Mecanismos envolvidos na progressão do câncer de ovário : 1) papel de NAC1 e BCL6 na regulação da expressão gênica; 2) efeito da cisplatina no fenótipo de células-tronco tumorais, migração e quimiorresistência

Ovarian cancer (OVCA) is the most lethal gynecological cancer, and its dissemination and chemoresistance are major factors determining disease prognosis. Better understanding of mechanisms involved in these processes is crucial to improve OVCA therapy; therefore being the aim of the present study. Firstly, the role of NAC1 and BCL6 regulating transcription in OVCA has been investigated using FOXQ1 as a study model. It has been shown that NAC1 and BCL6 interact through NAC1’s BEN C-terminus domain, forming a complex which binds to three BCL6 binding motives on FOXQ1 promoter, activating its transcription. A positive correlation between NAC1 and BCL6 expression has been shown in OVCA cell lines and tumor specimens. Moreover, BCL6-depending NAC1 binding to BCL6 promoter activating its transcription has been shown. Therefore, a novel mechanism by which a BTB/POZ family member interacts with BCL6 attenuating its auto-repression has been herein described. Finally, cDNA microarray analyzes revealed a plethora of putative NAC1/BCL6 target genes. On the second chapter, the effects of cisplatin on OVCA progression have been analyzed. It has been shown that a five-day treatment with 10-5M cisplatin of A2780 cell increased chemoresistance, cell migration and expression of the cancer-stem cell associated phenotype CD44+CD24-, and a G2/M cell cycle arrest. The secretion of TGF-β1 and CXCL2, both cytokines involved in migration and resistance in cancer, in response to cisplatin, doxorubicin, and paclitaxel, by three cell lines originated from serous (A2780), endometrioid (MDAH-2774), and clear cell (TOV21G) OVCA subtypes has been measured. In response to cisplatin, TGF-β1 secretion by TOV21G cells has increased, as has CXCL2 secretion by TOV21G and A2780. When analyzing the effect of exogenous CXCL2 in drug resistance, this relation could not be demonstrated. However, it could be explained by CXCR2 overexpression in response to cisplatin, which has been herein demonstrated. Therefore, several different mechanisms leading to OVCA progression have been identifiedO câncer de ovário (CAOV) é a neoplasia ginecológica mais letal, sendo que a disseminação da doença e a quimiorresistência podem ser considerados fatores determinantes no prognóstico da doença. O entendimento dos mecanismos envolvidos nesses processos é essencial ao aprimoramento da terapêutica do CAOV, sendo assim o alvo de estudo deste trabalho. Primeiramente, investigou-se o papel de NAC1 e BCL6 na regulação da transcrição no CAOV, utilizando-se como modelo FOXQ1. Viu-se que NAC1 e BCL6 interagem através do domínio BEN Cterminal de NAC1, formando um complexo que se liga a motivos de ligação a BCL6 localizados na região promotora de FOXQ1 que, conforme se mostrou, possui três desses motivos. Em seguida, mostrou-se que existe uma correlação positiva entre a expressão de NAC1 e BCL6 em linhagens celulares de CAOV e em tumores. Mostrou-se ainda, que NAC1 liga-se ao promotor de BCL6 de forma dependente da proteína BCL6, ativando a sua transcrição. Dessa forma, descreveu-se de forma inédita um mecanismo através do qual um membro da família BTB/POZ interage com BCL6 atenuando a sua autorregulação negativa. Por fim, através de análise de microarranjo de cDNA identificaram-se possíveis novos alvos de regulação do complexo NAC1/BCL6. Na segunda parte deste trabalho, analisaram-se os efeitos da cisplatina na progressão do CAOV. Mostrou-se que, em resposta ao tratamento por cinco dias com cisplatina 10-5M, células da linhagem A2780 apresentaram aumento de migração, resistência e expressão do fenótipo de células-tronco tumorais CD44+CD24-; além da droga induzir uma parada do ciclo celular em fase G2/M. Também se analisou a secreção de TGF-β1 e CXCL2, citocinas envolvidas com a resistência e metástase no câncer, em resposta à cisplatina, à doxorrubicina e ao paclitaxel, em três linhagens de CAOV derivadas de tumores dos tipos seroso (A2780), endometrioide (MDAH-2774) e de células claras (TOV21G). Mostrou-se que, em resposta à cisplatina, apenas, havia o aumento da secreção de TGF-β1 por células TOV21G e de CXCL2 por células A2780 e TOV21G. Em seguida, buscou-se identificar se CXCL2 exógeno seria capaz de induzir a resistência nas células A2780. Esse efeito não foi observado. Contudo, pode ser explicado pela regulação positiva da expressão de CXCR2 induzida pela cisplatina aqui mostrada. Dessa forma, identificaram-se diferentes mecanismos que podem contribuir para a progressão do CAOVCAPE

Molecular epidemiological investigation of Mayaro virus in febrile patients from Goiania City, 2017-2018.

Mayaro virus (MAYV) has historically been associated with sylvatic transmission; however, urban outbreaks have been reported in Brazil, including cases of co-detection with dengue virus (DENV). Therefore, we performed a molecular survey to investigate MAYV circulation and cocirculation with DENV within Goiania, a major city in Central-West Brazil. Among 375 subjects with arbovirus-like symptoms, 259 were positive for DENV and 26 for MAYV. Of these, 17 were coinfected with DENV-2, suggesting co-transmission of the viruses. The most common complaints at the time of inclusion were myalgia, headache, fever, arthralgia, retro-orbital pain, and skin rash. No specific symptoms were associated with MAYV when either detected alone or co-detected with DENV, compared to that when DENV was detected alone. Most MAYV-infected subjects were women with no recent travel history to rural/sylvatic areas. Phylogenetic reconstruction indicated that the MAYV identified in this study is closely related with a lineage observed in Peru, belonging to genotype D. Our results corroborate the growing circulation of MAYV in urban environments in Brazil and reinforce the need to implement laboratory diagnosis in the Unified Health System, considering that the clinical manifestations of Mayaro fever are similar to those of other arboviruses, particularly dengue. Furthermore, most cases occurred in association with DENV-2. Further phylogenetic studies are needed to evaluate MAYV, which has not been widely examined

Análise proteômica de Mesocestoides corti durante o processo de estrobilização in vitro

Em Cestódeos, o processo de estrobilização é aquele que leva ao desenvolvimento da fase adulta a partir da larva, conferindo uma grande vantagem adaptativa a esses organismos através do aumento da fecundidade e dispersão. Mesocestoides corti vem sendo utilizado como modelo de estudos de diversos aspectos envolvidos na estrobilização. Neste trabalho, empregaram-se abordagens proteômicas no estudo de tetratirídeos que foram expostos ou não a tratamento de indução de segmentação (IN e TT, respectivamente): eletroforese bidimensional (2DE) seguida de MALDI-TOF MS ou MS/MS e a análise de extratos por LC- ESI-Q-TOF MS/MS. Através da 2DE-MALDITOF MS ou MS/MS, foram definidos os padrões 2DE de TT e IN nas faixas de pH 3-10 e 4-7. Foi possível identificar sete proteínas e obter dados de massa para mais 106 spots em tetratirídeos, e uma proteína e 66 spots em tetratirídeos após indução de estrobilização. Quando o perfil eletroforético das amostras foi analisado, foram evidenciados 102 spots diferencialmente expressos. Através de LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 80 proteínas entre as duas fases, sendo 17 exclusivas de TT, 21 exclusivas de IN e 42 comuns a ambas. Essas proteínas foram caracterizadas funcionalmente em 18 grupos de acordo com o Dentre as proteínas identificadas, foram verificadas algumas com funções secundárias relacionadas ao controle de expressão gênica e algumas com papel relacionado à imunogenicidade do hospedeiro. Através da análise do emPAI das proteínas nos dois extratos, foram verificadas 12 proteínas com alterações quantitativas na expressão. Dessa forma, através desse trabalho, foi possível a caracterização preliminar dos perfis protéicos de tetratirídeos e induzidos, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na diferenciação de M. corti em nível proteômico.In Cestodes, the strobilation process leads to the development of the adult form from the larvae, giving a great adaptative advantage to these organisms by increasing the fecundity and spread. Mesocestoides corti has been used as a model for the study of varius aspects involved in strobilation. In this study we employed proteomic approaches in the study of tetrathyridia that had been exposed or not to segmentation induction treatment (IN and TT, respectively): two0dimensional gel electrophoresis (2DE) followed by MALDITOF MS or MS/MS and analysis of extracts by LC-ESI-Q-TOF MS/MS were performed. By 2DE-MALDI-TOF MS or MS/MS the proteomic profile of TT and IN on the pH range of 4-7 and 3-10 were defined. Seven proteins could be identified and mass data for further 106 spots were obtained for TT samples, and, from IN samples, one protein was identified and mass data was obtained for 66 spots. When 2DE profiles of TT and IN were compared, 102 spots were differentially expressed. Through LC-ESI-Q-TOF MS/MS, 80 proteins were identified within two samples, 17 exclusive from TT, 21 from IN and 42 common to both. These proteins were function characterized in 18 groups according to KOG. Among the proteins identified, we observed some with secondary roles related to gene expression control and some related to host immunogenicity. Through emPAI analysis, 12 showed quantitative differences in expression. Through this work, it was possible to preliminarily characterize the protein profiles of TT and IN and, thus, obtain some evidence of the mechanisms involved in the differentiation of M. corti in the proteomic level

Análise proteômica de Mesocestoides corti durante o processo de estrobilização in vitro

Em Cestódeos, o processo de estrobilização é aquele que leva ao desenvolvimento da fase adulta a partir da larva, conferindo uma grande vantagem adaptativa a esses organismos através do aumento da fecundidade e dispersão. Mesocestoides corti vem sendo utilizado como modelo de estudos de diversos aspectos envolvidos na estrobilização. Neste trabalho, empregaram-se abordagens proteômicas no estudo de tetratirídeos que foram expostos ou não a tratamento de indução de segmentação (IN e TT, respectivamente): eletroforese bidimensional (2DE) seguida de MALDI-TOF MS ou MS/MS e a análise de extratos por LC- ESI-Q-TOF MS/MS. Através da 2DE-MALDITOF MS ou MS/MS, foram definidos os padrões 2DE de TT e IN nas faixas de pH 3-10 e 4-7. Foi possível identificar sete proteínas e obter dados de massa para mais 106 spots em tetratirídeos, e uma proteína e 66 spots em tetratirídeos após indução de estrobilização. Quando o perfil eletroforético das amostras foi analisado, foram evidenciados 102 spots diferencialmente expressos. Através de LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 80 proteínas entre as duas fases, sendo 17 exclusivas de TT, 21 exclusivas de IN e 42 comuns a ambas. Essas proteínas foram caracterizadas funcionalmente em 18 grupos de acordo com o Dentre as proteínas identificadas, foram verificadas algumas com funções secundárias relacionadas ao controle de expressão gênica e algumas com papel relacionado à imunogenicidade do hospedeiro. Através da análise do emPAI das proteínas nos dois extratos, foram verificadas 12 proteínas com alterações quantitativas na expressão. Dessa forma, através desse trabalho, foi possível a caracterização preliminar dos perfis protéicos de tetratirídeos e induzidos, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na diferenciação de M. corti em nível proteômico.In Cestodes, the strobilation process leads to the development of the adult form from the larvae, giving a great adaptative advantage to these organisms by increasing the fecundity and spread. Mesocestoides corti has been used as a model for the study of varius aspects involved in strobilation. In this study we employed proteomic approaches in the study of tetrathyridia that had been exposed or not to segmentation induction treatment (IN and TT, respectively): two0dimensional gel electrophoresis (2DE) followed by MALDITOF MS or MS/MS and analysis of extracts by LC-ESI-Q-TOF MS/MS were performed. By 2DE-MALDI-TOF MS or MS/MS the proteomic profile of TT and IN on the pH range of 4-7 and 3-10 were defined. Seven proteins could be identified and mass data for further 106 spots were obtained for TT samples, and, from IN samples, one protein was identified and mass data was obtained for 66 spots. When 2DE profiles of TT and IN were compared, 102 spots were differentially expressed. Through LC-ESI-Q-TOF MS/MS, 80 proteins were identified within two samples, 17 exclusive from TT, 21 from IN and 42 common to both. These proteins were function characterized in 18 groups according to KOG. Among the proteins identified, we observed some with secondary roles related to gene expression control and some related to host immunogenicity. Through emPAI analysis, 12 showed quantitative differences in expression. Through this work, it was possible to preliminarily characterize the protein profiles of TT and IN and, thus, obtain some evidence of the mechanisms involved in the differentiation of M. corti in the proteomic level

Estabelecimento de linhagem celular de Mesocestoides corti (Platyhelmintes, Cestoda) a partir de indivíduos em processo de estrobilização

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Análise de linhagens celulares de Mesocestoides corti (Platyhelminthes: Cestoda) por microscopia eletrônica de varredura e transmissão

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Estabelecimento de linhagem celular de Mesocestoides corti (Platyhelmintes, Cestoda) a partir de indivíduos em processo de estrobilização

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