Simple Reversed-Phase HPLC Method with Spectrophotometric Detection for Measuring Acetaminophen-Protein Adducts in Rat Liver Samples

A simple reversed-phase HPLC method for measuring hepatic levels of acetaminophen- (APAP-) protein adduct following an overdose of APAP was developed. An aliquot of liver homogenate in phosphate-buffered saline pH 7.4 (PBS) was placed on a Nanosep centrifugal device, which was centrifuged to obtain a protein residue. This residue was incubated with a solution of p-aminobenzoic acid (PABA), the internal standard, and bacterial protease in PBS, transferred to a Nanosep centrifugal device, and centrifuged. A 100 μL portion of the filtrate was analyzed on a YMC-Pack ODS-AMQ C18 column, using 100 mM potassium dihydrogen phosphate-methanol-acetic acid (100 : 0.6 : 0.1) as the mobile phase, a flow rate of 1 mL/min, and photometric detection at 254 nm. PABA and APAP-cystein-S-yl (APAP-Cys) eluted at ~14.7 min and 22.7 min, respectively. Method linearity, based on on-column concentrations of APAP-Cys, was observed over the range 0.078–40 μg. Recoveries of APAP-Cys from spiked blank liver homogenates ranged from ~83% to 91%. Limits of detection and of quantification of APAP-Cys, based on column concentrations, were 0.06 μg and 0.14 μg, respectively. RSD values for interday and intraday analyses of a blank liver homogenate spiked with APAP-Cyst at three levels were, in all cases, ≤1.0% and <1.5%, respectively. The proposed method was found appropriate for comparing the antidotal properties of N-acetylcysteine and taurine in a rat model of APAP poisoning

Evaluacija citotoksičnosti resveratrola i piceatanola u makrofazima, T-stanicama i stanicama kože

The cytotoxicity of resveratrol and of piceatannol, a structural analog of resveratrol, was examined in cultured cells. Using a MTT-based assay, which measures the conversion of 3-[4,5-dimethylthiazol-2- yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) to a colored formazan product in living cells, resveratrol was found to inhibit the viability of transformed mouse macrophages, tumor-derived human T cells and human epidermoid carcinoma cells in a concentration-dependent manner, with the effect decreasing in the order: T cells (LC50 ~27 µmol L-1, 24 h; ~9 µmol L-1; 48h) > macrophages (LC50 ~29 µmol L-1, 24 h; 39 µmol L-1, 48 h) > skin cells (LC50 ~91 µmol L-1, 24 h ; ~66 µmol L-1, 48 h). Paradoxically, a high concentration of resveratrol (50 µmol L-1) inhibited the proliferation of all three cell types, and a low concentration (5 µmol L-1) stimulated the proliferation of macrophages. The viability of macrophages was also decreased by piceatannol in a concentration-dependent manner. The stimulation of macrophages with zymosan lowered the cytotoxicity of both resveratrol and piceatannol. Scanning electron microscopy of cells treated with resveratrol revealed changes in cellular morphology that were consistent with toxicity. In macrophages and skin cells, resveratrol (50 µmol L-1) induced a time-dependent increase in reduced glutathione levels but did not alter the background levels of thiobarbituric acid-reactive substances. Taken together, the present data indicate that resveratrol is toxic to cultured macrophages, T cells and skin cells at concentrations ≥25 µmol L-1, and that the cytotoxicity occurs via a mechanism that does not involve oxidative stress. Furthermore, the degree of toxicity of both resveratrol and piceatannol towards macrophages depends on the activation status of these cells, with zymosan-activated cells appearing more resistant than nonstimulated cells.Citotoksičnost resveratrola i piceatanola, strukturnog analoga resveratrola, ispitivana je u uzgojenim stanicama. Primjenom MTT-testa koji mjeri pretvorbu 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]2,5-difenil-tetrazolijeva bromida (MTT) u obojeni formazan produkt u živim stanicama, na|eno je da resveratrol inhibira preživljavanje transformiranih makrofaga miša, ljudskih tumorskih T-stanica i humanih stanica epidermoidnog karcinoma u ovisnosti o koncentraciji, a učinak opada redom: T-stanice (LC50 ~27 µmol L-1, 24 h; ~9 µmol L-1; 48 h) > makrofazi (LC50 ~29 µmol L-1, 24 h; 39 µmol L-1, 48 h) >stanice kože (LC50 ~91 µmol L-1, 24 h; ~66 µmol L-1, 48 h). Paradoksalno, pri visokoj koncentraciji resveratrola (50 µmol L-1) inhibirana je proliferacija svih triju tipova stanica, a pri niskim koncentracijma (5 µmol L-1) stimulirana je proliferacija makrofaga. Preživljavanje makrofaga bilo je tako|er smanjeno primjenom piceatanola ovisno o koncentraciji. Stimulacija makrofaga zimosanom smanjila je citotoksičnost i resveratrola i piceatanola. Skenirajuća elektronska mikroskopija stanica tretiranih resveratrolom pokazala je promjene u morfologiji stanica, što je bilo u skladu s toksičnosti. U makrofazima i stanicama kože resveratrol (50 µmol L-1) inducirao je porast smanjenja razina glutationa ovisan o vremenu, ali nije mijenjao osnovne razine reaktivnih spojeva tiobarbiturne kiseline. Gledajući skupno, prikazani rezultati indiciraju da je resveratrol toksičan za uzgojene makrofage, T-stanice i stanice kože pri koncentracijama ≥25 µmol L-1 i da se citotoksičnost zbiva mehanizmom koji ne uključuje oksidativni stres. Nadalje, stupanj toksičnosti resveratrola i piceatanola prema makrofagima ovisi o aktivacijskom statusu tih stanica, pri čemu su stanice aktivirane zimosanom rezistentnije od nestimuliranih stanica

Comparative study of the binding characteristics to and inhibitory potencies towards PARP and in vivo antidiabetogenic potencies of taurine, 3-aminobenzamide and nicotinamide

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Poly(ADP-ribose) is a NAD⁺-requiring, DNA-repairing, enzyme playing a central role in pancreatic β-cell death and in the development of endothelial dysfunction in humans and experimental animals. PARP activation is also relevant to the development of complications of diabetes. Hence, agents capable of inhibiting PARP may be useful in preventing the development of diabetes and in slowing down complications of diabetes.</p> <p>Methods</p> <p>PARP inhibition was assessed with a colorimetric assay kit. Molecular docking studies on the active site of PARP were conducted using the crystalline structure of the enzyme available as Protein Data Bank Identification No. 1UK1. Type 2 diabetes was induced in male Sprague-Dawley rats with streptozotocin (STZ, 60 mg/kg, i.p.). The test compounds (3-aminobenzamide = 3-AB, nicotinamide = NIC, taurine = TAU) were given by the i.p. route 45 min before STZ at 2.4 mM/kg (all three compounds) or 1.2 and 3.6 mM/kg (only NIC and TAU). Blood samples were collected at 24 hr after STZ and processed for their plasma. The plasma samples were used to measure glucose, insulin, cholesterol, triglycerides, malondialdehyde, nitric oxide, and glutathione levels using reported methods.</p> <p>Results</p> <p>3-AB, NIC and TAU were able to inhibit PARP, with the inhibitory potency order being 3-AB>NIC>>TAU. Molecular docking studies at the active site of PARP showed 3-AB and NIC to interact with the binding site for the nicotinamide moiety of NAD⁺ and TAU to interact with the binding site for the adenine moiety of NAD⁺. While STZ-induced diabetes elevated all the experimental parameters examined and lowered the insulin output, a pretreatment with 3-AB, NIC or TAU reversed these trends to a significant extent. At a dose of 2.4 mm/kg, the protective effect decreased in the approximate order 3-AB>NIC≥TAU. The attenuating actions of both NIC and TAU were dose-related except for the plasma lipids since NIC was without a significant effect at all doses tested.</p> <p>Conclusions</p> <p>At equal molar doses, 3-AB was generally more potent than either TAU or NIC as an antidiabetogenic agent, but the differences were not as dramatic as would have been predicted from their differences in PARP inhibitory potencies. NIC and TAU demonstrated dose-related effects, which in the case of TAU were only evident at doses ≥2.4 mM/kg. The present results also suggest that in the case of NIC and TAU an increase in dose will enhance the magnitude of their attenuating actions on diabetes-related biochemical alterations to that achieved with a stronger PARP inhibitor such as 3-AB. Hence, dosing will play a critical role in clinical studies assessing the merits of NIC and TAU as diabetes-preventing agents.</p

Protective action of taurine, given as a pretreatment or as a posttreatment, against endotoxin-induced acute lung inflammation in hamsters

To assess the effect of taurine on lipopolysaccharide (LPS)-induced lung inflammation, oxidative stress and apoptosis, female Golden Syrian hamsters were intratracheally instilled with bacterial LPS (0.02 mg in phosphate buffered saline (PBS) pH 7.4), before or after a 3-day intraperitoneal treatment with a single dose of taurine (50 mg/kg/day in PBS pH 7.4), and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and lung tissue samples were collected at 24 hr after the last treatment. In comparison to BALF samples from animals receiving only PBS pH 7.4, and serving as controls, those of LPS-stimulated animals exhibited a higher count of both total leukocytes and neutrophils and increased expression of tumor necrosis factor receptor 1. In comparison to lungs from control animals, those from LPS-treated animals showed increased cellular apoptosis, lipid peroxidation, decreased glutathione levels, altered activities of antioxidant enzymes (catalase, glutathione peroxidase, superoxide dismutase) and focal inflammation confined to the parenchyma. A treatment with taurine was found to significantly attenuate all these alterations, with the protection being, in all instances, greater when given before rather than after LPS. The present results suggest that taurine is endowed with antiinflammatory and antioxidant properties that are protective in the lung against the deleterious actions of Gram negative bacterial endotoxin

Desarrollo de un modelo de procesos para la adquisición de software basado en la NTP-ISO/IEC 12207 para mejorar la gestión de las adquisiciones de software en microempresas peruanas

Dentro de cualquier organización, el proceso para obtener un bien o prestación es un proceso crítico y merece atención, porque si se hace de manera inapropiada, puede causar innumerables daños. En este sentido, el proceso de adquisición de software no es diferente, ya que una adquisición mal realizada puede causar retrasos en la entrega de productos, malas prácticas empresariales, entre otros, mientras que, por el contrario, trabajar con un software adecuado y bien adquirido puede significar una ganancia comercial para las compañías. Por esta razón, en esta investigación, primeramente se realizó una revisión sistemática de la literatura utilizando el método de Kitchenham & Charters con el propósito de seleccionar el modelo más adecuado que sirva de soporte para la construcción de un modelo nuevo; luego, se caracterizó la NTP-ISO/IEC 12207 haciendo énfasis en las etapas del Proceso de Adquisición que dicha norma establece; después, se diseñó el modelo propuesto haciendo uso de la herramienta GitMind y el cual quedó constituido por siete (07) etapas con sus respectivas actividades, tareas y formatos pertinentes; posteriormente se validó dicho modelo mediante juicio de expertos y; finalmente, se llevó a cabo una prueba piloto de dicho modelo desarrollado en una microempresa peruana que brinda servicios de consultoría en gestión de tecnologías de la información. Los resultados obtenidos mostraron que, el modelo de procesos obtuvo una puntuación de 92% de aprobación por parte de los expertos quienes lo consideraron como una valoración de “Muy Buena”, asimismo, en cuanto a la implementación de dicho modelo, se obtuvo una mejora del proceso de adquisición en dicha compañía caso de estudio, al pasar de un nivel pre test promedio de 0.68, a un nivel post test promedio de 3.81, considerando en ambos casos las siete etapas del modelo. Se concluyó que, el modelo de procesos para la adquisición de software sí mejoró el proceso adquisitivo de software en una microempresa peruana que brinda servicios de consultoría en gestión de tecnologías de la información.TesisInfraestructura, Tecnología y Medio Ambient

La calculadora como herramienta didáctica en el aula. Una experiencia de formación de maestros y maestras

En este capítulo, y como introducción a lo que encontraremos en el presente libro, presentamos los alcances y las limitaciones de algunas situaciones didácticas con calculadora dentro de un proceso conjunto entre el Grupo de Investigación Mathema Fiem de la U. de A. y el Programa Gakuhan de Casio Calculadoras. Con el desarrollo de las situaciones se promovió la integración y el uso de la calculadora en clase de matemáticas hacia el análisis y la reflexión como centro de la actividad matemática en el aula

Propuestas estrat?gicas que promuevan el relanzamiento de la Zona Especial de Desarrollo Paita, 2021-2022

En el presente trabajo de tesis se enfoca en brindar propuestas estrat?gicas que promuevan el relanzamiento de la zona especial de desarrollo (ZED) Paita 2021-2022 la cual se encuentra en el Departamento de Piura en la zona norte del Per?. Como objetivo principal se plantea establecer estrategias que promuevan el relanzamiento de la Zona especial de desarrollo Paita para atraer al empresario nacional y extranjero dentro de la ZED con el fin de impulsar la instalaci?n de empresas privadas nacionales e internacionales permitiendo el crecimiento de la econom?a de la regi?n. La finalidad del trabajo es incentivar y promover el uso de la ZED Paita a trav?s de diversas estrategias tomando como ejemplo los casos de ?xito de otras ZED en otros pa?ses c?mo (China, M?xico, entre otros) debido a que las ZED suman valor a las econom?as ayudando a su crecimiento y desarrollo. Para poder establecer las estrategias se elabor? una encuesta a las empresas instaladas dentro de la ZED y se llevaron a cabo entrevistas a expertos y empresarios fuera de la ZED con el fin de realizar un an?lisis e interpretaci?n de los resultados y definir las propuestas estrat?gicas que promuevan el relanzamiento de la ZED Paita

Medidas de Tendencia Central

En el proceso de enseñanza-aprendizaje de la Estadística Básica, en primer lugar, se parte del estudio de la Media aritmética, apoyándose con el emulador Casio fx-570LA-X Classwiz, algunos autores presentan el tema otras herramientas estadísticas, como el SPSS, Minitab, etc. En el presente libro desarrollamos los contenidos de Media, Mediana y Moda utilizando en todo momento el emulador Casio fx-570LA-X Classwiz, que les hace muy didáctico abordar cada tema, haciéndola más sencilla, amena, divertida y les crea mucho interés en los temas de estadística que lo abordan en el sílabo de la asignatura. Los contenidos presentados se les hace muy familiar. Los ejemplos y ejercicios desarrollados en clase son situaciones de la vida real y casos motivadores. El libro culmina presentando como ejercicio algunas situaciones de la vida cotidiana

Medidas de Tendencia Central

En el proceso de enseñanza-aprendizaje de la Estadística Básica, en primer lugar, se parte del estudio de la Media aritmética, apoyándose con el emulador Casio fx-570LA-X Classwiz, algunos autores presentan el tema otras herramientas estadísticas, como el SPSS, Minitab, etc. En el presente libro desarrollamos los contenidos de Media, Mediana y Moda utilizando en todo momento el emulador Casio fx-570LA-X Classwiz, que les hace muy didáctico abordar cada tema, haciéndola más sencilla, amena, divertida y les crea mucho interés en los temas de estadística que lo abordan en el sílabo de la asignatura. Los contenidos presentados se les hace muy familiar. Los ejemplos y ejercicios desarrollados en clase son situaciones de la vida real y casos motivadores. El libro culmina presentando como ejercicio algunas situaciones de la vida cotidiana

Pan-Cancer Analysis of lncRNA Regulation Supports Their Targeting of Cancer Genes in Each Tumor Context

Long noncoding RNAs (lncRNAs) are commonly dys-regulated in tumors, but only a handful are known toplay pathophysiological roles in cancer. We inferredlncRNAs that dysregulate cancer pathways, onco-genes, and tumor suppressors (cancer genes) bymodeling their effects on the activity of transcriptionfactors, RNA-binding proteins, and microRNAs in5,185 TCGA tumors and 1,019 ENCODE assays.Our predictions included hundreds of candidateonco- and tumor-suppressor lncRNAs (cancerlncRNAs) whose somatic alterations account for thedysregulation of dozens of cancer genes and path-ways in each of 14 tumor contexts. To demonstrateproof of concept, we showed that perturbations tar-geting OIP5-AS1 (an inferred tumor suppressor) andTUG1 and WT1-AS (inferred onco-lncRNAs) dysre-gulated cancer genes and altered proliferation ofbreast and gynecologic cancer cells. Our analysis in-dicates that, although most lncRNAs are dysregu-lated in a tumor-specific manner, some, includingOIP5-AS1, TUG1, NEAT1, MEG3, and TSIX, synergis-tically dysregulate cancer pathways in multiple tumorcontexts