Atividade in vitro, individual ou em combinação, de voriconazol, itraconazol e terbinafina contra isolados brasileiros de Pythium insidiosum

Pythium insidiosum,  classificado no Reino Stramenopila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em eqüinos, caninos e humanos. As atividades in vitro do voriconazol, itraconazol e terbinafina, sozinhos ou em combinação, foram estudadas empregando uma metodologia de macrodiluição baseada na técnica M 38-A (CLSI, 2002) contra 30 isolados clínicos de Pythium insidiosum, com o objetivo de avaliar novas medidas para tratar infecções causadas por este agente utilizando quimioterapia. As combinações (terbinafina e voriconazol; terbinafina e itraconazol) tiveram suas interações avaliadas utilizando a técnica de checkerboard, seguindo o modelo da macrodiluição em caldo. Terbinafina foi ativa quando testada sozinha, mostrando uma concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima < 8,0 mg/L para todos os isolados. Voriconazol e itraconazol foram inativos contra os isolados testados, quando usados sozinhos. A combinação de voriconazol com terbinafina foi sinérgica contra 17% das amostras e indiferente em 25 (83%) amostras. O uso concomitante de terbinafina e itraconazol foi sinérgico contra 17% e indiferente contra 83% das amostras. As interpretações de ambas as interações foram equivalentes para 26 isolados (87%): vinte e três foram indiferentes e três mostraram efeito sinérgico. Antagonismo não foi observado. A terapia combinada é uma alternativa à monoterapia, especialmente para pacientes com infecções invasivas, que são difíceis de tratar. Estes resultados precisam ser correlacionados com relatos clínicos; e ensaios in vivo, usando modelos animais, podem preencher a lacuna entre avaliações clínicas e avaliações in vitro das drogas

Suscetibilidade in vitro e in vivo da terbinafina, itraconazol, caspofungina, ibuprofeno e fluvastatina, em combinações duplas e triplas, frente a Pythium insidiosum

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.Pythium insidiosum, a fungus-like microorganism of the Stramenopila kingdom, is the etiological agent of pythiosis in mammals, a difficult disease to treat. The present study investigated the in vitro inhibitory activity of terbinafine, itraconazole, caspofungin, fluvastatin and ibuprofen against 15 isolates of Brazilian P. insidiosum in double and triple combinations and determined in vivo correlations using rabbits with experimental pythiosis. Furthermore, this study aimed to report the paradoxical growth of P. insidiosum strains when submitted to in vitro susceptibility tests with caspofungin. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by the Clinical and Laboratory Standards Institute M 38-A2 protocol, and the in vitro interactions were evaluated using a checkerboard microdilution method. For the in vivo study, 20 rabbits inoculated with P. insidiosum zoospores were divided into four groups: group 1 was treated with terbinafine and itraconazole; group 2 was treated with terbinafine, itraconazole and fluvastatin; group 3 was treated with terbinafine and caspofungin; and group 4 was the control group. Combinations of terbinafine with caspofungin or ibuprofen were synergistic for 47% of the isolates, and antagonism was not observed in any of the double combinations. The triple combinations were mostly indifferent, but synergism and antagonism were also observed. The paradoxical growth was observed in 50% of the isolates tested at concentrations above the minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 16 to 128 mg/ml. In the in vivo study, the histological aspect of the lesions was similar among the groups, but group 2 showed the lowest amount of hyphae and differed significantly from the other groups. The best in vivo results were observed using the triple combination of terbinafine, itraconazole and fluvastatin (group 2). The present study was the first study of in vitro and in vivo susceptibility of P. insidiosum using combinations of three drugs, and the phenomenon of paradoxical effect involving oomycetes was described here for the first time

Pitiose: uma micose emergente

A pitiose é uma enfermidade piogranulomatosa do tecido subcutâneo causada pelo  Pythium insidiosum, microrganismo classificado no Reino Straminipila, Classe Oomycetes, Ordem Pythiales, Família Pythiaceae, Gênero Pythium e espécie P. insidiosum. Acomete várias espécies animais, porém a doença é mais freqüentemente observada em equinos, podendo, também, afetar os humanos. Epidemiologicamente a pitiose está intimamente relacionada com o contato dos animais e humanos com águas contaminadas pelo agente, onde produz zoosporos móveis que constituem-se na forma infectante do Pythium insidiosum. A enfermidade em eqüinos caracteriza-se principalmente pelo desenvolvimento de lesões subcutâneas ulcerativas e granulomatosas de aparência tumoral com presença de massas branco-amareladas, chamadas internacionalmente de “kunkers”. Já nas outras espécies a formação dos “kunkers” não é observada. O diagnóstico de pitiose é realizado pelos sinais clínicos, histopatologia, isolamento e identificação do agente, técnicas sorológicas como imunodifusão, ELISA e imunohistoquímica e mais recentemente por PCR. A doença destaca-se pela dificuldade no tratamento, uma vez que as drogas antifúngicas disponíveis não mostram eficiência contra o Pythium insidiosum. Atualmente a utilização de imunoterápicos constitui-se na alternativa de terapia em eqüinos, com resulatados animadores. Este trabalho tem por objetivos revisar os aspectos taxonômicos, epidemiológicos clínicos e histopatológicos da pitiose em diversas espécies. Também são abordados as técnicas diagnósticas e as perspectivas imunoterápicas

Dermatophytes isolated from dogs and cats suspected of dermatophytosis in Southern Brazil

Dermatophytosis which is characterized by a superficial infection confined to keratinised tissues, is the most common fungal disease in small animal veterinary medicine. It is unreliable to diagnose dermatophytosis on the basis of clinical signs alone, not only for the variable nature of the dermatological findings but also because there are several other skin diseases which mimic the typical fungal lesion (circular lesions with alopecia). The present study reports laboratory results of an extensive survey evaluating fungal and parasitic aetiology of skin diseases through the analysis of 1,240 fur, nails and skin scraping specimens from dogs and cats with clinical suspicion of dermatophytosis. Samples collected in several veterinary clinics of the Santa Catarina, Paraná and Rio Grande d o Sul states, mainly of the Santa Maria city in Rio Grande do Sul, were processed at the Mycology Research Laboratory of the Federal University of Santa Maria, Southern Brazil, between 1998 and 2003. Among canine and feline samples, the percentages of positive dermatophyte specimens were 10.2% and 27.8%, respectively. The most prevalent fungal specie in both cats and dogs was Microsporum canis, which was isolated in 68.5% of the positive cultures for dermatophytes in dogs’ samples, being the only species recovered from cats’ cultures. Malassezia pachydermatis was the most commonly isolated yeast from the skin of dogs. Acari, mainly Demodex canis, were found in 5.0% of all samples with suspected diagnosis of dermatophytosis

Fungal microbiota isolated from healthy pig skin

Background:   Researches have been developed to observe the normal microbiota of different animal species. This subject is of major importance for the control of potential infection risks. Fungi can be found in various substrates, foodstuffs (cereals, meat, milk, vegetables) and also in the skin, mucosae, respiratory and gastrointestinal tracts of animals. With the dissemination of immunosuppressive diseases in swine herds over the last years, the number of concomitant diseases caused by opportunist microorganisms is gradually increasing in literature. The objective of this study was to determine the microbiota of pig skin with no apparent lesions. Materials, Methods and Results: A number of 261 pigs from 11 swine farms located in six municipalities of the State of Rio Grande do Sul, in Southern Brazil, were used for the study, in the period from April 2005 to April 2006. After being cleaned with water and 70% ethanol, skin samples were collected by friction of circular and sterile hair brushes against the posterior ventral region of the animals, on an area of no more than 10 cm. After sample collection, the brushes were wrapped with the same aluminium foil used in the sterilization process. Within the next 24 hours, the material was streaked onto agar and incubated at 25°C to 30ºC for up to four weeks. Micromorphology was used for mold identification purposes, and the process employed lactophenol cotton blue staining. Whenever an initial identification was not possible due to the absence of characteristic structures, the isolate would be picked onto Potato agar to stimulate the development of reproductive structures. Yeasts and yeast-like fungi were characterized by physiological routine assays and differential tests, such as chlamydoconidia production and germ tube tests, and also by cultivation in HiCrome Agar. Isolates that produced arthroconidia were classified into the genera Geotrichum or Trichosporon. A number of 501 isolates were obtained, of which 297 were molds and 204 yeasts. Among the molds, the hyalohyphomycetes prevailed with 211 isolates, followed by 53 pheohyphomycetes and 33 zygomycetes. Two hundred and four yeast samples were identified as Candida albicans and Trichosporon spp., in addition to other far less frequent species, such as C. glabrata. Discussion: The varied range of species isolated from the skin of pigs in this study can be explained by a number of factors, such as type of management, swine farm installations and environmental variations. The diversity of the microbiota found in relation to other studies demonstrates the necessity of this kind of research, because knowledge of the prevailing microbiota in a determined region facilitates the evaluation of potential impacts of sporadic or emerging new fungal diseases in herds, particularly in immunosuppressed animals. The observation of 17 Scopulariopsis brevicaulis isolates is worth pointing out, as its presence, associated with environmental and host factors, may favor the infection of pigs and the clinical development of the Dermatitis in the species. Knowledge of the diversity of mycological agents that are in direct contact with healthy animals may assist the diagnosis of exotic etiologies, particularly in animals with immunosuppressive diseases, considering that these are being diagnosed in swine with an increasing frequency

Suscetibilidade in vitro e in vivo da terbinafina, itraconazol, caspofungina, ibuprofeno e fluvastatina, em combinações duplas e triplas, frente a Pythium insidiosum

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.Pythium insidiosum, a fungus-like microorganism of the Stramenopila kingdom, is the etiological agent of pythiosis in mammals, a difficult disease to treat. The present study investigated the in vitro inhibitory activity of terbinafine, itraconazole, caspofungin, fluvastatin and ibuprofen against 15 isolates of Brazilian P. insidiosum in double and triple combinations and determined in vivo correlations using rabbits with experimental pythiosis. Furthermore, this study aimed to report the paradoxical growth of P. insidiosum strains when submitted to in vitro susceptibility tests with caspofungin. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by the Clinical and Laboratory Standards Institute M 38-A2 protocol, and the in vitro interactions were evaluated using a checkerboard microdilution method. For the in vivo study, 20 rabbits inoculated with P. insidiosum zoospores were divided into four groups: group 1 was treated with terbinafine and itraconazole; group 2 was treated with terbinafine, itraconazole and fluvastatin; group 3 was treated with terbinafine and caspofungin; and group 4 was the control group. Combinations of terbinafine with caspofungin or ibuprofen were synergistic for 47% of the isolates, and antagonism was not observed in any of the double combinations. The triple combinations were mostly indifferent, but synergism and antagonism were also observed. The paradoxical growth was observed in 50% of the isolates tested at concentrations above the minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 16 to 128 mg/ml. In the in vivo study, the histological aspect of the lesions was similar among the groups, but group 2 showed the lowest amount of hyphae and differed significantly from the other groups. The best in vivo results were observed using the triple combination of terbinafine, itraconazole and fluvastatin (group 2). The present study was the first study of in vitro and in vivo susceptibility of P. insidiosum using combinations of three drugs, and the phenomenon of paradoxical effect involving oomycetes was described here for the first time

Atividade in vitro, individual ou em combinação, de voriconazol, itraconazol e terbinafina contra isolados brasileiros de Pythium insidiosum.

Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenopila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em eqüinos, caninos e humanos. As atividades in vitro do voriconazol, itraconazol e terbinafina, sozinhos ou em combinação, foram estudadas empregando uma metodologia de macrodiluição baseada na técnica M 38-A (CLSI, 2002) contra 30 isolados clínicos de Pythium insidiosum, com o objetivo de avaliar novas medidas para tratar infecções causadas por este agente utilizando quimioterapia. As combinações (terbinafina e voriconazol; terbinafina e itraconazol) tiveram suas interações avaliadas utilizando a técnica de checkerboard seguindo o modelo da macrodiluição em caldo. Terbinafina foi ativa quando testada sozinha, mostrando uma concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima ≤ 8,0 mg/L para todos os isolados. Voriconazol e itraconazol foram inativos contra os isolados testados quando usados sozinhos. A combinação de voriconazol com terbinafina foi sinérgica contra 17% das amostras e indiferente em 25 (83%) amostras. O uso concomitante de terbinafina e itraconazol foi sinérgico contra 17% e indiferente contra 83% das amostras. As interpretações de ambas as interações foram equivalentes para 26 isolados (87%): vinte e três foram indiferentes e três mostraram efeito sinérgico. Antagonismo não foi observado. A terapia combinada é uma alternativa à monoterapia, especialmente para pacientes com infecções invasivas que são difíceis de tratar. Estes resultados precisam ser correlacionados com relatos clínicos; e ensaios in vivo, usando modelos animais, podem preencher a lacuna entre avaliações clínicas e avaliações in vitro das drogas.Pythium insidiosum is classified in the kingdom Stramenopila, class Oomycetes. It causes pythiosis, a disease mainly diagnosed in horses, dogs, and humans. In order to evaluate new approaches to treat infections caused by Pythium insidiosum using chemotherapy, the in vitro activities of voriconazole, itraconazole and terbinafine, alone or in combination, against 30 clinical isolates were studied employing a macrodilution methodology based on the M 38-A technique (CLSI, 2002). The combinations (terbinafine plus voriconazole and terbinafine plus itraconazole) had their interactions evaluated using the checkerboard technique following the broth macrodilution design. Terbinafine was active when used as a single drug, showing minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration ≤ 8,0 mg/L for all the isolates. Voriconazole and itraconazole were inactive against the isolates tested when used alone. The combination of voriconazole with terbinafine was synergic against 17% of the strains and indifferent on 25 (83%) strains. The concomitant use of terbinafine and itraconazole was synergic against 17% and indifferent against 83% of the strains. The interpretations of both interactions were equivalent for 26 isolates (87%): twenty three were indifferent and three showed synergistic effect. Antagonism was not observed. Combination therapy provides an alternative to monotherapy, especially for patients with invasive infections that are difficult to treat. These results need to be correlated with clinical outcomes, and in vivo assays using experimental animal models could bridge the gap between in vitro and clinical evaluation of drugs

Atividade in vitro, individual ou em combinação, de voriconazol, itraconazol e terbinafina contra isolados brasileiros de Pythium insidiosum

Pythium insidiosum,  classificado no Reino Stramenopila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em eqüinos, caninos e humanos. As atividades in vitro do voriconazol, itraconazol e terbinafina, sozinhos ou em combinação, foram estudadas empregando uma metodologia de macrodiluição baseada na técnica M 38-A (CLSI, 2002) contra 30 isolados clínicos de Pythium insidiosum, com o objetivo de avaliar novas medidas para tratar infecções causadas por este agente utilizando quimioterapia. As combinações (terbinafina e voriconazol; terbinafina e itraconazol) tiveram suas interações avaliadas utilizando a técnica de checkerboard, seguindo o modelo da macrodiluição em caldo. Terbinafina foi ativa quando testada sozinha, mostrando uma concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima < 8,0 mg/L para todos os isolados. Voriconazol e itraconazol foram inativos contra os isolados testados, quando usados sozinhos. A combinação de voriconazol com terbinafina foi sinérgica contra 17% das amostras e indiferente em 25 (83%) amostras. O uso concomitante de terbinafina e itraconazol foi sinérgico contra 17% e indiferente contra 83% das amostras. As interpretações de ambas as interações foram equivalentes para 26 isolados (87%): vinte e três foram indiferentes e três mostraram efeito sinérgico. Antagonismo não foi observado. A terapia combinada é uma alternativa à monoterapia, especialmente para pacientes com infecções invasivas, que são difíceis de tratar. Estes resultados precisam ser correlacionados com relatos clínicos; e ensaios in vivo, usando modelos animais, podem preencher a lacuna entre avaliações clínicas e avaliações in vitro das drogas