Розробка методик кількісного визначення субстанції кардіазол з використанням високоефективної рідинної хроматографії

The aim. Development of methods of quantitative determination of Cardiazol substance using high-performance liquid chromatography.Materials and methods. The method of high-performance liquid chromato-graphy (HPLC) was to determine of quantitative determination of Cardiazol substance ([3-Allil-4-(41-methoxyphenyl)-3H-thiazole-2-ylidene]-(32-trifluoro-methylphenyl)amine hydrobromide) using Shimadzu Nexera X2 LC -30AD (Shimad-zu, Japan). The acetonitrile of the HPLC grade (Sigma-Aldrich GmbH, Switzerland) was used in the work and other chemicals and solvents were of analytical grade. The test substance was diluted in acetonitrile at a final concentration of 400 μg/ml.Results and discussion. The method of quantitative determination of Cardiazol substance with the help of highly effective liquid chromatography is developed. The developed conditions of testing are selected experimentally. The following optimal conditions for the chromatographic distribution were found: column C8 (250 *4.6 mm; speed of the mobile phase 1 ml/min; thermostat temperature of the column 35 ° C; detecting wavelength 300 nm; holding time of the test compound is 13.9 min. Suitability of determination methods.The following optimal conditions for chromatographic separation were revealed: a C8 column (250*4.6 mm, a mobile phase speed of 1 ml/min, a column thermostat temperature of 35 °C, a detection wavelength of 300 nm. Under the proposed conditions, the retention time of the tested component is 13.9 minutes. The performance of the column was determined for its main indicators, such as the theoretical number of plates (over 65000) and the coefficient of symmetry (about 1.00). The method of quantitative determination was tested in accordance with the recommendations of the Ukrainian and European Pharmacopoeia. The proposed method meets all requirements. The method has been tested for the effects of various factors such as flow rate, the composition of the mobile phase and the temperature of the column thermostat. It is established that the influence of these factors is insignificant and does not affect the results obtained by this method.Conclusions. An analytical method for quantitative determination of Сardiazole substance with cardioprotective action has been developed on the basis of the high-performance liquid chromatography method. The conditions for chromatographic analysis (HPLC) were standardized. Requirements for the test "Checking the suitability of the chromatographic system" were established. The statistical processing of the results of the experiment shows that the relative uncertainty of the average result was within the permissible limits. The developed method for the determination of Сardiazole will be used for further study of substance as a component of various dosage formsЦель. Разработка методики количественного определения субстанции Кардиазол с использованием високоэффективной жидкостной хроматографииМатериалы и методы. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проводили анализ субстанции Кардиазол ([3-аллил-4 (41-метоксифенил)-3Н-тиазол-2-илиден] – (32-трифторметилфенил)амина гидро-бромид), используя систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Япония). В работе использовались ацетонитрил класса HPLC (Sigma-Aldrich GmbH, Швейцария), другие химические вещества и растворители аналитического класса. Исследуемую субстанцию Кардиазол растворяли в ацетонитриле с конечной концентрацией 400 мкг/мл.Результаты и обсуждение. Выявлены следующие оптимальные условия хроматографического разделения: колонка C8 (250*4,6 мм, скорость подвижной фазы 1 мл/мин, температура термостата колонки 35 °С, длина волны детектирования 300 нм, время удерживания исследуемого соединения составляет 13,9 мин. Производительность колонки была определена для ее основных показателей, таких как количество теоретическихтарелок (более 65000) и коэффициент симметрии (около 1,00). Методика была валидирована согласно рекомендациям ГФУ. Методика была апробирована на воздействие различных факторов, таких как скорость потока, состав подвижной фазы и температура термостата колонки. Установлено, что влияние этих факторов является незначительным и не влияет на результаты, полученные по этой методике.Выводы. На основе метода высокоэффективной жидкостной хроматографии разработана аналитическая методика количественного определения субстанции кардиопротекторного действия Кардиазола. Стандартизированы условия проведения хроматографического анализа (ВЭЖХ). Установлены требования к тесту «Проверка пригодности хроматографической системы». Статистическая обработка результатов эксперимента показывает, что относительная неопределенность среднего результата находится в допустимых пределах. Разработанная методика будет использована для дальнейшего исследования субстанции как компонента различных лекарственных формМета. Розробка методики кількісного визначення субстанції Кардіазол з використанням високоефективної рідинної хроматографії.Матеріали і методи. Методом високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) проводили кількісне визначення субстанції Кардіазол ([3-алліл-4-(41-метоксифеніл)-3Н-тіазол-2-іліден]-(32-трифлуорометилфеніл)аміну гідробромід), використовуючи систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Японія). В роботі використовувалися ацетонітрил класу HPLC (Sigma-AldrichGmbH, Швейцарія), інші хімічні речовини та розчинники були аналітичного сорту. Досліджувану субстанцію Кардіазол розчиняли в ацетонітрилі з кінцевою концентрацією 400 мкг/мл.Результати і обговорення. Виявлені наступні оптимальні умови хроматографічного розподілу: колонка C8 (250*4,6 мм; швидкість рухомої фази 1 мл /хв; температура термостату колонки 35 ºС; довжина хвилі детектування 300 нм, час утримування досліджуваної сполуки становить 13,9 хв. Продуктивність колонки була визначена для її основних показників, таких як кількість теоретичних тарілок(більше 65000) і коефіцієнт симетрії (близько 1,00). Методика була валідована згідно з рекомендаціями ДФУ. Методику було апробовано на вплив різних факторів, таких як, швидкість потоку, склад рухомої фази та температура термостату колонки. Встановлено, що вплив цих факторів є незначущим та не впливає на результати, отримані за цією методикою.Висновки. На основі методу високоефективної рідинної хроматографії розроблено аналітичну методику кількісного визначення субстанцiї кардіопротекторної дії Кардіазолу. Стандартизовано умови проведення хроматографічного аналізу (ВЕРХ). Встановлено вимоги до тесту «Перевірка придатності хроматографічної системи». Статистична обробка результатів експерименту свідчить, що відносна невизначеність середнього результату знаходиться у допустимих межах. Розроблена методика буде використана для подальшого дослідження речовини як компонента різних лікарських фор

Розробка методик кількісного визначення субстанції кардіазол з використанням високоефективної рідинної хроматографії

The aim. Development of methods of quantitative determination of Cardiazol substance using high-performance liquid chromatography.Materials and methods. The method of high-performance liquid chromato-graphy (HPLC) was to determine of quantitative determination of Cardiazol substance ([3-Allil-4-(41-methoxyphenyl)-3H-thiazole-2-ylidene]-(32-trifluoro-methylphenyl)amine hydrobromide) using Shimadzu Nexera X2 LC -30AD (Shimad-zu, Japan). The acetonitrile of the HPLC grade (Sigma-Aldrich GmbH, Switzerland) was used in the work and other chemicals and solvents were of analytical grade. The test substance was diluted in acetonitrile at a final concentration of 400 μg/ml.Results and discussion. The method of quantitative determination of Cardiazol substance with the help of highly effective liquid chromatography is developed. The developed conditions of testing are selected experimentally. The following optimal conditions for the chromatographic distribution were found: column C8 (250 *4.6 mm; speed of the mobile phase 1 ml/min; thermostat temperature of the column 35 ° C; detecting wavelength 300 nm; holding time of the test compound is 13.9 min. Suitability of determination methods.The following optimal conditions for chromatographic separation were revealed: a C8 column (250*4.6 mm, a mobile phase speed of 1 ml/min, a column thermostat temperature of 35 °C, a detection wavelength of 300 nm. Under the proposed conditions, the retention time of the tested component is 13.9 minutes. The performance of the column was determined for its main indicators, such as the theoretical number of plates (over 65000) and the coefficient of symmetry (about 1.00). The method of quantitative determination was tested in accordance with the recommendations of the Ukrainian and European Pharmacopoeia. The proposed method meets all requirements. The method has been tested for the effects of various factors such as flow rate, the composition of the mobile phase and the temperature of the column thermostat. It is established that the influence of these factors is insignificant and does not affect the results obtained by this method.Conclusions. An analytical method for quantitative determination of Сardiazole substance with cardioprotective action has been developed on the basis of the high-performance liquid chromatography method. The conditions for chromatographic analysis (HPLC) were standardized. Requirements for the test "Checking the suitability of the chromatographic system" were established. The statistical processing of the results of the experiment shows that the relative uncertainty of the average result was within the permissible limits. The developed method for the determination of Сardiazole will be used for further study of substance as a component of various dosage formsЦель. Разработка методики количественного определения субстанции Кардиазол с использованием високоэффективной жидкостной хроматографииМатериалы и методы. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проводили анализ субстанции Кардиазол ([3-аллил-4 (41-метоксифенил)-3Н-тиазол-2-илиден] – (32-трифторметилфенил)амина гидро-бромид), используя систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Япония). В работе использовались ацетонитрил класса HPLC (Sigma-Aldrich GmbH, Швейцария), другие химические вещества и растворители аналитического класса. Исследуемую субстанцию Кардиазол растворяли в ацетонитриле с конечной концентрацией 400 мкг/мл.Результаты и обсуждение. Выявлены следующие оптимальные условия хроматографического разделения: колонка C8 (250*4,6 мм, скорость подвижной фазы 1 мл/мин, температура термостата колонки 35 °С, длина волны детектирования 300 нм, время удерживания исследуемого соединения составляет 13,9 мин. Производительность колонки была определена для ее основных показателей, таких как количество теоретическихтарелок (более 65000) и коэффициент симметрии (около 1,00). Методика была валидирована согласно рекомендациям ГФУ. Методика была апробирована на воздействие различных факторов, таких как скорость потока, состав подвижной фазы и температура термостата колонки. Установлено, что влияние этих факторов является незначительным и не влияет на результаты, полученные по этой методике.Выводы. На основе метода высокоэффективной жидкостной хроматографии разработана аналитическая методика количественного определения субстанции кардиопротекторного действия Кардиазола. Стандартизированы условия проведения хроматографического анализа (ВЭЖХ). Установлены требования к тесту «Проверка пригодности хроматографической системы». Статистическая обработка результатов эксперимента показывает, что относительная неопределенность среднего результата находится в допустимых пределах. Разработанная методика будет использована для дальнейшего исследования субстанции как компонента различных лекарственных формМета. Розробка методики кількісного визначення субстанції Кардіазол з використанням високоефективної рідинної хроматографії.Матеріали і методи. Методом високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) проводили кількісне визначення субстанції Кардіазол ([3-алліл-4-(41-метоксифеніл)-3Н-тіазол-2-іліден]-(32-трифлуорометилфеніл)аміну гідробромід), використовуючи систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Японія). В роботі використовувалися ацетонітрил класу HPLC (Sigma-AldrichGmbH, Швейцарія), інші хімічні речовини та розчинники були аналітичного сорту. Досліджувану субстанцію Кардіазол розчиняли в ацетонітрилі з кінцевою концентрацією 400 мкг/мл.Результати і обговорення. Виявлені наступні оптимальні умови хроматографічного розподілу: колонка C8 (250*4,6 мм; швидкість рухомої фази 1 мл /хв; температура термостату колонки 35 ºС; довжина хвилі детектування 300 нм, час утримування досліджуваної сполуки становить 13,9 хв. Продуктивність колонки була визначена для її основних показників, таких як кількість теоретичних тарілок(більше 65000) і коефіцієнт симетрії (близько 1,00). Методика була валідована згідно з рекомендаціями ДФУ. Методику було апробовано на вплив різних факторів, таких як, швидкість потоку, склад рухомої фази та температура термостату колонки. Встановлено, що вплив цих факторів є незначущим та не впливає на результати, отримані за цією методикою.Висновки. На основі методу високоефективної рідинної хроматографії розроблено аналітичну методику кількісного визначення субстанцiї кардіопротекторної дії Кардіазолу. Стандартизовано умови проведення хроматографічного аналізу (ВЕРХ). Встановлено вимоги до тесту «Перевірка придатності хроматографічної системи». Статистична обробка результатів експерименту свідчить, що відносна невизначеність середнього результату знаходиться у допустимих межах. Розроблена методика буде використана для подальшого дослідження речовини як компонента різних лікарських фор

Phenological Variations in the Content of Polyphenols and Triterpenoids in Epilobium angustifolium Herb Originating from Ukraine

The composition of secondary metabolites undergoes significant changes in plants depending on the growth phase and the influence of environmental factors. Therefore, it is important to determine the harvesting time of plant material for the optimum secondary metabolite profile and therapeutic activity of the primary material. The shoots of Epilobium angustifolium are used as a healing tea due to the presence of polyphenolic compounds. The aim of this study was to assess the composition of phenolic compounds and triterpenoid saponins in E. angustifolium leaves and flowers and to estimate the dynamics of their content depending on the flowering phase. Qualitative and quantitative characterisation of polyphenols and triterpenoids in E. angustifolium samples from Ukraine of three flowering phases were performed using the high-performance liquid chromatography photo diode array (HPLC-PDA) method. During the present study, 13 polyphenolic compounds and seven triterpenoids were identified in the plant material. It was noted that the largest content and the best polyphenol profile was in late flowering. The most important polyphenolic compounds in the plant material were chlorogenic acid, hyperoside, isoquercitin, and oenothein B. The triterpenoid profile was at its maximum during mass flowering, with corosolic and ursolic acids being the dominant metabolites. The results of the analysis revealed that the quantity of many of the tested metabolites in the raw material of E. angustifolium is dependent on the plant organ and flowering phase. The largest content of most metabolites in the leaves was in late flowering. In the flowers, the quantity of the metabolites studied was more variable, but decreased during mass flowering and increased significantly again in late flowering. The results show that E. angustifolium raw material is a potential source of oenothein B and triterpenoids

Secondary metabolites of hypericum species from the drosanthe and olympia sections

, fatihyayla/0000-0002-6490-6288; Jakstas, Valdas/0000-0001-7627-6263WOS: 000375936200012Eight Hypericum species native to Southern Turkey from Drosanthe and Olympia sections were investigated for the presence of several bioactive compounds, namely, hypericin, pseudohypericin, hyperforin, adhyperforin, the chlorogenic, neochlorogenic, caffeic and 2,4-dihydroxybenzoic acids, hyperoside, isoquercitrin, quercitrin, quercetin, avicularin, rutin, (+)-catechin, (-)-epicatechin, mangiferin, I3, II8-biapigenin, and amentoflavone for the first time. Plants were harvested at flowering, dried at room temperature, dissected into different tissues, and assayed for chemical contents. HPLC analysis of methanolic fractions displayed similar chemical profile and significant quantitative differences among the investigated taxa. the present results support the taxonomic value of hypericins, rutin, and mangiferin at the sectional level and make an important contribution to our current knowledge about Hypericum chemistry. Such kind of data could also be beneficial for explanation of the chemo-taxonomic utility of the corresponding compounds as well as phytochemical evaluation of the species tested. (C) 2016 SAAB. Published by Elsevier B.V. All rights reserved

Порівняння профілів компонентів в рослинній сировини, екстракті та лікарських засобів Hedera Helix

The aim. To investigate both the profile of components and possible difference among herbal raw materials, semi-products and pharmaceuticals of Hedera helix for determination of main standartisation markers.Materials and methods. Investigation of components profile has been performed using the Shimadzu Nexera X2 chromatographic system coupled with a diode-area detector. The ACE C 18 column (250 mm × 4.6 mm with particle size 5 mm) was used for the separation of components. 0.1 % acetic acid and acetonitrile were used as mobile phase A and B, respectively. Studies have been performed on the leaves, dry extract and capsules of H. helix.Results. The determined profile had no significant variation among samples. It has been presented by 19 various components, such as phenolic acids, flavonoids and triterpene saponins. However, kaempferol, nicotiflorin and t-cinnamic acid were not found in the leaf raw material. Hederacoside C might be highlighted as the main marker of raw materials and products of H. helix due to its significant amount in comparison to other components. Its amount was in the range of 64,80 % up to 71,46 % of the total content of components. Moreover, according to some pharmacological studies, hederacoside C is responsible for pharmaceutical usage of H. helix pharmaceutics. Nevertheless, it is not recommended to standardize the plant-based medicines by one marker, since the pharmaceutical activity of such dosage forms is defined by synergism action of all constituents. Except for hederacoside C significant amounts in comparison to other components were found for chlorogenic acid and 4,5-dicaffeoylquinic acid about 5 % and 3 % respectively. Though the latter was found in small concentrations in leaves (0,058 %). This sample had a much higher amount of 3,5-dicaffeoylquinic acid, but in the case of extract and capsules, its content was lower 1,55 % and 0,66 % respectively. Thus, chlorogenic acid has been chosen as a second marker due to its high concentration in all samples and some pharmaceutical activities, such as antioxidant and anti-inflammatory effects.Conclusions. It was found, that standartisation of H. helix products is preferably to perform with determination both hederacoside C and chlorogenic acid. These components were dominant among all components; besides they possess a wide range of pharmaceutical effects. Hence, quantification of hederacoside C and chlorogenic acid is necessary to ensure the high quality of H. helix pharmaceuticals.Цель исследований. Исследовать профиль компонентов та возможные различия между растительным сырьем, полупродуктов и лекарственных препаратов плюща обыкновенного для определения основных маркеров для стандартизации.Материалы и методы. Исследование профиля компонентов проводили с использованием системы Shimadzu Nexera X2 с диодно-матричным детектором. Для разделения компонентов использовали колонку АСЕ С18 (250 мм×4,6 мм, с размером частиц 5 мкм. 0.1 % уксусная кислота была использована в качестве подвижной фазы А, а также ацетонитрил как подвижная фаза Б. Изучение профилей было проведено на листьях, сухом экстракте и капсулах плюща обычного.Результаты. Изученный профиль компонентов отличался не существенно между образцами. Он был представлен 19 различными соединениями, такими как фенольные кислоты, флавоноиды и тритерпеновые сапонины. Однако в листьях плюща не было найдено коричной кислоты, кверцитина и никотифлорина. Среди всех компонентов, наибольшее количество имел гедеракозид С, его содержание было в пределах от 64,80 % до 71,46 % от общего количества других веществ, поэтому в качестве основного маркера сырья и продуктов H. helix можно рекомендовать именно это соединение. Кроме этого, в соответствии с некоторыми фармакологическими исследованиями это вещество ответственно за активность препаратов плюща. Однако, поскольку фармакологическая активность растительных лекарственных средств определяется синергизмом компонентов, которые входят в его состав, определение качества таких препаратов с использованием только одного маркера не рекомендуется. Кроме гедеракозида С, значительное содержание в сравнении с другими веществами имели хлорогеновая и 4,5-дикаффеоилхиновая кислоты, приблизительно 5 % и 3 % соответственно. Однако последняя была в относительно небольшом количестве в листьях (0,058 %). Данный образец имел значительно большее содержание 3,5-дикаффеоилхиновой кислоты (приблизительно 3,24 %) однако в случае капсул и экстракта ее содержание было ниже, 1,55 % и 0,66 % соответственно. Поэтому, вторым маркером было выбрано хлорогеновою кислоту, через ее высокое содержание и определённые фармакологические эффекты, среди которых антиоксидантная и противовоспалительная активности. Выводы. Определено, что для стандартизации продуктов плюща обыкновенного необходимо использовать гедеракозид С и хлорогеновою кислоту. Данные компоненты были доминирующими во всех образцах, кроме того, они имеют широкий спектр фармакологических действий. По этой причине, количественная оценка гедеракозида С и хлорогеновой кислоты необходима для обеспечения более качественных препаратов плюща.Мета. Дослідити профіль компонентів та можливі відмінності між рослинною сировиною, напівпродуктами та лікарським засобом плюща звичайного для визначення основних маркерів для стандартизації.Матеріали і методи. Дослідження профілів компонентів проводили з використанням системи Shimadzu Nexera X2 з діодно-матричним детектором. Для розділення компонентів використовували колонку АСЕ С18, розміром 250 мм×4,6 мм, з розміром часток 5 мкм. 0,1 % оцтової кислоти використовували у якості рухомої фази А та ацетонітрил Р, як рухому фазу Б. Вивчення профілів було здійснено на листях, сухому екстракті та капсулах плюща звичайного.Результати. Визначений профіль компонентів не суттєво варіювався між зразкам. Він був представлений 19 різними речовинами, такими як фенольні кислоти, флавоноїди та тритерпенові сапоніни. Проте у листках плюща звичайного не було знайдено коричневої кислоти, кверцетину та нікотифлорину. Серед усіх компонентів, найбільший вміст мав гедеракозид С, він мав від 64,80 % до 71,46 % від загального вмісту інших речовин, тому як основний маркер сировини та продуктів H. helix можна рекомендувати саме цю речовину. Також, у відповідності до певних фармакологічних досліджень ця речовина відповідальна за активність препаратів плюща. Проте оскільки фармакологічна активність рослинних лікарських засобів визначається синергізм компонентів, що входять до його складу, стандартизація таких препаратів лише за одним маркером не рекомендується. Крім гедеракозиду С, значний вміст у порівнянні з іншими речовинами мали хлорогенова та 4,5 -кофеоилхінінова кислоти, приблизно 5 % та 3 % відповідно. Хоча остання була у відносно невеликій кількості у листках (0.058 %). Даний зразок мав значно більший вміст 3,5 -кофеоилхінінової кислоти (приблизно 3,24 %), але у випадку капсул та екстракту її вміст був нижчим 1,55 % та 0,66 відповідно. Тому, другим маркером було обрано хлорогенову кислоту, через її високий вміст в усіх зразках та певні фармакологічні ефекти, серед яких антиоксидантна та протизапальна активності.Висновки. Встановлено, що для стандартизації продуктів плюща звичайного бажано використовувати гедеракозиду С та хлорогенової кислоти. Дані компоненти були домінуючими серед усіх компонентів, крім того дані речовини мають широкий спектр фармакологічних дій. Тому кількісне визначення гедеракозиду С та хлорогенової кислоти необхідне для забезпечення більш якісних препаратів плюща звичайног

Novel Extraction Method Using Excipients to Enhance Yield of Genistein and Daidzein in Trifolium pratensis L.

Isoflavones can be found in different chemical forms, but the health beneficial effects mainly appear in their free forms—aglycones. Their yield in red clover (Trifolium pratensis L.) extracts differs due to different extraction and hydrolysis methodologies. The main aim of this study was to obtain the highest yields of daidzein and genistein from red clover blossoms through the various extraction and hydrolysis methods and to increase their quantities using additional excipients. Extracts were obtained by ultrasound-assisted, heat-reflux and maceration methods combining them with acidic, alkaline, and thermal hydrolysis. Using ultrasound-assisted extraction with optimal conditions and heat-reflux method highest yields of isoflavones were obtained in UTE510 (393.23 ± 19.66 µg/g daidzein and 171.57 ± 8.58 µg/g genistein); UTE530 (415.07 ± 20.75 µg/g daidzein and 150.57 ± 7.53 µg/g genistein) and HNE5 (432.30 ± 21.61 µg/g daidzein and 154.50 ± 7.72 µg/g genistein) samples. These conditions were used with excipients: magnesium aluminometasilicate, croscarmellose sodium, sodium carboxymethyl starch and vinylpyrrolidone-vinyl acetate copolymer. This is the first study reporting the ability of the vinylpyrrolidone-vinyl acetate copolymer to promote solubilization and availability of active compounds from a herbal extract, resulting in enhanced isoflavones yield. The results of the present study showing increased solubility and availability provided by the vinylpyrrolidone-vinyl acetate copolymer suggest that this preparation could in principle also reduce variability due to limited water solubility of isoflavones

Balsam Poplar Buds: Extraction of Potential Phenolic Compounds with Polyethylene Glycol Aqueous Solution, Thermal Sterilization of Extracts and Challenges to Their Application in Topical Ocular Formulations

Phenolic compounds of natural origin have been valued for their beneficial effects on health since ancient times. During our study, we performed the extraction of phenolic compounds from balsam poplar buds using different concentrations of aqueous polyethylene glycol 400 solvents (10–30% PEG400). The aqueous 30% PEG400 extract showed the best phenolic yield. The stability of the extract during autoclave sterilization was evaluated. The extract remained stable under heat sterilization. Ophthalmic formulations are formed using different concentrations (8–15%) of poloxamer 407 (P407) together with hydroxypropyl methylcellulose (0.3%), sodium carboxymethyl cellulose (0.3%) or hyaluronic acid (0.1%). Physicochemical parameters of the formulations remained significantly unchanged after sterilization. Formulations based on 12% P407 exhibited properties characteristic of in situ gels, the gelation point of the formulations was close to the temperature of the cornea. After evaluating the amount of released compounds, it was found that, as the concentration of polymers increases, the amount of released compounds decreases. Formulations based on 15% P407 released the least biologically active compounds. Sterilized formulations remained stable for 30 days

Optimization of Naringin and Naringenin Extraction from Citrus × paradisi L. Using Hydrolysis and Excipients as Adsorbent

While flavanones exist in a variety of chemical forms, their favorable health effects are most prominent in their free form—aglycones. Their concentrations in grapefruit (Citrus × paradisi L.) extracts vary according to the extraction and hydrolysis methods used. The primary aim of this work was to maximize the yields of naringin and naringenin from various parts of fresh grapefruit fruits (flavedo, albedo, and segmental) using different extraction and hydrolysis methods. In addition, we aimed to evaluate the excipient—magnesium aluminometasilicate—and determine its influence on the qualitative composition of grapefruit extracts. Extracts were obtained by heat reflux extraction (HRE), ultrasound-assisted extraction with an ultrasonic homogenizer (UAE*), and ultrasound-assisted extraction with a bath (UAE). Ultrasound-assisted extraction using a bath (UAE) was modulated using acidic, thermal, and alkaline hydrolysis. The highest yield of naringin 8A (17.45 ± 0.872 mg/g) was obtained from an albedo sample under optimal conditions using ultrasound-assisted extraction; a high yield of naringenin 23-SHR (35.80 ± 1.79 µg/g) was produced using the heat reflux method from the segmental part. Meanwhile, ultrasonic combined with thermal hydrolysis significantly increased flavanone extraction from the albedo and segmental parts: naringin from sample 9-A (from 17.45 ± 0.872 mg/g to 25.05 ± 1.25 mg/g) and naringenin from sample 15-S (from 0 to 4.21 ± 0.55 µg/g). Additionally, magnesium aluminometasilicate demonstrated significant increases of naringenin from all treated grapefruit parts. To our knowledge, this is the first report of magnesium aluminometasilicate used as an adsorbent in flavanone extractions

Розробка методики одночасногокількісного визначення лоратадину тадопоміжних речовин у комбінованому сиропі «Лоратадин+»

Aim. The aim of the present study was to develop a method for the simultaneous determination of loratadine and auxiliary substances - methyl parahydroxybenzoate and propyl parahydroxybenzoate in the combined "Loratadine+" syrup in the presence of a bupleurum aurus grass extract.Materials and methods. Liquid chromatography separation was performed using a Shimadzu Nexera X2 LC-30AD HPLC system (Shimadzu, Japan) composed of a quaternary pump, an on-line degasser, a column temperature controller, the SIL-30AC autosampler (Shimadzu, Japan); the CTO-20AC thermostat (Shimadzu, Japan) as well as the SPD-M20A diode array detector (DAD).Results and discussion. Identification of the main component and impurities in the combined syrup was performed by determining the retention times of peaks of loratadine, methyl parahydroxybenzoate and propyl parahydroxybenzoate on the chromatogram of the test solution, obtained by quantifying them, which coincided with the retention times of the corresponding peaks on the chromatogram of the reference solution.When developing a quantitative determination method, it was found that using the gradient mode, the best separation between the compounds was observed, the separation coefficient between the peaks of methyl parahydroxybenzoate and the peaks closest to it became more than 2.5, in the case of propyl parahydroxybenzoate this index was more than 3.To confirm the correctness of the proposed method, validation studies were carried out in accordance with the requirements of SPHU. It was established that the uncertainty of sample preparation is 1.5 % for loratadine, 1.47 % for methyl parahydroxybenzoate, and 1.53 % for propyl parahydroxybenzoate, which does not exceed the acceptance criteria. The specificity of the technique was confirmed by comparing the chromatograms of the reference solution, the test solution and the chromatogram of the blank solution. Requirements for the linearity of the method were performed over the entire range of concentrations for loratadine and both excipients. The correlation coefficients were 0.9999, 0.9999 and 0.9995, respectively. The correctness of the technique was carried out according to two criteria - practical and statistical insignificance, which were determined in the course of experimental studies. The results of the assessment of intralaboratory precision showed that the obtained values of the confidence interval of the average result to the criteria of acceptability. Based on the results of the determination of robustness, it was found that for optimal chromatographic conditions, a freshly prepared reference solution can be used within 24 hours.Conclusions. A method was developed for the simultaneous quantitative determination of loratadine and auxiliary substances - methyl parahydroxybenzoate and propyl parahydroxybenzoate in the syrup of "Loratadine+". The conditions that allow to correctly determining all the components in the presence of a bupleurum aurus grass extract were determined. The correctness of the methodology is confirmed by validation studiesЦель. Целью представленного исследования была разработка методики одновременного определения лоратадина и вспомогательных веществ – метилпарагидроксибензоата и пропилпарагидроксибензоата в комбинированном сиропе "Лоратадин+" в присутствии володушки золотистой травы экстракта.Материалыиметоды. Liquid chromatography separation was performed using a Shimadzu Nexera X2 LC-30AD HPLC system (Shimadzu, Japan) composed of a quaternary pump, an on-line degasser, a column temperature controller, the SIL-30AC autosampler (Shimadzu, Japan); the CTO-20AC thermostat (Shimadzu, Japan) as well as the SPD-M20A diode array detector (DAD).Результаты и обсуждения. Идентификацию основного компонента и примесей в комбинированном сиропе проводили путем определения времен удерживания пиков лоратадина, метилпарагидроксибензоата и пропилпарагидроксибензоата на хроматограмме испытуемого раствора, полученной при их количественном определении, которые совпадали со временами удерживания соответствующих пиков на хроматограмме раствора сравнения.При разработке методики количественного определения установлено, что с использованием градиентного режима наблюдалось лучшее разделение между соединениями, коэффициент разделения между пиками метилпарагидроксибензоата и ближайших к нему пиков стал больше, чем 2.5, в случае пропилпарагидроксибензоата этот показатель составлял больше 3.Для подтверждения корректности предложенного метода были проведены валидационные исследования согласно требованиям ГФУ. Установлено, что неопределенность пробоподготовки составляет для лоратадина - 1,5 %, для метилпарагидроксибензоата - 1,47 %, для пропилпарагидроксибензоата - 1,53 %, что не превышает критерии приемлемости. Специфичность методики подтверждена путем сравнения хроматограмм раствора сравнения, испытуемого раствора и хроматограммы бланк-раствора. Требования к линейности методики выполнялись на всем диапазоне концентраций для лоратадина и обоих вспомогательных веществ. Коэффициенты корреляции составили 0,9999, 0,9999 и 0,9995 соответственно. Правильность методики выполнялась по двум критериям – практической и статистической незначимости, которые были определены в ходе экспериментальных исследований. Результаты оценки внутрилабораторнойпрецизионности показали соответствие полученных значений доверительного интервала среднего результата критериям приемлемости. По результатам определения робасности установлено, что для оптимальных условий хроматографирования можно использовать свежеприготовленный раствор сравнения в течение 24 часов.Выводы. Разработана методика одновременного количественного определения лоратадина и вспомогательных веществ – метилпарагидрокисбензоата и пропилпарагидроксибензоата в сиропе комбинированном "Лоратадин+". Определены условия, которые позволяют корректно определить все компоненты в присутствии володушки золотистого травы экстракта. Корректность методики подтверждена валидационными исследованиямиМета. Метою представленого дослідження була розробка методики одночасного визначення лоратадину та допоміжних речовин – метилпарагідроксибензоату та пропілпарагідроксибензоату в комбінованому сиропі «Лоратадин+» у присутності ласкавця золотистого трави екстракту.Матеріали і методи. Liquid chromatography separation was performed using a Shimadzu Nexera X2 LC-30AD HPLC system (Shimadzu, Japan) composed of a quaternary pump, an on-line degasser, a column temperature controller, the SIL-30AC autosampler (Shimadzu, Japan); the CTO-20AC thermostat (Shimadzu, Japan) as well as the SPD-M20A diode array detector (DAD).Результати і обговорення.Ідентифікацію основного компоненту та домішок у комбінованому засобі проводили шляхом визначення часів утримування піків лоратадину, метилпарагідроксибензоату і пропілпарагідроксибензоату на хроматограмі випробовуваного розчину, одержаній при їх кількісному визначенні, які співпадали з часами утримування відповідних піків на хроматограмі розчину порівняння.При розробці методики кількісного визначення встановлено, що з використанням градієнтного режиму спостерігалось краще розділення між сполуками, коефіцієнт розділення між піками метилпарагідроксибензоату та найближчих до нього піків став більшим ніж 2.5, у випадку пропілпарагідроксибензоата цей показник становив більше 3.Для підтвердження коректності запропонованого методу було проведено валідаційні дослідження згідно з вимогами ДФУ. Встановлено, що невизначеність пробопідготовки становить для лоратадину – 1,5 %, для метилпарагідроксибензоату – 1,47 %, для пропілпарагідроксибензоату – 1,53 %, що не перевищує критерії прийнятності. Специфічність методики підтверджена шляхом порівняння хроматограмрозчину порівняння, випробовуваного розчину і хроматограми бланк-розчину. Вимоги до лінійності методики виконувалися на всьому діапазоні концентрацій для лоратадину і обох допоміжних речовин. Коефіцієнти кореляції становили 0,9999, 0,9999 та 0,9995 відповідно. Правильність методики виконувалась за двома критеріями – практичною та статистичною незначущістю, що були визначені в ході експериментальних досліджень. Результати оцінки внутрішньолабораторної прецизійності показали відповідність одержаних значень довірчого інтервалу середнього результату критерію прийнятності. За результатами визначення робасності встановлено, що для оптимальних умов хроматографування можна використовувати свіжоприготований розчин порівняння протягом 24 год.Висновки. Розроблена методика одночасного кількісного визначення лоратадину та допоміжних речовин – метилпарагідрокисбензоату та пропілпарагідрокси­бензоату у сиропі комбінованому «Лоратадин+». Визначено умови, що дозволяють коректно визначити всі компоненти в присутності екстракту ласкавця золотистого трави. Коректність методики підтверджено валідаційними дослідженням

Розробка методу ВЕРХ для кількісного визначення епімідину - нового перспективного АФІ з антиконвульсивною активністю

The aim. Development of optimal, high-precision and reproducible methods for quantitative determination of the main substance in the substance Epimidin - 1-(4-methoxyphenyl)-5-[2-[4-(4-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]-2-oxo-ethyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one by high performance liquid chromatography.Materials and methods. High performance liquid chromatography (HPLC) was performed using a ShimadzuNexeraX2 LC-30AD system (Shimadzu, Japan) equipped with a SPD-M20A diode array detector (DAD). ACE C18 column, size 250 x 4.6 mm, YMC with pre-column, particle size 5 μm, filled with octylsilyl silica gel for chromatography P. During the work acetonitrile and trifluoroacetic acid of HPLC class (Sigma-AldrichGmbH, Switzerland) were used, other chemicals and solvents were of analytical grade. In the study an analytical ware class A were used that meet the requirements of SPhU.Results. The following optimal conditions of chromatographic distribution are established: column C18 (250*4.6 mm); the speed of the mobile phase 1 ml / min; column thermostat temperature 35 °С; injection volume 10 μl; mobile phase A - 0.1 % trifluoroacetic acid; mobile phase B - acetonitrile P; the detection wavelength is 270 nm, the retention time of the test compound is 7.22 minutes. The performance of the column was determined for its main indicators, such as the number of theoretical plates (more than 25410) and the coefficient of symmetry (about 1.00). The technique was tested for the influence of various factors, such as flow rate, mobile phase composition and column thermostat temperature. It was established that the influence of these factors is insignificant and does not affect the results obtained by this method. The method was validated in accordance with the recommendations of SPhU on the parameters of specificity, linearity, correctness, precision, robustness (stability).Conclusions. For the first time, a high-precision and reproducible method for quantitative determination of the main substance in the substance Epimidin with anticonvulsant activity by high-performance liquid chromatography was developed. Conditions for chromatographic analysis (HPLC) were standardized. The requirements for the test “System suitability test criteria for chromatographic methods” are set. Statistical processing of the experimental results shows that the relative uncertainty of the average result is within acceptable limits. The correctness of the method was confirmed by validation studies. The developed technique will be used for pharmaceutical development and standardization of dosage formЦель. Разработка оптимальной, высокоточного и воспроизводительной методики количественного определения основного вещества в субстанции Епимидину - 1-(4-метоксифенил)-5-[2-[4-(4-метоксифенил)пиперазин-1-ил]-2-оксоэтил]пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-она методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.Материалы и методы. Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проведено используя систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Япония), оснащенную диодным матричным детектором SPD-M20A (DAD). Колонка ACE C18, размер 250 х 4,6 мм, фирмы YMC с предколонкой, с размером частиц 5 мкм, заполненную силикагелем октилсилильним для хроматографии Р. В работе использовали ацетонитрил и трифторуксусную кислоту класса ВЭРХ (Sigma-AldrichGmbH, Швейцария), другие химические вещества и растворители были аналитического сорта. В исследовании использовали аналитический посуду класса A, которая соответствует требованиям ГФУ.Результаты. Установлены следующие оптимальные условия хроматографического разделения: колонка C18 (250*4,6 мм); скорость подвижной фазы 1 мл/мин; температура термостата колонки 35 °С; объем инжекции 10 мкл; подвижная фаза А - 0,1 % трифторуксусная кислота, подвижная фаза Б - ацетонитрил Р; длина волны детектирования 270 нм, время удерживания исследуемого соединения составляет 7.22 мин. Производительность колонки была определена для ее основных показателей, таких как количество теоретических тарелок (более 25410) и коэффициент симметрии (около 1,00). Методика была апробирована на воздействие различных факторов, таких как, скорость потока, состав подвижной фазы и температура термостата колонки. Установлено, что влияние этих факторов является незначительным и не оказывает влияния на результаты, полученные по этой методике. Методика была валидирована согласно рекомендациям ГФУ по параметрам специфичность, линейность, правильность, прецизионность, робаснисть (стабильность).Выводы. Впервые разработана высокоточная и воспроизводимая методика количественного определения основного вещества в субстанции Епимидину с противосудорожной активностью методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Стандартизировано условия проведения хроматографического анализа (ВЭЖХ). Установлены требования к тесту «Проверка пригодности хроматографической системы». Статистическая обработка результатов эксперимента показывает, что относительная неопределенность среднего результата находится в допустимых пределах. Корректность методики подтверждена валидационными исследованиями. Разработанная методика будет использована для фармацевтической разработки и стандартизации лекарственной формыМета. Розробка оптимальної, високоточної та відтворюваної методики кількісного визначення основної речовини в субстанції Епімідину - 1-(4-methoxyphenyl)-5-[2-[4-(4-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]-2-oxo-ethyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one методом високоефективної рідинної хроматографії.Матеріали і методи. Високоефективну рідинну хроматографію (ВЕРХ) проведено використовуючи систему ShimadzuNexeraX2 LC-30AD (Shimadzu, Японія), оснащений діодним матричним детектором SPD-M20A (DAD). Колонка ACE C18, розміром 250 х 4,6 мм, фірми YMC з передколонкою, з розміром часток 5 мкм, заповнену силікагелем октилсилільним для хроматографії Р. В роботі використовувалися ацетонітрил та трифтороцтову кислоту класу HPLC (Sigma-AldrichGmbH, Швейцарія), інші хімічні речовини та розчинники були аналітичного сорту. У дослідженні використовували аналітичний посуд класу A, що відповідаює вимогам ДФУ.Результати. Встановлено наступні оптимальні умови хроматографічного розподілу: колонка C18 (250*4,6 мм); швидкість рухомої фази 1 мл /хв; температура термостату колонки 35 °С; об’єм інжекції 10 мкл; рухома фаза А - 0,1 % трифтороцтова кислота; рухома фаза Б - ацетонітрил Р; довжина хвилі детектування 270 нм, час утримування досліджуваної сполуки становить 7.22 хв. Продуктивність колонки була визначена для її основних показників, таких як кількість теоретичних тарілок (більше 25410) і коефіцієнт симетрії (близько 1,00). Методику було апробовано на вплив різних факторів, таких як, швидкість потоку, склад рухомої фази та температура термостату колонки. Встановлено, що вплив цих факторів є незначущим та не впливає на результати, отримані за цією методикою. Методика була валідована згідно з рекомендаціями ДФУ за параметрами специфічністі, лінійністі, правильністі, прецизійністі, робасністі (стабільність).Висновки. Вперше розроблена високоточна та відтворювана методика кількісного визначення основної речовини у субстанції Епімідину з протисудомною активністю методом високоефективної рідинної хроматографії. Стандартизовано умови проведення хроматографічного аналізу (ВЕРХ). Встановлено вимоги до тесту «Перевірка придатності хроматографічної системи». Статистична обробка результатів експерименту свідчить, що відносна невизначеність середнього результату знаходиться у допустимих межах. Коректність методики підтверджено валідаційними дослідженнями. Розроблена методика буде використана для фармацевтичної розробки та стандартизації лікарської форм