Charakterisierung der Zellen des Glomus Caroticum

In dieser Arbeit wurde gezeigt, dass die Zellen des Glomus caroticum der Ratte alle notwendigen Komponenten zur Biosynthese, Speicherung und Freisetzung von Dopamin und Histamin besitzen und diese Transmitter bei Hypoxie freisetzen können. Erstmals wurde hier Histamin als Transmitter im Glomus caroticum nachgewiesen: es wurde gezeigt, dass die Sensorzellen des Glomus caroticum das Histamin synthetisierende Enzym exprimieren. Die Speicherung von Histamin in Vesikeln erfolgt mit Hilfe eines vesikulären Monoamintransporters (VMAT2). Bisher bekannte immunhistochemische Ergebnisse über die Expression dieses Transportproteins in den Sensorzellen konnten bestätigt und mittels RT-PCR-Untersuchungen belegt werden. Ferner wurde nachgewiesen, dass die Sensorzellen auch über wichtige Komponenten des Exozytoseapparates verfügen. Darüber hinaus zeigten RT-PCR- Untersuchungen, dass im Glomus caroticum die mRNA der Histaminrezeptoren H1, H2 und H3 exprimiert wird. Die Menge an Histamin im Glomus caroticum wurde mittels Radioimmunoassay bestimmt. Im Glomus caroticum ist mehr Histamin enthalten als in anderen Geweben der Ratte, und die Menge an Histamin ist um ein Vielfaches größer als die Menge des im Glomus caroticum enthaltenen Dopamins. In vitro Experimente zeigten, dass die Freisetzung von Histamin aus dem Glomus caroticum durch Hypoxie verstärkt wird. Eine vermehrte Freisetzung bei Hypoxie konnte amperometrisch auch für Dopamin bestätigt werden. Es wurde hier zum ersten Mal beschrieben, dass ein Zelltyp zwei verschiedene Amine als Transmitter nutzt. Damit spielt sowohl Dopamin als auch Histamin eine wesentliche Rolle bei der Kontrolle der Sauerstoffversorgung des Organismus und, aufgrund der Lage des Glomus caroticum, besonders des Gehirns. Mit dem Nachweis von Expression und Aktivität des limitierenden Enzyms für die Tetrahydrobiopterin-Synthese wurde gezeigt, dass das Glomus caroticum sämtliche für die Dopaminsynthese notwendigen Schritte selbst durchführen kann. Damit erfüllt das Glomus caroticum die notwendigen Eigenschaften für eine erfolgreiche Autotransplantation in das Striatum bei Morbus Parkinson

Stress

01 Stress hat einen schlechten Ruf: Er raubt uns Schlaf und Energie. Und er lässt sich nicht einfach abschalten. Trotzdem begeben wir uns immer wieder in stressige Situationen – und das sogar freiwillig. Warum das so ist und was das Ganze mit Säbelzahntigern zu tun hat? Redakteurin Marie hat zwei Stress-Expertinnen gefragt. 02 2018 verbrachte die Gruppe der 14- bis 64-Jährigen weltweit durchschnittlich rund 2 Stunden und 20 Minuten pro Tag mit Social Media (Statista). Tendenz: steigend. Viele gebrauchen Facebook, Snapchat und Co. als harmlosen Zeitvertreib. Für einige kann die Social-Media-Nutzung jedoch zum richtigen Problem werden. Etwa dann, wenn sie sich von den dort präsentierten Schönheitsidealen ernsthaft unter Druck gesetzt fühlen. So wie für Mali-Janice Paede. Für sie bedeutet Social Media vor allem eins: Stress. Ein kreativer Erfahrungsbericht. 03 Jeder von uns hat täglich mit Stress zu kämpfen, aber was, wenn es einfach zu viel für einen einzelnen wird? Dann kann es zu vielen ernsthaften Krankheiten kommen: eine der häufigsten ist die Panikstörung. Max litt genau daran: Wieder und wieder musste er sich durch plötzliche Panikattacken kämpfen. Kim Sichert hat mit ihm gesprochen und zunächst gefragt, wie sich das für ihn angefühlt hat: 04 Welche schlimmen Auswirkungen Stress hat, haben wir in den vorherigen Beiträgen gehört. Wir wollen euch heute auch Tipps mitgeben, damit es erst gar nicht so weit kommt, dass ihr euch gestresst fühlt. Sport zum Beispiel, ist eine gute Möglichkeit, um Stress zu verhindern. Aber welcher Sport ist ideal dafür? Und muss ich wirklich drei Mal pro Woche meine Laufschuhe schnüren, um gegen den Unistress anzukämpfen? Patrick Nägele hat zwei Expertinnen aufgesucht, damit ihr bald entspannter durch stressige Phasen kommt. 05 Den wenigsten macht Lernen Spaß. Oft schiebt man es auf und gerät dann kurz vor der Prüfung in Stress, weil man in kurzer Zeit auf einmal sehr viel in seinen Kopf bekommen muss. Damit du künftig besser durch die Lernphase kommst, dir nicht so einen Druck machst und ganz entspannt in die Prüfung gehen kannst, lernst du in diesem Beitrag die WOOP-Methode kennen. Was das ist erklärt dir Melissa Körner. Sie hat eine Studentin getroffen, WOOP getestet hat. 06 Es gibt viele Ansätze Stress zu reduzieren und vorzubeugen. Eine Methode, die immer beliebter wird, ist das Achtsamkeitstraining. Deshalb hat Reporterin Pia Röpke sich mit Gabriela Voß getroffen. Gabriela Voß ist Coach für Achtsamkeit, Stressbewältigung und Kommunikation. Für diese Sendung leitet sie erstmals eine Meditation „on air“ an. So können die Zuhörenden am eigenen Ohr erleben, wie Achtsamkeit zur Entspannung beitragen kann

HIV-1 Nef-mediated downregulation of CD155 results in viral restriction by KIR2DL5+ NK cells.

Antiviral NK cell activity is regulated through the interaction of activating and inhibitory NK cell receptors with their ligands on infected cells. HLA class I molecules serve as ligands for most killer cell immunoglobulin-like receptors (KIRs), but no HLA class I ligands for the inhibitory NK cell receptor KIR2DL5 have been identified to date. Using a NK cell receptor/ligand screening approach, we observed no strong binding of KIR2DL5 to HLA class I or class II molecules, but confirmed that KIR2DL5 binds to the poliovirus receptor (PVR, CD155). Functional studies using primary human NK cells revealed a significantly decreased degranulation of KIR2DL5+ NK cells in response to CD155-expressing target cells. We subsequently investigated the role of KIR2DL5/CD155 interactions in HIV-1 infection, and showed that multiple HIV-1 strains significantly decreased CD155 expression levels on HIV-1-infected primary human CD4+ T cells via a Nef-dependent mechanism. Co-culture of NK cells with HIV-1-infected CD4+ T cells revealed enhanced anti-viral activity of KIR2DL5+ NK cells against wild-type versus Nef-deficient viruses, indicating that HIV-1-mediated downregulation of CD155 renders infected cells more susceptible to recognition by KIR2DL5+ NK cells. These data show that CD155 suppresses the antiviral activity of KIR2DL5+ NK cells and is downmodulated by HIV-1 Nef protein as potential trade-off counteracting activating NK cell ligands, demonstrating the ability of NK cells to counteract immune escape mechanisms employed by HIV-1

The proteasomal subunit Rpn6 is a molecular clamp holding the core and regulatory subcomplexes together

Proteasomes execute the degradation of most cellular proteins. Although the 20S core particle (CP) has been studied in great detail, the structure of the 19S regulatory particle (RP), which prepares ubiquitylated substrates for degradation, has remained elusive. Here, we report the crystal structure of one of the RP subunits, Rpn6, and we describe its integration into the cryo-EM density map of the 26S holocomplex at 9.1 Å resolution. Rpn6 consists of an α-solenoid-like fold and a proteasome COP9/signalosome eIF3 (PCI) module in a right-handed suprahelical configuration. Highly conserved surface areas of Rpn6 interact with the conserved surfaces of the Pre8 (alpha2) and Rpt6 subunits from the alpha and ATPase rings, respectively. The structure suggests that Rpn6 has a pivotal role in stabilizing the otherwise weak interaction between the CP and the RP

Binding of KIR2DL3-Fc and inhibition of primary KIR2DL3+ NK cells is significantly stronger when target cells are pulsed with the T_Gag303V variant peptide.

<p>(A) Representative dot plots of KIR2DL3-Fc staining of 721.221-ICP47-C*03:04 cells pulsed with positive control peptide GAL, negative control peptide GKL, T_Gag303 wild-type peptide, or T_Gag303V variant peptide. Staining was measured by flow cytometry after addition of a secondary PE-conjugated anti-IgG antibody. All cells express GFP, indicating successful transduction of ICP47 and thus optimal blockade of TAP. (B) Quantification of KIR2DL3 binding expressed as percent of cells binding KIR2DL3-Fc. Means of six independent experiments, with error bars representing SD, are shown. Binding of KIR2DL3-Fc was significantly stronger to 721.221-ICP47-C*03:04 cells pulsed with the variant T_Gag303V (YVDRFFK<u>V</u>L) peptide than to those pulsed with wild-type (YVDRFFK<u>T</u>L; <i>p</i> = 0.002) or T_Gag303A (YVDRFFK<u>A</u>L; <i>p</i> = 0.002) peptide. (C and D) Degranulation of primary KIR2DL3+ (C) and KIR2DL3− (D) NK cells measured as CD107a expression after incubation with 721.221-ICP47-C*03:04 cells pulsed with T_Gag303 wild-type and T_Gag303A and T_Gag303V variant peptides. The percentage of CD107a+ NK cells in response to the respective peptide is normalized to the percentage of CD107a+ NK cells for KIR2DL3− and KIR2DL3+ NK cell subsets after co-incubation with target cells pulsed with GKL (GAVDPLLKL) control peptide. 721.221-ICP47-C*03:04 target cells presenting YVDRFFK<u>V</u>L significantly inhibit degranulation of KIR2DL3+ NK cells compared to targets pulsed with YVDRFFK<u>T</u>L (<i>p</i> = 0.0121) or YVDRFFK<u>A</u>L (<i>p</i> = 0.0019). The different peptide variants had no detectable effect on CD107a expression in KIR2DL3− NK cells. All <i>p</i>-values stated are adjusted for multiplicity of testing. Primary NK cells from nine different healthy <i>KIR2DL3+</i> participants were tested. (E) Sensogram of KIR2DL3 dimeric analyte binding to biotinylated HLA-C*03:04/YVDRFFKTL, HLA-C*03:04/YVDRFFKAL, and HLA-C*03:04/YVDRFFKVL monomers on a Streptavidin chip; an empty well served as negative control. The sensogram data are normalized to the amount of respective HLA monomer immobilized on the chip by HC10 antibody. Each fit was obtained using double reference subtraction and is shown as a black line. Affinity of the KIR2DL3/HLA-C*03:04/YVDRFFKVL protein-protein interaction was highest. *<i>p</i> < 0.05; **<i>p</i> < 0.01.</p

Structural details of the HLA/peptide/KIR three-way complex.

<p>(A) Overall structure of the HLA/peptide/KIR complex. The peptide is buried in the HLA class I binding grove, while KIR interacts with both helices of HLA class I as well as the C-terminus of the peptide. (B) Comparison of the interactions around the mutated viral residue (top: in fat sticks; bottom: in spheres). The YVDRFFK<u>T</u>L (YTL) wild-type peptide includes a hydrogen bond between the side-chain oxygens of Thr₈ and Asn₈₀, while the YVDRFFK<u>V</u>L (YVL) variant improves the hydrophobic packing against Val₇₆. Interestingly, Asn₈₀ participates in a hydrogen bond expected to confer allotype specificity to KIR2Ds.</p

KIR footprints in HIV-1 clade C sequence.

<p>^aHIV-1 consensus sequence in 392 study participants.</p><p>^bDominant variant.</p><p>^cConsensus T was also significantly associated with the lack of encoding <i>KIR2DL3/HLA-C*03</i>:<i>04</i> (<i>q</i> = 0.1).</p><p>^dVariant amino acid A at Gag₃₀₃ was significantly associated to an <i>HLA-C*03</i>:<i>04</i> genotype alone (<i>p</i> < 0.001), but not in combination with KIR2DL3.</p><p>KIR footprints in HIV-1 clade C sequence.</p

Equal HLA-C*03:04 stabilization on TAP-blocked 721.221-ICP47-C*03:04 cell line with HIV-1 p24 Gag T_Gag303 wild-type and variant peptides.

<p>(A) Representative histograms of HLA-C*03:04 stabilization with T_Gag303 wild-type and T_Gag303A and T_Gag303V variant peptides compared to addition of no peptide (−). HLA-C*03:04 surface levels were determined by flow cytometry using an anti-pan—HLA class I antibody (clone W6/32). Peptides were added at a saturating concentration of 100 μM. (B) Quantification of HLA-C*03:04 stabilization in the presence of T_Gag303 wild-type and T_Gag303A and T_Gag303V variant peptides, as well as positive endogenous control peptides for HLA-C*03:04 stabilization (GAVDPLLAL and GAVDPLLKL) and a non-HLA-C*03:04-stabilizing influenza-derived control peptide (Flu, ILRGSVAHK). Data represent mean of five experiments with error bars indicating the SD. Relative fluorescence intensity (RFI) was calculated as the gMFI of the sample divided by the gMFI of 721.221-ICP47-C*03:04 cells stained in the absence of peptide.</p