A Diet Containing Soybean Oil Heated for Three Hours Increases Adipose Tissue Weight but Decreases Body Weight in C57BL/6 J Mice

Background: Our previous work showed that dietary oxidized linoleic acid given, as a single fatty acid, to LDL receptor knockout mice decreased weight gain as compared to control mice. Other studies have also reported that animals fed oils heated for 24 h or greater showed reduced weight gain. These observations, while important, have limited significance since fried foods in the typical human diet do not contain the extreme levels of oxidized lipids used in these studies. The main goal of this study was to investigate the effects of a diet containing soybean oil heated for 3 h on weight gain and fat pad mass in mice. Additionally, because PPARγ and UCP-1 mediate adipocyte differentiation and thermogenesis, respectively, the effect of this diet on these proteins was also examined. Findings: Four to six week old male C57BL/6 J mice were randomly divided into three groups and given either a low fat diet with heated soybean oil (HSO) or unheated soybean oil (USO) or pair fed for 16 weeks. Weight and food intake were monitored and fat pads were harvested upon the study’s termination. Mice consuming the HSO diet had significantly increased fat pad mass but gained less weight as compared to mice in the USO group despite a similar caloric intake and similar levels of PPARγ and UCP1. Conclusion: This is the first study to show that a diet containing soybean oil heated for a short time increases fat mass despite a decreased weight gain in C57BL/6 J mice. The subsequent metabolic consequences of this increased fat mass merits further investigation

Inflammasomes et épidermolyse bulleuse

National audienceResults Conclusion In this study, we demonstrated that keratinocytes derived from JEB and EBS patients exhibit increased expression of inflammasome components compared to NHEK suggesting a role of inflammasome(s) in EB pathogenesis. Our data highlight the importance of adhesion of the different skin layers to ensure keratinocyte homeostasis. As the dysregulation of inflammasome sensors leads to the excessive production of pro-inflammatory cytokines, it could contribute to the chronic inflammation observed in EB. Further studies on the type of inflammasome(s) implicated in EB and targeted therapeutic interventions to modulate inflammasome activation may hold promise for the development of anti-inflammatory therapies in EB.L'épidermolyse bulleuse (EB) regroupe un groupe de maladies génétiques rares du tissu conjonctif caractérisées par une fragilité de la peau et la formation de phlyctènes en raison de mutations dans les gènes codant pour des protéines de la membrane basale ou des protéines modulant l'organisation de la membrane basale. Malgré la variabilité phénotypique, toutes les formes d'EB présentent des défauts de réparation et de cicatrisation des tissus à la suite de traumatismes mineurs entraînant une inflammation locale. Le rôle des cytokines dans l'orchestration de la réparation et de l'intégrité des tissus dans l'EB a été peu étudié. Les infammasomes sont des complexes multiprotéiques qui contrôlent l'activation et la libération de cytokines pro-inflammatoires, à savoir l'interleukine-1β (IL-1β) et l'interleukine-18 (IL-18), par l'intermédiaire de la caspase-1. Notre objectif était d'étudier l'expression des composants de l'inflammasome et la sécrétion de cytokines dans les kératinocytes de patients atteints d'EB et de contrôles.Des kératinocytes primaires ont été dérivés de biopsies de personnes atteintes de différents types d'EB, dont l'épidermolyse bulleuse jonctionnelle (JEB) (N=4) et l'épidermolyse bulleuse simplex (EBS) (N=4). Les kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK) ont été utilisés comme contrôles. L'expression des principaux capteurs de l'inflammasome (NOD-like Receptors (NLRs)), des membres de la famille des caspases et des cytokines a été déterminée. En parallèle, la sécrétion de cytokines a été mesurée par ELISA.Nous avons observé des niveaux élevés d’expression de NLRP1, NLRP3, NLRP6, MEFV, NOD2, NLRC4, NLRP4, NLRP10 et NLRP12 dans les kératinocytes dérivés de patients JEB par rapport aux NHEK. L'expression de NLRP6, MEFV, AIM2 et NLRC4 était plus élevée chez les patients EBS que chez les NHEK. L'expression de CASP1 et CASP4 était plus élevée chez les patients JEB et EBS que chez les NHEK, mais était de niveau comparable chez les patients JEB et EBS. L'expression des gènes IL-1B et IL-18 était significativement plus élevée chez les patients JEB que chez les NHEK. La sécrétion d'IL-1β était significativement plus élevée chez les patients JEB que chez les EBS ou les contrôles. De façon inattendue, la sécrétion d'IL-18 était inférieure à la limite de détection dans tous les groupes.Nos résultats ont démontré que les kératinocytes dérivés des patients JEB et EBS présentent une expression accrue des composants de l'inflammasome par rapport aux NHEK, ce qui suggère un rôle de l'inflammasome dans l'EB. Le dérèglement des senseurs de l'inflammasome, qui entraîne une production excessive de cytokines pro-inflammatoires, pourrait donc contribuer à l'inflammation chronique observée dans l'EB. Des études complémentaires sur le type d'inflammasome(s) impliqué(s) dans l'EB et l’utilisation ciblée de modulateurs de l’activation des inflammasomes pourraient être prometteuses pour le développement de traitements anti-inflammatoires pour l'EB

Role of lipid phosphate phosphatase 3 in human aortic endothelial cell function

International audienceAims: Lipid phosphate phosphatase 3 (LPP3; PPAP2B) is a transmembrane protein dephosphorylating and thereby terminating signalling of lipid substrates including lysophosphatidic acid (LPA) and sphingosine-1-phosphate (S1P). Human LPP3 possesses a cell adhesion motif that allows interaction with integrins. A polymorphism (rs17114036) in PPAP2B is associated with coronary artery disease, which prompted us to investigate the possible role of LPP3 in human endothelial dysfunction, a condition promoting atherosclerosis. Methods and results: To study the role of LPP3 in endothelial cells we used human primary aortic endothelial cells (HAECs) in which LPP3 was silenced or overexpressed using either wild type or mutated cDNA constructs. LPP3 silencing in HAECs enhanced secretion of inflammatory cytokines, leukocyte adhesion, cell survival and migration and impaired angiogenesis, whereas wild-type LPP3 overexpression reversed these effects and induced apoptosis. We also demonstrated that LPP3 expression was negatively correlated with VEGF expression. Mutations in either the catalytic or the RGD domains impaired endothelial cell function and pharmacological inhibition of S1P or LPA restored it. LPA was not secreted in HAECs under silencing or overexpressing 2 LPP3. However the intra-and extracellular levels of S1P tended to be correlated with LPP3 expression, indicating that S1P is probably degraded by LPP3. Conclusions: We demonstrated that LPP3 is a negative regulator of inflammatory cytokines, leukocyte adhesion, cell survival and migration in HAECs, suggesting a protective role of LPP3 against endothelial dysfunction in humans. Both the catalytic and the RGD functional domains were involved and S1P, but not LPA, might be the endogenous substrate of LPP3

Role of lipid phosphate phosphatase 3 in human aortic endothelial cell function.

AIMS: Lipid phosphate phosphatase 3; type 2 phosphatidic acid phosphatase β (LPP3; PPAP2B) is a transmembrane protein dephosphorylating and thereby terminating signalling of lipid substrates including lysophosphatidic acid (LPA) and sphingosine-1-phosphate (S1P). Human LPP3 possesses a cell adhesion motif that allows interaction with integrins. A polymorphism (rs17114036) in PPAP2B is associated with coronary artery disease, which prompted us to investigate the possible role of LPP3 in human endothelial dysfunction, a condition promoting atherosclerosis. METHODS AND RESULTS: To study the role of LPP3 in endothelial cells we used human primary aortic endothelial cells (HAECs) in which LPP3 was silenced or overexpressed using either wild type or mutated cDNA constructs. LPP3 silencing in HAECs enhanced secretion of inflammatory cytokines, leucocyte adhesion, cell survival, and migration and impaired angiogenesis, whereas wild-type LPP3 overexpression reversed these effects and induced apoptosis. We also demonstrated that LPP3 expression was negatively correlated with vascular endothelial growth factor expression. Mutations in either the catalytic or the arginine-glycine-aspartate (RGD) domains impaired endothelial cell function and pharmacological inhibition of S1P or LPA restored it. LPA was not secreted in HAECs under silencing or overexpressing LPP3. However, the intra- and extra-cellular levels of S1P tended to be correlated with LPP3 expression, indicating that S1P is probably degraded by LPP3. CONCLUSIONS: We demonstrated that LPP3 is a negative regulator of inflammatory cytokines, leucocyte adhesion, cell survival, and migration in HAECs, suggesting a protective role of LPP3 against endothelial dysfunction in humans. Both the catalytic and the RGD functional domains were involved and S1P, but not LPA, might be the endogenous substrate of LPP3

Autoinflammatory Diseases: Germline vs. Somatic Mosaic Variations

National audienceDuring the period of 2018-2023, we have identified 10 pathogenic variations in the NLRP3 gene (Figure 1) including:-8 different mosaic variations in 11 independent patients-2 different germline variations in 3 independent patients. A total of 34 mosaic and 88 germline NLRP3 variations have been reported in the literature to date (Figure 1). Clinically, NLRP3 mosaic variations are associated with various NLRP3-AID phenotypes ranging from late-onset urticaria in the context of MWS to CINCA. Conclusions This study emphasizes the high frequency of somatic mosaic variations in NLRP3-AIDs. The phenotypic spectrum of NLRP3-AIDs appears to be related to both the germinal/mosaic status and the localization in cryopyrin of the underlying variations. Mosaic variations in the NLRP3, TNFRSF1A, and NLRC4 genes can cause symptoms even when present at very low allele frequencies (below 5%). Furthermore, misdiagnosis may occur due to the low allele frequency of mosaic variations

Expression tardive d’une maladie autoinflammatoire : identification et caractérisation fonctionnelle d’une variation de NLRC4 en mosaïque

National audienceIncreased plasma levels of the pro-inflammatory cytokines IL1β, TNFα, IL6 and IL18 during flares, with sustained elevated levels of IL18 during patient's remission The p.Thr133Ile NLRC4 variation induced increased inflammasome activation The p.Thr133Ile NLRC4 variant activated the NFκB pathway Clinical Features The patient is a 28-year-old man with a chronic psychosis since the age of 18 who has been experiencing: Conclusion In this study, we identified a novel mosaic variation of NLRC4 in an adult patient with an autoinflammatory disease. Functional studies demonstrated the gain-of-function pathogenic effect of the identified variation on inflammation. NLRC4 acts as an adaptor protein that is recruited by NAIP to initiate the formation of the NLRC4-NAIP inflammasome upon recognition of bacterial elements. The NLRC4-NAIP inflammasome requires the adaptor protein ASC (apoptotic speck protein containing a CARD) to recruit the caspase-1 protease, which cleaves the pro-interleukins (pro-IL1b and pro-IL18), resulting in the production of their active forms (IL1b and IL18) and triggering the inflammatory response.Introduction. Les maladies autoinflammatoires (MAI) débutent en règle dans l'enfance par des crises fébriles spontanément résolutives, accompagnées d'une inflammation de la peau, des séreuses et des synoviales. Les mécanismes physiopathologiques touchent les facteurs de l'immunité innée, tels que les inflammasomes qui sont des complexes multiprotéiques impliqués dans l'activation des voies de l’inflammation. NLRC4, qui code pour un composant essentiel de l’inflammasome NLRC4, a été impliqué dans des formes très rares et sévères de MAI survenant majoritairement chez l’enfant et caractérisées le plus souvent par une entérocolite et pouvant se compliquer d’un syndrome d’activation macrophagique (SAM). Seules 2 variations en mosaïque ont été rapportées chez des patients adultes. L’objectif de cette étude était d’identifier les bases moléculaires d’une MAI ayant débuté à l’âge adulte par des crises inflammatoires sévères associant une fièvre élevée et des douleursarticulaires et abdominales sans syndrome d’activation macrophagique.Méthodes. L’ADN génomique leucocytaire du patient a été analysé par le séquençage (NGS) profond (1100 X) d’un panel de gènes de MAI. L’évaluation fonctionnelle de la variation identifiée dans NLRC4 a été réalisée après expression de la protéine recombinante correspondante dans une lignée HEK293T exprimant différent partenaires protéiques (ASC et Caspase1) permettant la détection d’agrégats (« specks ») témoins de l’activation de l’inflammasome NLRC4, et transfectée par un gène rapporteur de la voie NF-kB. Les taux plasmatiques de cytokines pro-inflammatoires ont été déterminés par ELISA.Résultats. Le patient, un jeune homme de 23 ans, présentait une psychose non étiquetée depuis l’âge de 19 ans. Depuis ses 21 ans, des crises inflammatoires sévères sont rapportées sans qu’un lien direct entre la maladie psychiatrique et les crises inflammatoires n’ait pu être établi. L’étude NGS par séquençage profond a montré l’existence d’une variation en mosaïque de NLRC4, c.398C>T p.(Thr133Ile), l’allèle muté étant représenté à 5% au sein de l’ADN leucocytaire. L’étude de l’impact de la variation p.(Thr133Ile) sur la voie NF-kB a révélé une augmentation significative de l'activité NF-kB dans les cellules exprimant la forme mutée de la protéine par rapport à celles exprimant la forme sauvage. Comparée à l’impact de la version normale de NLRC4 sur la formation de specks, la variationp.(Thre133Ile) induit une augmentation du nombre de specks. Par ailleurs, la quantification des cytokines pro-inflammatoires a montré des taux plasmatiques élevés de IL18 compatibles avec une activation de l’inflammasome NLRC4.Conclusion. Cette étude a permis d’identifier une nouvelle variation de NLRC4 en mosaïques’exprimant à l’âge adulte, sans syndrome d’activation macrophagique, et dont l’effet pathogène gain de fonction a été démontré par des études fonctionnelles sur deux voies de l’inflammation

Identification et caractérisation fonctionnelle de mutations de lyn dans une urticaire auto-inflammatoire syndromique

International audienceLes Maladies auto-inflammatoires (MAI) sont liées à des anomalies génétiques de facteurs impliqués dans le système immunitaire et caractérisées par des accès inflammatoires fébriles récurrents spontanément résolutifs. LYN code pour une protéine tyrosine kinase, dont l’activation est régulée par l’état de phosphorylation de 2 de ses tyrosines (Y397 et Y508). Dans un modèle murin, le knock-in Y508F conduit à une hyperactivation de Lyn et au développement d’une glomérulonéphrite autoimmune sévère. A ce jour, 2 patients avec une MAI sévère de début néonatal et présentant chacun une variation de novo du dernier exon de LYN (Y508* et Y508F), non explorées sur le plan fonctionnel, ont été rapportés lors de conférences spécialisées. MethodesEtude NGS d’un panel de gènes de MAI chez une patiente présentant une forme néonatale sévère de MAI. Etudes fonctionnelles in vitro des variations LYN : étude de la phosphorylation de Lyn par western blot et activation de la voie NF-kB par essai luciférase dans la lignée HEK293T. ConclusionIl s’agit de la 1ère démonstration de la pathogénicité des 3 variations de LYN rapportées chez l’homme à ce jour, et ce par effet gain-de-fonction.Les 3 variations (Y508H, Y508F et Y508*) affectent le même résidu Tyrosine de la protéine, soulignant le rôle critique de cet acide aminé dans la régulation de l’activité de Lyn.L’analyse fine du phénotype de ce patient et sa comparaison avec le phénotype des 2 précédents patients rapportés permet de définir un spectre phénotypique de cette MAI associée à des variations gain-de-fonction de LYN

Identification et caractérisation fonctionnelle de mutations de lyn dans une urticaire auto-inflammatoire syndromique

International audienceLes Maladies auto-inflammatoires (MAI) sont liées à des anomalies génétiques de facteurs impliqués dans le système immunitaire et caractérisées par des accès inflammatoires fébriles récurrents spontanément résolutifs. LYN code pour une protéine tyrosine kinase, dont l’activation est régulée par l’état de phosphorylation de 2 de ses tyrosines (Y397 et Y508). Dans un modèle murin, le knock-in Y508F conduit à une hyperactivation de Lyn et au développement d’une glomérulonéphrite autoimmune sévère. A ce jour, 2 patients avec une MAI sévère de début néonatal et présentant chacun une variation de novo du dernier exon de LYN (Y508* et Y508F), non explorées sur le plan fonctionnel, ont été rapportés lors de conférences spécialisées. MethodesEtude NGS d’un panel de gènes de MAI chez une patiente présentant une forme néonatale sévère de MAI. Etudes fonctionnelles in vitro des variations LYN : étude de la phosphorylation de Lyn par western blot et activation de la voie NF-kB par essai luciférase dans la lignée HEK293T. ConclusionIl s’agit de la 1ère démonstration de la pathogénicité des 3 variations de LYN rapportées chez l’homme à ce jour, et ce par effet gain-de-fonction.Les 3 variations (Y508H, Y508F et Y508*) affectent le même résidu Tyrosine de la protéine, soulignant le rôle critique de cet acide aminé dans la régulation de l’activité de Lyn.L’analyse fine du phénotype de ce patient et sa comparaison avec le phénotype des 2 précédents patients rapportés permet de définir un spectre phénotypique de cette MAI associée à des variations gain-de-fonction de LYN

Proteasomal degradation of NOD2 by NLRP12 in monocytes promotes bacterial tolerance and colonization by enteropathogens

Mutations in nucleotide-binding oligomerization domain protein 12 (NLRP12) are known to effect inflammatory processes. Here the authors show that NLRP12-mediated proteasomal degradation of NOD2 in monocytes promotes bacterial tolerance and colonisation in a model of enteric infection