Host genetic factors associated with Chagas disease: vertical transmission and chronic chagasic cardiopathy

La enfermedad de Chagas es producto de una compleja interacción entre factoresambientales, del parásito Trypanosoma cruzi y del hospedero. En el marco de esta Tesisnos hemos enfocado en describir el rol que estos últimos juegan en dos escenarios dealto impacto en salud pública como son la transmisión congénita y la cardiopatíachagásica crónica. La transmisión congénita es parcialmente responsable de la urbanización del Chagas, que puede perpetuarse en sucesivas generaciones. Aún no han sido esclarecidoslos mecanismos que la placenta ofrece en defensa contra la infección, así como tampocopor qué sólo una proporción de niños nacidos de madres infectadas adquieren Chagascongénito. Con el objetivo de describir la respuesta genética del microambiente placentarioproducido frente a la infección, hemos realizado un estudio de genómica funcional através de un microarreglo en modelo murino C57BL/6J, comparando placentas deanimales no infectados e infectados por dos cepas de T. cruzi: K98, no letal y miotrópica y VD, aislada de un caso humano de infección congénita. Nuestro análisis de redesbiológicas sugiere que el microambiente placentario ejerce una fuerte respuesta inmuneen detrimento del metabolismo celular modulada por la cepa parasitaria. Más aún, lasdiferencias encontradas entre ambas cepas podrían ser el resultado de un tropismoplacentario observado en VD. Por otra parte, en el marco de esta Tesis se han evaluado polimorfismos denucleótido simples (SNPs) en genes que codifican para enzimas de expresión placentariacomo marcadores genéticos de susceptibilidad a esta transmisión. Para analizar dichaasociación hemos realizado un estudio del tipo caso-control comparando dos grupos deniños con y sin infección congénita nacidos de madres seropositivas. Para lagenotipificación de las muestras de ADN humano, hemos diseñado técnicas de análisis decurvas de disociación de alta resolución para análisis de SNPs y de electroforesis capilarpara análisis de microsatélites. Los resultados obtenidos del estudio de 11 sitios sugierenun papel importante en la infección congénita por parte de los polimorfismos en los genes de las proteínas MMP2 y ADAM12, implicadas en procesos de remodelación de lamatriz extracelular y en la respuesta inmune. El último objetivo de este trabajo ha sido evaluar polimorfismos en los genes CCR2y CCR5 como posibles marcadores genéticos de susceptibilidad a desarrollar lacardiopatía chagásica crónica en poblaciones originarias de Argentina. En particular,hemos encontrado que individuos de la etnia wichi, con menor prevalencia de problemascardíacos, no presentan una de las mutaciones en CCR5, que es factor de riesgo enpoblaciones no-wichi.Chagas disease is caused by a complex interaction of environmental factors, Trypanosoma cruzi parasite and host. As part of this Thesis we have focused ondescribing the role that host factors play in two scenarios of high public health impact ascongenital transmission and chronic Chagas cardiomyopathy. Congenital transmission is partially responsible for the urbanization of Chagas,which can remain in the following generations. Until now, it has not been elucidated themechanisms that the placenta provides as defense against infection, nor why only aproportion of children born to infected mothers acquire congenital Chagas. In order to describe the genetic response of the placental environment producedduring infection, we performed a study of functional genomics using a microarrayapproach in a C57BL/6J murine model, comparing placentas from uninfected andinfected animals by two strains of T. cruzi: K98, a non-lethal myotropic strain and VD,isolated from a human case of congenital infection. The analysis of biological networkssuggests that the placenta environment exerts a strong immune response to thedetriment of cell metabolism modulated by the parasitic strain. Moreover, thedifferences between the two strains could be the result of a stronger placental tropism inthe VD strain. Moreover, in the framework of this Thesis we have evaluated single nucleotidepolymorphisms (SNPs) in genes coding for enzymes of placental expression as geneticmarkers of susceptibility to vertical transmission. To analyze the association weperformed a case-control study comparing two groups of children with and withoutcongenital infection born to seropositive mothers. In order to genotype human DNAsamples, we have designed techniques of high resolution melting analyses for SNPsdiscrimination and capillary electrophoresis for analysis of microsatellites. The results ofthe 11 loci studied suggest an important role in congenital infection by human polymorphisms in genes coding for MMP2 and ADAM12 proteins, involved in extracellularmatrix remodeling processes and in immune response. The last aim of this research was to evaluate polymorphisms in CCR2 and CCR5genes as potential genetic markers of susceptibility to develop chronic Chagascardiomyopathy in populations from Argentina. In particular, we have found thatindividuals belonging to the wichi ethnia, with lower prevalence of heart problems, donot exhibit one of the mutations in CCR5, a risk factor in non-wichi populations.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Chagas' disease in Aboriginal and Creole communities from the Gran Chaco Region of Argentina: Seroprevalence and molecular parasitological characterization

Most indigenous ethnias from Northern Argentina live in rural areas of "the Gran Chaco" region, where Trypanosoma cruzi is endemic. Serological and parasitological features have been poorly characterized in Aboriginal populations and scarce information exist regarding relevant T. cruzi discrete typing units (DTU) and parasitic loads. This study was focused to characterize T. cruzi infection in Qom, Mocoit, Pit'laxá and Wichi ethnias (N = 604) and Creole communities (N = 257) inhabiting rural villages from two highly endemic provinces of the Argentinean Gran Chaco.DNA extracted using Hexadecyltrimethyl Ammonium Bromide reagent from peripheral blood samples was used for conventional PCR targeted to parasite kinetoplastid DNA (kDNA) and identification of DTUs using nuclear genomic markers. In kDNA-PCR positive samples from three rural Aboriginal communities of "Monte Impenetrable Chaqueño", minicircle signatures were characterized by Low stringency single primer-PCR and parasitic loads calculated using Real-Time PCR.Seroprevalence was higher in Aboriginal (47.98%) than in Creole (27.23%) rural communities (Chi square, p = 4.e-8). A low seroprevalence (4.3%) was detected in a Qom settlement at the suburbs of Resistencia city (Fisher Exact test, p = 2.e-21).The kDNA-PCR positivity was 42.15% in Aboriginal communities and 65.71% in Creole populations (Chi square, p = 5.e-4). Among Aboriginal communities kDNA-PCR positivity was heterogeneous (Chi square, p = 1.e-4). Highest kDNA-PCR positivity (79%) was detected in the Qom community of Colonia Aborigen and the lowest PCR positivity in two different surveys at the Wichi community of Misión Nueva Pompeya (33.3% in 2010 and 20.8% in 2014).TcV (or TcII/V/VI) was predominant in both Aboriginal and Creole communities, in agreement with DTU distribution reported for the region. Besides, two subjects were infected with TcVI, one with TcI and four presented mixed infections of TcV plus TcII/VI. Most minicircle signatures clustered according to their original localities, but in a few cases, signatures from one locality clustered with signatures from other village, suggesting circulation of the same strains in the area. Parasitic loads ranged from undetectable to around 50 parasite equivalents/mL, showing higher values than those generally observed in chronic Chagas disease patients living in urban centers of Argentina. Our findings reveal the persistence of high levels of infection in these neglected populations.Fil: Lucero, R. H.. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Brusés, B. L.. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Cura, Carolina Inés. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Formichelli, L. B.. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Juiz, Natalia Anahí. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Fernández, G. J.. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Bisio, Margarita María Catalina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Deluca, Gerardo Daniel. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Besuschio, Susana Alicia. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Hernández, D. O.. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires; Argentin

Analytical Performance of a Multiplex Real-Time PCR Assay Using TaqMan Probes for Quantification of Trypanosoma cruzi Satellite DNA in Blood Samples

Background: The analytical validation of sensitive, accurate and standardized Real-Time PCR methods for Trypanosoma cruzi quantification is crucial to provide a reliable laboratory tool for diagnosis of recent infections as well as for monitoring treatment efficacy. Methods/Principal Findings: We have standardized and validated a multiplex Real-Time quantitative PCR assay (qPCR) based on TaqMan technology, aiming to quantify T. cruzi satellite DNA as well as an internal amplification control (IAC) in a single-tube reaction. IAC amplification allows rule out false negative PCR results due to inhibitory substances or loss of DNA during sample processing. The assay has a limit of detection (LOD) of 0.70 parasite equivalents/mL and a limit of quantification (LOQ) of 1.53 parasite equivalents/mL starting from non-boiled Guanidine EDTA blood spiked with T. cruzi CLBrener stock. The method was evaluated with blood samples collected from Chagas disease patients experiencing different clinical stages and epidemiological scenarios: 1- Sixteen Venezuelan patients from an outbreak of oral transmission, 2- Sixty three Bolivian patients suffering chronic Chagas disease, 3- Thirty four Argentinean cases with chronic Chagas disease, 4- Twenty seven newborns to seropositive mothers, 5- A seronegative receptor who got infected after transplantation with a cadaveric kidney explanted from an infected subject. Conclusions/Significance: The performing parameters of this assay encourage its application to early assessment of T. cruzi infection in cases in which serological methods are not informative, such as recent infections by oral contamination or congenital transmission or after transplantation with organs from seropositive donors, as well as for monitoring Chagas disease patients under etiological treatment.Fil: Duffy, Tomas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones En Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cura, Carolina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ramírez, Juan C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Abate, Teresa. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Cayo, Nelly M.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; ArgentinaFil: Parrado, Rudy. Universidad San Simón; BoliviaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Velazquez, Elsa Beatriz. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; ArgentinaFil: Muñoz Calderón, Arturo. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Basile, Joaquín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Garcia, Lineth. Universidad San Simón; BoliviaFil: Riarte, Adelina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; ArgentinaFil: Nasser, Julio Rubén. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales; ArgentinaFil: Ocampo, Susana B.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; ArgentinaFil: Yadon, Zaida E.. Pan-American Health Organization; Estados UnidosFil: Torrico, Faustino. Universidad San Simón; BoliviaFil: Alarcón de Noya, Belkisyole. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Ribeiro, Isabela. Drugs and Neglected Diseases Initiative; SuizaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentin

Host genetic factors associated with Chagas disease: vertical transmission and chronic chagasic cardiopathy

La enfermedad de Chagas es producto de una compleja interacción entre factoresambientales, del parásito Trypanosoma cruzi y del hospedero. En el marco de esta Tesisnos hemos enfocado en describir el rol que estos últimos juegan en dos escenarios dealto impacto en salud pública como son la transmisión congénita y la cardiopatíachagásica crónica. La transmisión congénita es parcialmente responsable de la urbanización del Chagas, que puede perpetuarse en sucesivas generaciones. Aún no han sido esclarecidoslos mecanismos que la placenta ofrece en defensa contra la infección, así como tampocopor qué sólo una proporción de niños nacidos de madres infectadas adquieren Chagascongénito. Con el objetivo de describir la respuesta genética del microambiente placentarioproducido frente a la infección, hemos realizado un estudio de genómica funcional através de un microarreglo en modelo murino C57BL/6J, comparando placentas deanimales no infectados e infectados por dos cepas de T. cruzi: K98, no letal y miotrópica y VD, aislada de un caso humano de infección congénita. Nuestro análisis de redesbiológicas sugiere que el microambiente placentario ejerce una fuerte respuesta inmuneen detrimento del metabolismo celular modulada por la cepa parasitaria. Más aún, lasdiferencias encontradas entre ambas cepas podrían ser el resultado de un tropismoplacentario observado en VD. Por otra parte, en el marco de esta Tesis se han evaluado polimorfismos denucleótido simples (SNPs) en genes que codifican para enzimas de expresión placentariacomo marcadores genéticos de susceptibilidad a esta transmisión. Para analizar dichaasociación hemos realizado un estudio del tipo caso-control comparando dos grupos deniños con y sin infección congénita nacidos de madres seropositivas. Para lagenotipificación de las muestras de ADN humano, hemos diseñado técnicas de análisis decurvas de disociación de alta resolución para análisis de SNPs y de electroforesis capilarpara análisis de microsatélites. Los resultados obtenidos del estudio de 11 sitios sugierenun papel importante en la infección congénita por parte de los polimorfismos en los genes de las proteínas MMP2 y ADAM12, implicadas en procesos de remodelación de lamatriz extracelular y en la respuesta inmune. El último objetivo de este trabajo ha sido evaluar polimorfismos en los genes CCR2y CCR5 como posibles marcadores genéticos de susceptibilidad a desarrollar lacardiopatía chagásica crónica en poblaciones originarias de Argentina. En particular,hemos encontrado que individuos de la etnia wichi, con menor prevalencia de problemascardíacos, no presentan una de las mutaciones en CCR5, que es factor de riesgo enpoblaciones no-wichi.Chagas disease is caused by a complex interaction of environmental factors, Trypanosoma cruzi parasite and host. As part of this Thesis we have focused ondescribing the role that host factors play in two scenarios of high public health impact ascongenital transmission and chronic Chagas cardiomyopathy. Congenital transmission is partially responsible for the urbanization of Chagas,which can remain in the following generations. Until now, it has not been elucidated themechanisms that the placenta provides as defense against infection, nor why only aproportion of children born to infected mothers acquire congenital Chagas. In order to describe the genetic response of the placental environment producedduring infection, we performed a study of functional genomics using a microarrayapproach in a C57BL/6J murine model, comparing placentas from uninfected andinfected animals by two strains of T. cruzi: K98, a non-lethal myotropic strain and VD,isolated from a human case of congenital infection. The analysis of biological networkssuggests that the placenta environment exerts a strong immune response to thedetriment of cell metabolism modulated by the parasitic strain. Moreover, thedifferences between the two strains could be the result of a stronger placental tropism inthe VD strain. Moreover, in the framework of this Thesis we have evaluated single nucleotidepolymorphisms (SNPs) in genes coding for enzymes of placental expression as geneticmarkers of susceptibility to vertical transmission. To analyze the association weperformed a case-control study comparing two groups of children with and withoutcongenital infection born to seropositive mothers. In order to genotype human DNAsamples, we have designed techniques of high resolution melting analyses for SNPsdiscrimination and capillary electrophoresis for analysis of microsatellites. The results ofthe 11 loci studied suggest an important role in congenital infection by human polymorphisms in genes coding for MMP2 and ADAM12 proteins, involved in extracellularmatrix remodeling processes and in immune response. The last aim of this research was to evaluate polymorphisms in CCR2 and CCR5genes as potential genetic markers of susceptibility to develop chronic Chagascardiomyopathy in populations from Argentina. In particular, we have found thatindividuals belonging to the wichi ethnia, with lower prevalence of heart problems, donot exhibit one of the mutations in CCR5, a risk factor in non-wichi populations.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Alterations in Placental Gene Expression of Pregnant Women with Chronic Chagas Disease

Trypanosoma cruzi infection in women of reproductive age is associated with congenital transmission and adverse pregnancy outcomes. The placenta is a key barrier to infection. Gene expression profiles of term placental environment from T. cruzi–seropositive (SP) and -seronegative (SN) mothers were characterized by RNA-Seq. Nine pools of placental RNA paired samples were used: three from SN and six from SP tissues. Each pool consisted of female/male newborns and vaginal/cesarean delivery binomials. No newborn was congenitally infected. T. cruzi satellite DNA quantitative PCR in placental tissues and maternal and neonatal blood, and parasite 18S quantitative RT-PCR from placental RNA were negative, except in three SP women's bloodstream. To identify pathways associated with maternal T. cruzi infection, a gene-set association analysis was implemented: SP placental samples showed overexpression of inflammatory response and lymphocytic activation, whereas numerous biosynthetic processes were down-regulated. About 42 genes showed a significant fold-change between SP and SN groups. KISS1 and CGB5 were down-regulated, whereas KIF12, HLA-G, PRG2, TAC3, FN1, and ATXN3L were up-regulated. Several expressed genes in SP placentas encode proteins associated with preeclampsia and miscarriage. This first transcriptomics study in human term placental environment shows a placental response that may affect the fetus while protecting it from parasite infection; this host response could be responsible for the low rate of congenital transmission in chronic Chagas disease.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Torrejón, Irma del Rosario. Universidad Nacional de Jujuy; ArgentinaFil: Burgos, Marianela. Hospital Nacional Professor Dr. Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Torres, Ana María Fernanda. Universidad Nacional de Jujuy; ArgentinaFil: Duffy, Tomás. University Of Southern California; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cayo, Nelly Melina. Universidad Nacional de Jujuy; ArgentinaFil: Tabasco, Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Salvo, Miriam. Hospital Nacional Professor Dr. Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

Caracterización de poblaciones de linfocitos T con especificidad por epítopes de Trypanosoma cruzi identificados mediante predicción bioinformática

En un trabajo previo identificamos, mediante predicción bioinformática y validación in vitro, 7 secuencias peptídicas de T. cruzi que contienen epitopes activadores de secreción de IFN-γ en linfocitos T CD4+ y CD8+ de pacientes con enfermedad de Chagas crónica. Esta respuesta mostró indicios de restricción por haplotipo de HLA expresado por los pacientes. Los alelos de HLA utilizados en la predicción fueron seleccionados en función de su prevalencia en latinoamérica (HLA-A y -B) y mundial (HLA-DRB1).En esta nueva etapa de nuestra investigación, caracterizamos por secuenciación el locus de HLA en los 50 pacientes de la cohorte (26 asintomáticos, 25 con cardiopatía chagásica) y comparamos los resultados con la lista de variantes utilizada para la predicción original. Los resultados pusieron de manifiesto discordancias entre las variantes de prevalencia regional y las encontradas en la muestra poblacional, resaltando la necesidad de implementar este tipo de caracterización en la población endémica para este mal. No obstante, solo 1/51 pacientes no expresa ningún alelo de la lista.La información de la secuenciación, combinada con los resultados de ELISPOT para IFN-γ obtenidos en la etapa anterior de este proyecto, se utilizó para sintetizar multímeros de HLA-A*31:01 cargados con el epitope mínimo predicho para el péptido #47 (cruzipaina) y de HLA-DRB1*07:01 con el péptido #38 (trans-sialidasa putativa). Estas moléculas fueron utilizadas para caracterizar por citometría de flujo la frecuencia y fenotipo de las células epitope-específicas en las muestras de pacientes. Los resultados preliminares arrojaron frecuencias de células específicas entre 0.09 y 0.46% de los linfocitos T CD4+ o CD8+. Además, el análisis de marcadores fenotípicos mostró un fenotipo de células de memoria central y efectora en las células T CD4+ específicas para el péptido #38. Por su parte, los linfocitos T CD8+, específicos para el epitope mínimo del péptido #47 mostraron predominantemente diferenciación terminal en el análisis ex vivo. No obstante, la estimulación in vitro por 1 semana de CMN del paciente con el péptido en cuestión reveló un enriquecimiento en células específicas con fenotipo de memoria efectora.En conclusión, a pesar de las falencias en la selección de alelos expuestas por la tipificación de HLA en la muestra poblacional, nuestro enfoque predictivo fue exitoso en identificar epítopes capaces de activar una respuesta linfocitaria T de memoria funcional.Fil: Acevedo, Gonzalo Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Perez Perri, Lucas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Girard, Magalí Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Fernandez, Marisa. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Hernandez, Yolanda. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Chadi, Raul. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Nielsen, Morten. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaXXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaResistenciaArgentinaSociedad Argentina de Protozoologí

CCR5 and CCR2 polymorphisms and their association with chronic Chagas cardiomyopathy (CCC) in Argentinian population

Several studies have proposed different genetic markers as chemokines and cytokines genes for susceptibility to develop CCC. Many genes may be involved, each one making a small contribution. Thus, an appropriate approach for this problematic is to study numerous SNPs in individuals sharing genetic background. Our aim was to analyze CCR2 and CCR5 SNPs located in the promoter region by TaqMan allelic discrimination assay, and their association with CCC in Argentinean populations. A case-control study was carried in 480 T. cruzi seropositive adults from Gran Chaco endemic region and patients attending Buenos Aires hospitals. They were classified in 2 groups according to the Consensus on Chagas-Mazza Disease: non-demonstrated (nonDC) or demonstrated (DC) pathology groups. Due to our studied population did not fit Hardy-Weimberg equilibrium, we subclassified them according to geographical/ethnic origin. Thereby, SNPs frequencies between creole population from endemic regions and Buenos Aires patients were similar but differ from wichi population from Gran Chaco. The association analysis showed that the T allele in rs1800024 was more represented in nonDC than in DC group (p=0.041) in non-wichi population, becoming a protective factor. Among wichi individuals the G allele in rs1800023 was more frequent in DC group (p=0.016) and may be a risk factor to CCC. Moreover, we found that only in wichi population the HHE haplotype displayed a higher prevalence in non-DC group. These results are consistent with a previous study showing that although wichi and creoles live in the same geographical area, they are genetically different and for this reason, the results differed according to the population studied. It is tempting to speculate an association between the above described genetic differences and the clinical manifestations of CCC. Indeed, right bundle-branch block, the most frequent abnormality in CCC, had a clear tendency for lower prevalence in the wichi population.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Estupiñán, Elkyn. Universidad Industrial Santander; ColombiaFil: Hernández, Daniel. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Garcilazo, Alejandra. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Chadi, Raúl. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Morales Sanfurgo, Gisela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía". Servicio de Cardiología; ArgentinaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Gonzalez, Clara I.. Universidad Industrial Santander; ColombiaReunión Conjunta de Sociedades de Biociencias; LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología MolecularSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de AndrologíaSociedad Argentina de BiofísicaSociedad Argentina de BiologíaSociedad Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de FisiologíaSociedad Argentina de HematologíaSociedad Argentina de Protozoologí

Association study between CCR2-CCR5 genes polymorphisms and chronic Chagas heart disease in Wichi and in admixed populations from Argentina.

Several studies have proposed different genetic markers of susceptibility to develop chronic Chagas cardiomyopathy (CCC). Many genes may be involved, each one making a small contribution. For this reason, an appropriate approach for this problematic is to study a large number of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in individuals sharing a genetic background. Our aim was to analyze two CCR2 and seven CCR5 SNPs and their association to CCC in Argentina. A case-control study was carried out in 480 T. cruzi seropositive adults from Argentinean Gran Chaco endemic region (Wichi and Creole) and patients from Buenos Aires health centres. They were classified according to the Consensus on Chagas-Mazza Disease as non-demonstrated (non-DC group) or demonstrated (DC group) cardiomyopathy, i.e. asymptomatic or with CCC patients, respectively. Since, after allelic analysis, 2 out of 9 studied SNPs did not fit Hardy-Weinberg equilibrium in the unaffected non-DC group from Wichi patients, we analyzed them as a separate population. Only rs1800024T and rs41469351T in CCR5 gene showed significant differences within non-Wichi population (Creole + patients from Buenos Aires centres), being the former associated to protection, and the latter to risk of CCC. No evidence of association was observed between any of the analyzed CCR2-CCR5 gene polymorphisms and the development of CCC; however, the HHE haplotype was associated with protection in Wichi population. Our findings support the hypothesis that CCR2-CCR5 genes and their haplotypes are associated with CCC; however, depending on the population studied, different associations can be found. Therefore, the evolutionary context, in which the genes or haplotypes are associated with diseases, acquires special relevance

Human Polymorphisms in Placentally Expressed Genes and Their Association With Susceptibility to Congenital Trypanosoma cruzi Infection

Background. It is currently unclear why only a proportion of children born to Trypanosoma cruzi?infected mothers acquire the infection. We have examined the association of 11 single-nucleotide polymorphisms (SNPs) located in genes coding for placental expression enzymes as genetic markers of susceptibility to congenital T. cruzi infection (hereafter, ?congenital infection?): rs2014683and rs1048988 in ALPP; rs11244787 and rs1871054 in ADAM12; rs243866, rs243865, rs17859821, rs243864, and rs2285053 in MMP2; and rs3918242 and rs2234681 in MMP9.Methods. Two groups of children born to mothers seropositive for T. cruzi were compared: 101 had congenital infection, and 116 were uninfected. Novel high-resolution melting and capillary electrophoresis genotyping techniques were designed and used.Results. Logistic regression analysis showed that mutations in rs11244787 and rs1871054 (in ADAM12) and rs243866, rs17859821, and rs2285053 (in MMP2) were associated with susceptibility to congenital infection. Multifactor dimensionality reduction revealed that genotyping results for rs11244787, rs1871054, rs243866, rs17859821 and rs243864 sites would be a good predictorof congenital infection.Conclusions. Our results suggest an important role of human polymorphisms in proteins involved in extracellular matrix remodeling and the immune response during congenital infection. To our knowledge, this is the first study demonstrating the association between mutations in placentally expressed genes and susceptibility to congenital infection.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular ; ArgentinaFil: Cayo, Nelly M.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biología de la Altura; ArgentinaFil: Burgos, Marianela. Hospital Nacional Prof. Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Salvo, Miriam E.. Hospital Nacional Prof. Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Nasser, Julio Rubén. Universidad Nacional de Salta; ArgentinaFil: Bua, Jacqueline Elena. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular ; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular ; Argentin