B Cell Activation and Antibody Responses: The role of vesicle trafficking and Rab GTPases

B lymphocytes are an important part of the adaptive immune system. As one of their main functions, B cells can recognise specific antigens via their B cell receptor and produce antibodies that help clear infections. In T-dependent antibody responses, B cells need to uptake protein antigens and degrade them in specialised and highly regulated intracellular vesicles. The resulting peptides will be loaded onto the Major Histocompatibility Complex II (MHCII) and presented to the T lymphocytes to fully activate the immune response. Hence, precise coordination of vesicular trafficking is essential for antigen processing and presentation. However, how these processes are coordinated remains poorly understood. This thesis focused on the characterisation of the antigen processing routes in B lymphocytes and the role of the small GTPase Rab8a, a vesicle regulator, in the B cell immune response. First, we followed the traffic of the antigen in mouse B cells and studied its colocalisation with different endosomal markers using high-end microscopy. This allowed us to identify a population of highly dynamic and heterogenous vesicles with degradative capacity. These vesicles, termed early MHCII compartments (eMIIC), also contained MHC II internalised from the cell surface and its chaperone H2-M, indicating that eMIIC could readily process and present uptaken antigens with remarkable efficiency. Second, we developed a specific hybridisation internalisation probe (SHIP) assay that allowed for the precise imaging of internalised antigen in B lymphocytes. Third, we investigated the role of Rab8a in B cell biology for the first time using conditional Rab8a knock out mice. Interestingly, despite of its localization to antigen vesicles, Rab8a deficiency did not alter antigen internalisation, processing or presentation. Instead, it caused increased antibody responses in vivo. Our work demonstrates that Rab8a regulates the antibody responses, although the molecular mechanisms remain to be discovered. Overall, this thesis contributes to the understanding of the antigen processing route and the role of an uncharacterised Rab GTPase, Rab8a, in B lymphocytes.B-soluaktivaatio ja vasta-ainereaktio –Kalvorakkulaliikenteen ja Rab GTPaasien rooli B-(lymfosyytti)soluilla on tärkeä tehtävä elimistön mukautuvan immuunijärjestelmän toiminnassa. B-solujen yhtenä päätehtävänä on tunnistaa spesifisiä antigeenejä B‑solureseptoriensa (BCR) avulla ja tuottaa vasta-aineita, jotka auttavat parantamaan infektioita. T-soluvälitteisissä vasta-ainereaktioissa B-solut ottavat sisäänsä proteiiniantigeenin ja hajottavat sen erikoistuneissa ja tarkoin säädellyissä solunsisäisissä kalvorakkuloissa. Prosessissa syntyvät peptidit ladataan MHCIIkomplekseihin ja esitellään T-soluille täyden immuunivasteen aktivoimiseksi. Siten kalvorakkulaliikenteen tarkalla säätelyllä on merkittävä rooli antigeenin prosessoinnissa ja esittelyssä. Mekanismeja, joiden avulla näitä tapahtumasarjoja Bsoluissa säädellään, tunnetaan kuitenkin tällä hetkellä huonosti. Tämä työ keskittyi karakterisoimaan antigeenin prosessointireittejä B-soluissa sekä selvittämään Rab8-kalvorakkulasäätelijän roolia B-soluvälitteisessä immuunipuolustuksessa. Aluksi seurasimme antigeenin ottamista solun sisälle ja sen paikallistumista erilaisiin kalvorakkuloihin moderneja kuvantamistyökaluja käyttäen. Identifioimme antigeenin erittäin dynaamisissa ja heterogeenisissä kalvorakkuloissa, joilla oli kapasiteettia myös antigeenin hajottamiseen. Nämä nopeasti muodostuvat kalvorakkulat sisälsivät myös solun pinnalta tulleita MHCII komplekseja, sekä MHCII kompleksin tarvitsemaa esiliina-proteiinia H2-M; tämä tulos viittaa näiden kalvorakkuloiden mahdollisuuteen prosessoida antigeenia esiteltäväksi hyvin nopeasti. Toisessa työssä kehitimme hybridisoituvaa internalisaatio-koetinta käyttävän protokollan, jonka avulla voidaan poistaa solun pinnalla olevan antigeenin taustasignaali ja täten kuvantaa ainoastaan solun sisälle otettua antigeenia. Lopuksi tutkimme Rab8-proteiinin roolia B-soluissa käyttäen konditionaalista Rab8a-poistogeenistä hiirimallia. Työn tulokset osoittivat, että Rab8a lokalisoitui antigeenia sisältäviin kalvorakkuloihin mutta sen puute ei vaikuttanut antigeenin sisään ottamiseen, prosessointiin tai esittelyyn. Sen sijaan Rab8a:n puuttuminen B-soluista lisäsi hiirissä muodostuvaa vasta-ainereaktiota. Työmme osoitti, että Rab8a kontrolloi vasta-ainetuotantoa, mutta molekyylitason mekanismien selvittäminen vaatii vielä lisätutkimuksia. Tämä lopputyö laajentaa ymmärrystämme antigeenien prosessointireiteistä B-soluissa sekä aiemmin karakterisoimattoman Rab GTPaasin, Rab8a:n, roolista

Modelos atencionales y educación

El desarrollo de la atención es esencial para el de otros procesos cognitivos, asimismo es un indicador para predecir el nivel cognitivo en la niñez. En especial se ha comprobado tanto en niños como en adultos, que a mayor capacidad de atención mejor ejecución en las tareas cognitivas. Debido a la importancia que la atención tiene en la adquisición de aprendizajes, el objetivo de este trabajo es el de revisar aquellos modelos atencionales más representativos y realizar un análisis sobre la importancia que la atención tiene en el proceso de aprendizajeDevelopment of attention is essential for the development of other cognitive processes. In addition, it is a predictor of cognitive development during childhood. In particular, it has been found in both children and adults that the higher the attentional ability, the better the performance in cognitive tasks. This paper provides an overview of the most representative attentional models. The importance of attention in the process of learning it is also analyse

Research data services (RDS) in Spanish academic libraries

Research data services (RDS) are actions undertaken to provide researchers with support, advising, training, information, a technological infrastructure and a regulatory framework with respect to research data management (RDM) throughout the life cycle of the data. The implementation of RDS is an activity that is becoming increasingly important within the functions carried out by academic and research libraries. The aim of this study is to provide a snapshot of the research data services implemented in academic libraries in public universities in Spain, identifying the number and types of services deployed. We conducted a Website Content Analysis of the libraries of the 48 Spanish public universities to discover which RDS they are implementing and promoting. The results show that, despite a lack of institutional policies regarding research data, libraries are deploying these new services, albeit unevenly in terms of both the number of services and the type of support provided. Services related to development of the data management plan (DMP) and preservation of the data in repositories predominate. This inventory is presented as a first step towards learning the level of RDS implementation in Spanish academic libraries, providing a partial perspective and leading the way to exploring other aspects in greater depth in future studies.This work has been supported by the Madrid Government (Comunidad de Madrid-Spain) under the Multiannual Agreement with UC3M in the line of Excellence of University Professors (EPUC3M02), and in the context of the V PRICIT (Regional Programme of Research and Technological Innovation)

Hacia una nueva conceptualización del control parental desde la teoría de la autodeterminación

Resumen tomado de la publicaciónTítulo, palabras clave y resumen también en inglés y francésLas investigaciones desarrolladas sobre los estilos educativos parentales, específicamente, aquellas en las que se aborda el estudio del «control parental», se han realizado sobre múltiples conceptualizaciones de este término. Esta disparidad en la acepción del concepto ha tenido un efecto directo sobre los resultados de las investigaciones, de modo que la evidencia empírica sobre los efectos del control parental en menores ha sido frecuentemente inconsistente o equivocada. En este contexto, el artículo analiza los principales problemas epistemológicos y metodológicos producidos por el uso ambiguo del término. Además, y desde el marco que proporciona la teoría de la autodeterminación, se propone una nueva definición del constructo y se explicitan sus relaciones con otras dimensiones educativas parentales. Específicamente, se proponen dos dimensiones que son complementarias: apoyo a la autonomía versus control y estructura parental. Esta propuesta permite superar los problemas mencionados y abrir un nuevo campo en el estudio de la parentalidad.ES

Investigación sobre el Síndrome de Burnout y el grado de satisfacción laboral en los/as profesionales del Trabajo Social

El presente documento es un estudio de investigación en el que se explora la existencia del Síndrome de Burnout y el grado de satisfacción laboral en los/as profesionales del Trabajo Social.La investigación ha sido realizada con los siguientes objetivos principales: analizar si los/as trabajadores/as sociales de las zonas rurales y metropolitanas de laisla de Tenerife presentan el Síndrome de Burnout, analizar la valoración y satisfacción de los/as trabajadores/as sociales sobre su desempeño profesionaly conocer las propuestas de prevención realizadas por los/as Trabajadores/as Sociales para evitar elsíndrome del Burnout.Pararecabar la información precisase han utilizado dos instrumentos, por un lado se haconfeccionado un cuestionario de elaboración propia, y por otro lado,la escala de valoración “Maslach Burnout Inventory” (Maslach y Jackson, 1981).La muestra de participantes asciende a 32 profesionales del Trabajo Social, en su mayoría mujeres, que desempeñan su ejercicio profesional en distintos ayuntamientos de las zonas rurales y metropolitanas del norte de la isla de Tenerife. Los principales resultados obtenidos han sido en primer lugar, que el aspecto que mejor valoran o más le gustan de su trabajo a las/os participantes es la atención directa.En segundolugar, los/as trabajadores/as sociales se sienten valorados/as en mayor medida por las personas a las que atienden que por sus propios/as compañeros/as y superiores. En tercer lugar, se puede afirmar que los/as profesionales del Trabajo Social no presentan Síndrome de Burnout, pero sí que existe una tendencia. Los/as profesionales se sienten agotados emocionalmente, pero, a pesar de ello se demuestra que no han cambiado su manera de relacionarse tanto con los/as usuarios/as como con el resto de personas. Se sienten satisfechos con su desempeño profesional a pesar de la sobrecarga de trabajo. Resaltar que no existen diferencias entre ejercer como trabajador/a social entre las zonas rurales y las metropolitanas en relación con el Síndrome de Burnout y la satisfacciónque tienen sobre su desempeño profesional, pero a mayor tiempo de ejercicio profesional, los/as profesionales del Trabajo Social presentan mayor agotamiento emocional.Para finalizar, en cuanto a las propuestas de prevención realizadas por los/as trabajadores/as socialespara evitar el Síndrome del Burnout, destacar “aumentar elnúmero de profesionales”, “realizar actividades de ocio, deporte, etc., con y sin los/as compañeros/as”, “establecer días de atención a usuarios/as, visitas a domicilio, etc.” y “rotar-cambiar de servicios” como las más relevantes.This document is a research study that explores the existence of Burnout syndrome and the rate of job satisfaction in Social work professionals.The research has been carried out with the following main objectives: to analyze if social workers in the rural and metropolitan areas of the island of Tenerife suffer from burnout syndrome, to analyze the valuation and satisfaction of thesocial workers on their professional performance and know the prevention proposals made by social workers to avoid Burnout syndrome.To obtain accurate information, two instruments have been used. On the one hand, a questionnaire has been created, and on the other hand, the "Maslach Burnout Inventory" ratingsscale (Maslach and Jackson, 1981). The sample consist of 32 professionals of social work, mostly women, who perform their professional practice in different municipalities in the rural and metropolitan areas of the north of Tenerife Island.The main results obtained have been the followings. Firstly, the aspect that for the participants are better valued or they more like of their work is the direct attention. Secondly, the social workers feel far more valued by the people they serve than by their coworkers and superiors. Thirdly, it can be said that the professionals of social work do not present Burnout syndrome, but it does exist a tendency. These professionals feel exhausted emotionally, but nevertheless it is shown that they have not changed their way of relating to the users as well as with the rest of people. They feel satisfied with their professional performance despite the workload.It is important to emphasize that there are no differences between working as a social worker between rural and metropolitan areas in relation to Burnout syndrome and the degree of satisfaction they have on their professional performance. But the more time doing professional activities they spend, the more emotionally exhausted they are. To conclude, regarding the prevention proposals made by Social Workers to avoid the Burnout syndrome, we would like to emphasize "increasing the number of professionals", "carrying out leisure activities, sports, etc., with and without colleagues", "establishing days of attention to users, home visits, etc." and "rotating-changing services" as the most relevant and that should be considered

A specific hybridisation internalisation probe (SHIP) enables precise live-cell and super-resolution imaging of internalized cargo

Facilitated by the advancements in microscopy, our understanding of the complexity of intracellular vesicle traffic has dramatically increased in recent years. However, distinguishing between plasma membrane-bound or internalised ligands remains a major challenge for the studies of cargo sorting to endosomal compartments, especially in small and round cells such as lymphocytes. The specific hybridization internalisation probe (SHIP) assay, developed for flow cytometry studies, employs a ssDNA fluorescence internalisation probe and a complementary ssDNA quenching probe to unambiguously detect the internalized receptors/cargo. Here, we adopted the SHIP assay to study the trafficking of receptor/ligand complexes using B lymphocytes and B cell receptor-mediated antigen internalization as a model system. Our study demonstrates the potential of the SHIP assay for improving the imaging of internalized receptor/ligand complexes and establishes the compatibility of this assay with multiple imaging modalities, including live-cell imaging and super-resolution microscopy

Búsqueda de fármacos moduladores del receptor de estrógenos

Motivación: Los estrógenos producen muchos efectos biológicos y están relacionados con enfermedades de gran impacto, como el cáncer. Aunque existen drogas que imitan y/o inhiben el comportamiento de esta hormona, suelen darse efectos colaterales no deseados. Por esta razón, es necesario encontrar nuevos fármacos que modulen el receptor de estrógenos. Métodos: Empleamos células T47D, ERα/β +, transfectadas con el plásmido pGL2.TATA.Inr.Luc.neo. Cuando sacamos células para el experimento, retiramos el medio, lavamos con PBS y añadimos 25 ml de medio RPMI sin PEST y con 10% de DCC para retirar los esteroides que puedan interferir. Así están 2 días. Luego sembramos la placa (96 pocillos) con 60000 células/pocillo en un volumen de 200 µL. Al día siguiente se realiza el tratamiento. El control con actividad agonista pura fue el 17-β-estradiol (E2) y con actividad antagonista pura fue el ICI-182,780. Además, ponemos pocillos solo con el vehículo de los fármacos (DMSO, 0,06%) como referencia del nivel basal de luciferasa que expresan las células. Los productos los probamos en concentraciones de 10 µM, 1 µM, 0.1 µM y 0.01 µM. Si se añade únicamente esto a las células se mide la actividad estrogénica, mientras que si se combinan con 0.3 uL de E2 0.1 nM, se evalúa la antiestrogénica. Tras 24 horas, extramos luciferasa de las células (se resuspende en PLB, centrifugamos 5 minutos a 12000 rpm y tomamos el sobrenadante) y medimos la luz que se emite al combinar nuestras muestras con LAR. Además, medimos proteínas con el método de Bradford para corregir la medida de luminosidad. Resultados: Se analizan 4 fármacos. CS1 en presencia de E2 es capaz de inhibir al menos el 50% de la actividad transcripcional dependiente del ER (IC50=10µM), mientras que al analizarse solo, la activan también más del 50% (EC50=0,006µM). CS2 solo tiene efecto combinado con E2, inhibiendo más del 50% de la actividad transcripcional (IC50=0.08µM). Por su parte, CS41 actúa al contrario, tiene un comportamiento parecido al de E2 cuando se ensaya solo (EC50=1,25µM). Finalmente, ggc2 no muestra un efecto relevante en ninguno de los dos tipos de ensayo. Conclusiones: CS1 sería un agonista parcial del receptor de estrógenos. En cuanto a CS2, se trataría de un antagonista puro, mientras que CS41 sería agonista puro. Ggc2 no sería un candidato para seguir estudiando. Con los otros, se harán curvas de competición con E2 marcado para ver su afinidad por el ER y ensayos uterotróficos en roedores

Increased bile resistance in Salmonella enterica mutants lacking Prc periplasmic protease

Prc is a periplasmic protease involved in processing of penicillin-binding protein 3 (PBP3). Lack of Prc suppressesbile sensitivity in Dam-, Wec-, PhoP-, DamX-, and SeqA- mutants of Salmonella enterica, and increases bile resistance in thewild type. Changes in the activity of penicillin binding proteins PBP3, PBP4, PBP5/6 and PBP7 are detected in a Prc-background, suggesting that peptidoglycan remodeling might contribute to bile resistance. [Int Microbiol 2013; 16(2):87-92]Keywords: Salmonella; bile; Prc protease; peptidoglycan; penicillin-binding protein