolation, quantification and protein characterization of EVs from buffalo (Bubalus bubalis) sera infected with Theileria spp. Methods: Infected animals were identified through optical microscopy and PCR. EVs were isolated from buffalo sera by size-exclusion chromatography and characterized using western blotting analysis, nanoparticle tracking analysis and transmission electron microscopy. Subsequently, the proteins from isolated vesicles were characterized by mass spectrometry. Results: EVs from buffalo sera have shown sizes in the 124-140 nm range and 306 proteins were characterized. The protein-protein interaction analysis has evidenced biological processes and molecular function associated with signal transduction, binding, regulation of metabolic processes, transport, catalytic activity and response to acute stress. Five proteins have been shown to be differentially expressed between the control group and that infected with Theileria spp., all acting in the oxidative stress pathway. Conclusions: EVs from buffaloes infected with Theileria spp. were successfully isolated and characterized. This is an advance in the knowledge of host-parasite relationship that contributes to the understanding of host immune response and theileriosis evasion mechanisms. These findings may pave the way for searching new EVs candidate-markers for a better production of safe biological products derived from buffaloes

INFECÇÃO POR Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania major E Trypanosoma cruzi EM CÃES DO ESTADO DO PARÁ

Realizou-se inquérito sorológico para Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em cães dos municípios de Castanhal e Belém, no Estado do Pará, e estudou-se a associação entre os animais sororeagentes e fatores como sexo, idade, acesso a rua e procedência dos animais. Foram utilizados 269 cães de diferentes idades, sadios, provenientes de abrigos de animais, canil comercial, Centro de Controle de Zoonoses e domiciliados. Utilizou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com lâminas sensibilizadas de acordo com os seus respectivos antígenos. Das 263 amostras, 100 foram reagentes, com 38,0% de positividade para Toxoplasma gondii, sendo os títulos prevalentes 16UI e 64UI, 15,97% de sororreagentes para anticorpos anti-N. caninum com maior soroprevalência para os títulos 25UI e 50UI. Na pesquisa de anticorpos anti-L. major, 3,42% foram sororreagentes com o título 40UI, sendo o mais prevalente. A pesquisa de anticorpos anti-T. cruzi revelou negatividade em todas as amostras. As variáveis procedência e faixa etária mostraram ser um fator de risco para os animais. Os animais de Belém apresentaram 2,6 vezes mais chances de infecção do que os animais de Castanhal. Os animais na faixa etária de três a sete anos apresentaram 2,27 vezes mais chances de serem sororreagentes do que os cães com até três anos de idade. Não houve associação estatística para as demais variáveis e protozoários pesquisados. Palavras-chave: Toxoplasmose, Leishmaniose, Neosporose, Doença de Chagas, animais domésticos

Tripanossomatídeos em cães de pacientes chagásicos crônicos, habitantes de Botucatu (SP) e região, avaliados pelos métodos de xenodiagnóstico artificial, hemocultura e reação em cadeia da polimerase (PCR) para Trypanosoma cruzi e/ou Trypanosoma rangeli

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A vigilância epidemiológica de flebotomíneos como planejamento de ações de controle nas leishmanioses

Leishmaniasis are among parasitic infectious disease with the highest incidence in the world. The transmission to the vertebrate occurs by biting flies and insects belonging to the Psychodidae subfamily Phlebotominae family, found throughout the tropics , especially in hot and humid regions of the planet. In Brazil, the main genre is Lutzomyia, with wide distribution in Brazil, from the southern regions to the north. The rate of naturally infected sand flies in endemic areas and correct identification of Leishmania species in a particular sand fly species are important in the epidemiology of leishmaniasis. Of the 476 species of sandflies found in the Americas, approximately 40 are involved in the transmission of leishmaniasis. The process of storage of insects for the diagnosis of natural Leishmania infection from the stomach contents of sand flies is of great ecological and epidemiological significance. For the development of entomological research, several traps have been developed and commercially produced, as the trap of the "CDC" (Centers on Disease Control and Prevention ), which has been largely used for their efficiency. The use of molecular methods has become an important tool to be suggested to the entomologist. In this work of literature review, we highlight some important aspects of entomological research in leishmaniasis as methods for preventing this zoonosis.La leishmaniasis se encuentran entre las enfermedades infecciosas parasitarias con mayor incidencia en el mundo. La transmisión a los vertebrados se produce por la mordedura de insectos pertenecientes a la familia Phlebotominae e subfamília Psychodidae, que se encuentra en las zonas tropicales , sobre todo en las regiones cálidas y húmedas del planeta. En Brasil, el género principal es Lutzomyia , con amplia distribución en Brasil, a partir de las regiones del sur al norte. La tasa de flebótomos infectados de forma natural en las zonas endémicas y la correcta identificación de las especies de Leishmania en un flebótomo en particular son importantes en la epidemiología de las leishmaniasis . De las 476 especies de flebótomos encontradas en las Américas, aproximadamente 40 están involucrados en la transmisión de la leishmaniasis . El proceso de almacenamiento de los insectos para el diagnóstico de la infección natural de Leishmania a partir de los contenidos estomacales de flebótomos es de gran importancia ecológica y epidemiológica. Para el desarrollo de la investigación entomológica, varias trampas se han desarrollado y producido comercialmente , como la trampa de la "CDC " (Centros de Control y Prevención de Enfermedades) , que se ha utilizado en gran medida por su eficacia . El uso de métodos moleculares se ha convertido en una herramienta importante para ser sugerido al entomólogo . En este trabajo de revisión bibliográfica, se destacan algunos aspectos importantes de la investigación entomológica en la leishmaniasis como métodos para la prevención de esta zoonosis.As leishmanioses estão entre as doenças infecciosas parasitárias de maior incidência no mundo. A transmissão para o vertebrado ocorre pela picada de insetos dípteros pertencentes à família Psychodidae e subfamília Phlebotominae, encontrados em toda a região tropical, especialmente nas regiões quentes e úmidas do planeta. No Brasil, o principal gênero é Lutzomyia, com ampla distribuição no Brasil, desde regiões do sul até o norte do país. A taxa de flebotomíneos naturalmente infectados em áreas endêmicas e identificação correta da espécie de Leishmania em uma determinada espécie de flebotomíneo são de grande importância na epidemiologia das leishmanioses. Das 476 espécies de flebotomíneos encontradas nas Américas, aproximadamente 40 estão envolvidas na transmissão das leishmanioses. O processo de armazenamento de insetos para o diagnóstico da infecção natural por Leishmania a partir do conteúdo estomacal de flebotomíneos é de grande significado ecológico e epidemiológico. Para o desenvolvimento das pesquisas entomológicas, diversas armadilhas têm sido desenvolvidas e produzidas comercialmente, como a armadilha do tipo “CDC” (Centers on Diseases Control and Prevention), a qual vem sendo bastante utilizada pela sua eficiência. A utilização de métodos moleculares constitui-se em importante ferramenta a ser sugerida ao entomologista. Neste trabalho de revisão literária, ressaltamos alguns aspectos importantes da pesquisa entomológica nas leishmanioses como métodos de prevenção para esta zoonose

Hemoculture and polymerase chain reaction using primers TCZ1/TCZ2 for the diagnosis of canine and feline trypanosomiasis

Introduction. American trypanosomiasis, also known as Chagas disease, is a zoonosis caused by Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Dogs and cats participate actively in this parasite's transmission cycle. This study aimed at evaluating the occurrence of T. cruzi in dogs and cats from Botucatu, SP, Brazil, as well as at evaluating the technique of hemoculture in LIT (liver infusion tryptose) medium by polymerase chain reaction (PCR). Methods. Blood samples were collected from 50 dogs and 50 cats in Botucatu-SP, Brazil. For hemoculture, the samples were inoculated in LIT medium, and readings were performed for four months. Upon completion of such period, all the hemocultures were processed for parasitic DNA extraction. The PCR reactions were performed by using primers TCZ1/TCZ2. Results. Ten dogs and ten cats (20%) were positive to PCR, and four dogs and three cats (7%) were positive to hemoculture. Only in a one cat sample (1%) there was confirmation of positive hemoculture by PCR for T. cruzi. Conclusions. Results showed that PCR was a suitable tool for the confirmation of the parasite detection in hemoculture samples, and that dogs and cats from Botucatu, SP, Brazil, are maintaining the role of household reservoirs of T. cruzi, which reinforces the need for constant epidemiologic surveillance for this zoonosis