THE NON-CODING RNA, PRINS AFFECTS AIM2 INFLAMMASOME ACTIVATION IN KERATINOCYTES

The non-coding RNA, PRINS was previously described by our research group as a differentially expressed transcript in psoriatic uninvolved and healthy skin. The expression level of PRINS in cultured keratinocytes is altered after exposure to various stress factors and silencing of it decreases the viability of keratinocytes during stress stimulations suggesting its role in stress response of the cells. A potential stress signal in psoriatic skin may be the extracellular DNA, which activates the AIM2 inflammasome. The activated inflammasome cleaves the precursor proIL-1β form into mature, functioning IL-1β. The role of the AIM2 inflammasome and the IL-1β cytokine in psoriasis has been described recently. The aim of our study was to investigate if the PRINS non coding RNA affects the expression and activation of the inflammasome members and IL-1β in normal human epidermal keratinocytes (NHEK) after exposure to extracellular DNA. The expression of PRINS was transiently silenced by a vector based RNA interference method in cultured NHEK cells. Silenced and non-silenced NHEK cells were primed with the cytokines TNF-α and IFN-γ and transfected with the synthetic DNA analogue poly(dA:dT). The expression of PRINS and inflammasome members was detected by real-time RT-PCR and the secreted IL-1β was measured by ELISA. Poly(dA:dT) treatment caused a moderate increase in PRINS expression and IL-1β secretion as well, whereas priming with a combination of TNF-α and IFN-γ before poly(dA:dT) transfection resulted in a highly elevated PRINS expression and higher secreted IL-1β levels. The silencing of PRINS decreased the amount of secreted IL-1β, but did not affect the expression of the proIL-1β or AIM2. Our results suggest that the PRINS non-coding RNA regulates the IL-1β production of NHEK cells, but not through the regulation of proIL-1β expression, rather contributing to inflammasome-activation

PPIG, SFRS-18 és LUC7L3 Splicing regulárok vizsgálata szinkronizált, immortalizált sejtvonalakban és pikkelysömörben

Az mRNS érés (splicing) folyamatának vizsgálata egészen újfajta megközelítésnek számít a pikkelysömör kutatásban: a splicing mechanizmus e betegségben tapasztalt eltéréseiről mindössze néhány közlemény jelent meg napjainkig. Egy nemrég elvégzett microarray vizsgálatban több olyan gént is azonosítottunk, amelyek T-limfokin kezelés hatására eltérő kifejeződés változással reagálnak, majd bioinformatikai módszerekkel tovább elemeztük azokat. A gének között három olyat is találtunk (serine/ arginine-rich splicing factor 18 (SFRS18), peptydilpropyl isomerase G (PPIG), luc-7 like 3 (LUC7L3)) amelyek funkciója az mRNS érés szabályozásához kötődik. A PPIG, SFRS18 és LUC7L3 gének kifejeződését szinkronizált, immortalizált sejtvonalak segítségével követtük. Két független sejtvonal (HaCaT és HPV-KER) esetében is azt tapasztaltuk, hogy a splicing regulátorok kifejeződési mintázata jelentős hasonlóságot mutat. Ezekből az eredményekből arra következtettünk, hogy a gének upstream regulációja közös transzkripciós faktorok útján valósulhat meg. A splicing gének fehérjeszintű expresszióját is meghatároztuk Western blot technika segítségével. Előkísérleteinkben azt találtuk, hogy az SFRS18 és a PPIG expressziója fehérje szinten is hasonlóságot mutat a szinkronizált, immortalizált HPV-KER sejtekben. Az in vitro analízisek mellett egészséges és pikkelysömörös betegekből származó tünetes és tünetmentes mintákon is megvizsgáltuk, miként alakul a három fehérje expressziója. Kísérleteink során megmutattuk, hogy a PPIG fehérje expressziós mintázata és kifejeződésének mennyisége is jelentősen megváltozik: a tünetmentes bőrben a PPIG festődése fokozottnak mutatkozott és eloszlása is eltér az egészséges bőrétől. Eredményeink alapján úgy gondoljuk, hogy a splicing szabályozás eltéréseinek fontos szerepe lehet a pikkelysömör tüneteinek kifejlődésében. A splicing folyamatának további tanulmányozása nagyban segítheti a betegség komplex molekuláris hátterének megértését

Regulatory Networks Contributing to Psoriasis Susceptibility

The non-involved, healthy-looking skin of psoriatic pa- tients displays inherent characteristics that make it pro- ne to develop typical psoriatic symptoms. Our primary aim was to identify genes and proteins that are diffe- rentially regulated in the non-involved psoriatic and the normal epidermis, and to discover regulatory networks responsible for these differences. A cDNA microarray ex- periment was performed to compare the gene expression proiles of 4 healthy and 4 psoriatic non-involved epider- mis samples in response to T-cell lymphokine induction in organotypic cultures. We identiied 61 annotated genes and another 11 expressed transcripts that were differen- tially regulated in the psoriatic tissues. Bioinformatics analysis suggested that the regulation of cell morpholo- gy, development and cell death is abnormal, and that the metabolism of small molecules and lipids is differentially regulated in psoriatic epidermis. Our results indicate that one of the early steps of psoriasis pathogenesis may be the abnormal regulation of IL-23A and IL-1B genes in psoriatic keratinocytes. Key words: non-involved psoriatic epidermis; T-cell lymphokines; gene expression analysis; regulatory networks; IL-23A