Caracterización fenotípica de una fosfodiesterasa regulada por la proteína reguladora BvgR en Bordetella bronchiseptica

Bordetella bronchiseptica es una bacteria Gram negativa capaz de generar infecciones en el tracto respiratorio de numerosos animales e inclusive de pacientes humanos inmunocomprometidos. Este patógeno cuenta con un sistema de dos componentes BvgAS que regula la transición entre sus fases virulenta y avirulenta. Durante la fase virulenta, B. bronchisepticaexpresa factores de virulencia necesarios para el proceso de infección y reprime la expresión de factores de avirulencia. Los factores de avirulencia se expresan en la fase avirulenta de la bacteria. Otro sistema de regulación presente en B. bronchiseptica, y común en otras bacterias Gram negativas, es el mediado por el segundo mensajero c-di-GMP. Su concentración depende de la actividad de enzimas que lo sintetizan (diguanilato ciclasas con dominio GGDEF) o que lo degradan (fosfodiesterasas con dominios EAL o HD-GYP). Nuestro laboratorio ha demostrado que en B. bronchiseptica altos niveles de c-di-GMP promueven el fenotipo de formación de biofilm mientras reprimen el de movilidad. Recientes resultados del grupo sugerirían que existe una relación más compleja de lo inicialmente pensado entre los sistemas de regulación BvgAS y el mediado por c-di-GMP. En este sentido, hemos observado mediante ensayos transcriptómicos que BvgR, una proteína descripta como parte del sistema BvgAS cuya función es reprimir la expresión de proteínas durante la fase virulenta de B. bronchiseptica, regula numerosas proteínas asociadas al metabolismo de c-di-GMP. De las ocho proteínas con dominio EAL codificadas en el genoma de B. bronchiseptica, BvgR reprime la expresión de solo una de ellas: PdeB. El gen pdeB codificaría para una fosfodiesterasa que no ha sido descripta anteriormente. Con el objetivo de estudiar el rol de PdeB ensayamos dos de los principales fenotipos de B. bronchiseptica: movilidad en agar blando y formación de biofilm en pocillos de PVC. Para ello, se construyó una cepa de B. bronchiseptica que sobreexpresa PdeB desde un plásmido bajo el control de un promotor fuerte y una cepa B. bronchiseptica mutante en pdeB (∆PdeB). Cuando se ensayó la movilidad en agar blando, se observó que la sobreexpresión de PdeB aumenta la movilidad, mientras que el mutante ∆PdeB presentó una leve pero significativamente menor movilidad que la cepa silvestre y al complementarse, el fenotipo fue restaurado. Cuando se ensayó la capacidad de formar biofilm de la cepa ∆PdeB, se observó una significativamente menor cantidad de biofilm formado por la mutante que por la cepa silvestre. Este resultado indicaría que PdeB podría estar involucrada en alguno de los procesos importantes para la formación de biofilm. Estos ensayos se realizaron en condiciones en donde BvgR está activa, lo que resulta interesante dado que indicaría que, aunque BvgR reprima su expresión, PdeB mantiene cierto nivel de expresión basal en dicha condición.Universidad Nacional de La Plat

CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE UNA FOSFODIESTERASA REGULADA POR LA PROTEÍNA REGULADORA BvgR EN Bordetella bronchiseptica

Bordetella bronchiseptica es una bacteria Gram negativa capaz de generar infecciones en el tracto respiratorio de numerosos animales e inclusive de pacientes humanos inmunocomprometidos. Este patógeno cuenta con un sistema de dos componentes BvgAS que regula la transición entre sus fases virulenta y avirulenta. Durante la fase virulenta, B. bronchiseptica expresa factores de virulencia necesarios para el proceso de infección y reprime la expresión de factores de avirulencia. Los factores de avirulencia se expresan en la fase avirulenta de la bacteria. Otro sistema de regulación presente en B. bronchiseptica, y común en otras bacterias Gram negativas, es el mediado por el segundo mensajero c-di-GMP. Su concentración depende de la actividad de enzimas que lo sintetizan (diguanilato ciclasas con dominio GGDEF) o que lo degradan (fosfodiesterasas con dominios EAL o HD-GYP). Nuestro laboratorio ha demostrado que en B. bronchiseptica altos niveles de c-di-GMP promueven el fenotipo de formación de biofilm mientras reprimen el de movilidad. Recientes resultados del grupo sugerirían que existe una relación más compleja de lo inicialmente pensado entre los sistemas de regulación BvgAS y el mediado por c-di-GMP. En este sentido, hemos observado mediante ensayos transcriptómicos que BvgR, una proteína  descripta como parte del sistema BvgAS cuya función es reprimir la expresión de proteínas durante la fase virulenta de B. bronchiseptica, regula numerosas proteínas asociadas al metabolismo de c-di-GMP. De las ocho proteínas con dominio EAL codificadas en el genoma de B. bronchiseptica, BvgR reprime la expresión de solo una de ellas: PdeB. El gen pdeB codificaría para una fosfodiesterasa que no ha sido descripta anteriormente. Con el objetivo de estudiar el rol de PdeB ensayamos dos de los principales fenotipos de B. bronchiseptica: movilidad en agar blando y formación de biofilm en pocillos de PVC. Para ello, se construyó una cepa de B. bronchiseptica que sobreexpresa PdeB desde un plásmido bajo el control de un promotor fuerte y una cepa B. bronchiseptica mutante en pdeB (∆PdeB). Cuando se ensayó la movilidad en agar blando, se observó que la sobreexpresión de PdeB aumenta la movilidad, mientras que el mutante ∆PdeB presentó una leve pero significativamente menor movilidad que la cepa silvestre y al complementarse, el fenotipo fue restaurado.   Cuando se ensayó la capacidad de formar biofilm de la cepa ∆PdeB, se observó una significativamente menor cantidad de biofilm formado por la mutante que por la cepa silvestre. Este resultado indicaría que PdeB podría estar involucrada en alguno de los procesos importantes para la formación de biofilm. Estos ensayos se realizaron en condiciones en donde BvgR está activa, lo que resulta interesante dado que indicaría que, aunque BvgR reprima su expresión, PdeB mantiene cierto nivel de expresión basal en dicha condición

Caracterización fenotípica de una fosfodiesterasa regulada por la proteína reguladora BvgR en Bordetella bronchiseptica

Bordetella bronchiseptica es una bacteria Gram negativa capaz de generar infecciones en el tracto respiratorio de numerosos animales e inclusive de pacientes humanos inmunocomprometidos. Este patógeno cuenta con un sistema de dos componentes BvgAS que regula la transición entre sus fases virulenta y avirulenta. Durante la fase virulenta, B. bronchisepticaexpresa factores de virulencia necesarios para el proceso de infección y reprime la expresión de factores de avirulencia. Los factores de avirulencia se expresan en la fase avirulenta de la bacteria. Otro sistema de regulación presente en B. bronchiseptica, y común en otras bacterias Gram negativas, es el mediado por el segundo mensajero c-di-GMP. Su concentración depende de la actividad de enzimas que lo sintetizan (diguanilato ciclasas con dominio GGDEF) o que lo degradan (fosfodiesterasas con dominios EAL o HD-GYP). Nuestro laboratorio ha demostrado que en B. bronchiseptica altos niveles de c-di-GMP promueven el fenotipo de formación de biofilm mientras reprimen el de movilidad. Recientes resultados del grupo sugerirían que existe una relación más compleja de lo inicialmente pensado entre los sistemas de regulación BvgAS y el mediado por c-di-GMP. En este sentido, hemos observado mediante ensayos transcriptómicos que BvgR, una proteína descripta como parte del sistema BvgAS cuya función es reprimir la expresión de proteínas durante la fase virulenta de B. bronchiseptica, regula numerosas proteínas asociadas al metabolismo de c-di-GMP. De las ocho proteínas con dominio EAL codificadas en el genoma de B. bronchiseptica, BvgR reprime la expresión de solo una de ellas: PdeB. El gen pdeB codificaría para una fosfodiesterasa que no ha sido descripta anteriormente. Con el objetivo de estudiar el rol de PdeB ensayamos dos de los principales fenotipos de B. bronchiseptica: movilidad en agar blando y formación de biofilm en pocillos de PVC. Para ello, se construyó una cepa de B. bronchiseptica que sobreexpresa PdeB desde un plásmido bajo el control de un promotor fuerte y una cepa B. bronchiseptica mutante en pdeB (∆PdeB). Cuando se ensayó la movilidad en agar blando, se observó que la sobreexpresión de PdeB aumenta la movilidad, mientras que el mutante ∆PdeB presentó una leve pero significativamente menor movilidad que la cepa silvestre y al complementarse, el fenotipo fue restaurado. Cuando se ensayó la capacidad de formar biofilm de la cepa ∆PdeB, se observó una significativamente menor cantidad de biofilm formado por la mutante que por la cepa silvestre. Este resultado indicaría que PdeB podría estar involucrada en alguno de los procesos importantes para la formación de biofilm. Estos ensayos se realizaron en condiciones en donde BvgR está activa, lo que resulta interesante dado que indicaría que, aunque BvgR reprima su expresión, PdeB mantiene cierto nivel de expresión basal en dicha condición.Universidad Nacional de La Plat

Cyclic di-GMP regulates type three secretion system and virulence in Bordetella bronchiseptica

The second messenger cyclic di-GMP (c-di-GMP) is a ubiquitous molecule in bacteria that regulates diverse phenotypes. Among them, motility and biofilm formation are the most studied. Furthermore, c-di-GMP has been suggested to regulate virulence factors, making it important for pathogenesis. Previously, we reported that c-di-GMP regulates biofilm formation and swimming motility in Bordetella bronchiseptica. Here, we present a multi-omics approach for the study of B. bronchiseptica strains expressing different cytoplasmic c-di-GMP levels, including transcriptome sequencing (RNA-seq) and shotgun proteomics with label-free quantification. We detected 64 proteins significantly up- or downregulated in either low or high c-di-GMP levels and 358 genes differentially expressed between strains with high c-di-GMP levels and the wild-type strain. Among them, we found genes for stress-related proteins, genes for nitrogen metabolism enzymes, phage-related genes, and virulence factor genes. Interestingly, we observed that a virulence factor like the type III secretion system (TTSS) was regulated by c-di-GMP. B. bronchiseptica with high c-di-GMP levels showed significantly lower levels of TTSS components like Bsp22, BopN, and Bcr4. These findings were confirmed by independent methods, such as quantitative reverse transcription-PCR (q-RT-PCR) and Western blotting. Higher intracellular levels of c-di-GMP correlated with an impaired capacity to induce cytotoxicity in a eukaryotic cell in vitro and with attenuated virulence in a murine model. This work presents data that support the role that the second messenger c-di-GMP plays in the pathogenesis of Bordetella.Fil: Gutierrez, María de la Paz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Wong, Ting. West Virginia University; Estados UnidosFil: Damron, F. Heath. West Virginia University; Estados UnidosFil: Fernandez, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Sisti, Federico Bernardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentin

Caracterización fenotípica de una fosfodiesterasa regulada por la proteína reguladora BvgR en Bordetella bronchiseptica

Bordetella bronchiseptica es una bacteria Gram negativa capaz de generar infecciones en el tracto respiratorio de numerosos animales e inclusive de pacientes humanos inmunocomprometidos. Este patógeno cuenta con un sistema de dos componentes BvgAS que regula la transición entre sus fases virulenta y avirulenta. Durante la fase virulenta, B. bronchisepticaexpresa factores de virulencia necesarios para el proceso de infección y reprime la expresión de factores de avirulencia. Los factores de avirulencia se expresan en la fase avirulenta de la bacteria. Otro sistema de regulación presente en B. bronchiseptica, y común en otras bacterias Gram negativas, es el mediado por el segundo mensajero c-di-GMP. Su concentración depende de la actividad de enzimas que lo sintetizan (diguanilato ciclasas con dominio GGDEF) o que lo degradan (fosfodiesterasas con dominios EAL o HD-GYP). Nuestro laboratorio ha demostrado que en B. bronchiseptica altos niveles de c-di-GMP promueven el fenotipo de formación de biofilm mientras reprimen el de movilidad. Recientes resultados del grupo sugerirían que existe una relación más compleja de lo inicialmente pensado entre los sistemas de regulación BvgAS y el mediado por c-di-GMP. En este sentido, hemos observado mediante ensayos transcriptómicos que BvgR, una proteína descripta como parte del sistema BvgAS cuya función es reprimir la expresión de proteínas durante la fase virulenta de B. bronchiseptica, regula numerosas proteínas asociadas al metabolismo de c-di-GMP. De las ocho proteínas con dominio EAL codificadas en el genoma de B. bronchiseptica, BvgR reprime la expresión de solo una de ellas: PdeB. El gen pdeB codificaría para una fosfodiesterasa que no ha sido descripta anteriormente. Con el objetivo de estudiar el rol de PdeB ensayamos dos de los principales fenotipos de B. bronchiseptica: movilidad en agar blando y formación de biofilm en pocillos de PVC. Para ello, se construyó una cepa de B. bronchiseptica que sobreexpresa PdeB desde un plásmido bajo el control de un promotor fuerte y una cepa B. bronchiseptica mutante en pdeB (∆PdeB). Cuando se ensayó la movilidad en agar blando, se observó que la sobreexpresión de PdeB aumenta la movilidad, mientras que el mutante ∆PdeB presentó una leve pero significativamente menor movilidad que la cepa silvestre y al complementarse, el fenotipo fue restaurado. Cuando se ensayó la capacidad de formar biofilm de la cepa ∆PdeB, se observó una significativamente menor cantidad de biofilm formado por la mutante que por la cepa silvestre. Este resultado indicaría que PdeB podría estar involucrada en alguno de los procesos importantes para la formación de biofilm. Estos ensayos se realizaron en condiciones en donde BvgR está activa, lo que resulta interesante dado que indicaría que, aunque BvgR reprima su expresión, PdeB mantiene cierto nivel de expresión basal en dicha condición.Universidad Nacional de La Plat

The genes encoding Arabidopsis ORC subunits are E2F targets and the two ORC1 genes are differently expressed in proliferating and endoreplicating cells

Initiation of eukaryotic DNA replication depends on the function of pre-replication complexes (pre-RC), one of its key component being the six subunits origin recognition complex (ORC). In spite of a significant degree of conservation among ORC proteins from different eukaryotic sources, the regulation of their availability varies considerably in different model systems and cell types. Here, we show that the six ORC genes of Arabidopsis thaliana are regulated at the transcriptional level during cell cycle and development. We found that Arabidopsis ORC genes, except AtORC5, contain binding sites for the E2F family of transcription factors. Expression of AtORC genes containing E2F binding sites peaks at the G1/S-phase. Analysis of AtORC gene expression in plants with reduced E2F activity, obtained by expressing a dominant negative version of DP, the E2F heterodimerization partner, and with increased E2F activity, obtained by inactivation of the retinoblastoma protein, led us to conclude that all AtORC genes, except AtORC5 are E2F targets. Interestingly, Arabidopsis contains two AtORC1 (a and b) genes, highly conserved at the amino acid level but with unrelated promoter sequences. AtORC1b expression is restricted to proliferating cells. However, AtORC1a is preferentially expressed in endoreplicating cells based on our analysis in endoreplicating tissues and in a mutant with altered endocycle pattern. This suggests a differential expression of the two ORC1 genes in Arabidopsis

Emission inventories and modeling activities for the development of air quality plans in Madrid (Spain)

1. Introduction 2. Air Quality Modeling system 3. Emission Inventories 4. Applications and Results 5. Conclusion

Bordetella bronchiseptica diguanylate cyclase bdca regulates motility and is important for the establishment of respiratory infection in mice

Bacteria can be motile and planktonic or, alteRNAtively, sessile and participating in the biofilm mode of growth. The transition between these lifestyles can be regulated by a second messenger, cyclic dimeric GMP (c-di-GMP). High intracellular c-di-GMP concentration correlates with biofilm formation and motility inhibition in most bacteria, including Bordetella bronchiseptica, which causes respiratory tract infections in mammals and forms biofilms in infected mice. We previously described the diguanylate cyclase BdcA as involved in c-di-GMP synthesis and motility regulation in B. bronchiseptica; here, we further describe the mechanism whereby BdcA is able to regulate motility and biofilm formation. Amino acid replacement of GGDEF with GGAAF in BdcA is consistent with the conclusion that diguanylate cyclase activity is necessary for biofilm formation and motility regulation, although we were unable to confirm the stability of the mutant protein. In the absence of the bdcA gene, B. bronchiseptica showed enhanced motility, strengthening the hypothesis that BdcA regulates motility in B. bronchiseptica. We showed that c-di-GMP-mediated motility inhibition involved regulation of flagellin expression, as high c-di-GMP levels achieved by expressing BdcA significantly reduced the level of flagellin protein. We also demonstrated that protein BB2109 is necessary for BdcA activity, motility inhibition, and biofilm formation. Finally, absence of the bdcA gene affected bacterial infection, implicating BdcA-regulated functions as important for bacterium-host interactions. This work supports the role of c-di-GMP in biofilm formation and motility regulation in B. bronchiseptica, as well as its impact on pathogenesis. IMPORTANCE Pathogenesis of Bordetella spp., like that of a number of other pathogens, involves biofilm formation. Biofilms increase tolerance to biotic and abiotic factors and are proposed as reservoirs of microbes for transmission to other organs (trachea, lungs) or other hosts. Bis-(3=-5=)-cyclic dimeric GMP (c-di-GMP) is a second messenger that regulates transition between biofilm and planktonic lifestyles. In Bordetella bronchiseptica, high c-di-GMP levels inhibit motility and favor biofilm formation. In the present work, we characterized a B. bronchiseptica diguanylate cyclase, BdcA, which regulates motility and biofilm formation and affects the ability of B. bronchiseptica to colonize the murine respiratory tract. These results provide us with a better understanding of how B. bronchiseptica can infect a host.Fil: Belhart, Keila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gutierrez, María de la Paz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zacca, Federico Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ambrosis, Nicolás Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gestal, Monica Cartelle. Georgia State University; Estados UnidosFil: Taylor, Dawn. Georgia State University; Estados UnidosFil: Dahlstrom, Kurt M.. Geisel School of Medicine at Dartmouth; Estados UnidosFil: Harvill, Eric T.. Georgia State University; Estados UnidosFil: O Toole, George. Geisel School of Medicine at Dartmouth; Estados UnidosFil: Sisti, Federico Bernardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Fernandez, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentin

Modelo de negocio “Uroomie”

En este trabajo podrán encontrar un plan general para la idea de negocio denominada Urommie la cual es un aplicativo en el que jóvenes que residan en Lima Metropolitana van a poder encontrar departamentos en modo roommate de forma segura y ordenada y a su vez las personas que deseen poner en alquiler sus inmuebles tengan un intermediario en el cual apoyarse en temas financieros y legales. Nuestro objetivo con este modelo de negocio es poder brindar seguridad tanto a los jóvenes que van a alquilar un cuarto como a los arrendatarios que van a poder en alquilar su inmueble, brindándoles un aplicativo fácil de usar que cuenta con filtros de seguridad y pólizas que cubren daños para así garantizar una experiencia grata por ambas partes. Para poder ejecutar nuestro plan de negocio hemos llevado a cabo distintas acciones como validaciones tanto de negocio como de mercado, acciones reales de marketing y la elaboración de un pan financiero donde evaluaremos los resultados para confirmar que esta idea de negocio sea rentable y sostenible en el tiempo.In this work you will find a general plan for the business idea called Urommie which is an application in which young people residing in Metropolitan Lima will be able to find apartments in roommate mode in a safe and orderly manner and in turn people who wish to rent their properties have an intermediary in which to rely on financial and legal issues. Our goal with this business model is to provide security to both young people who are going to rent a room and tenants who will be able to rent their property, providing them with an easy-to-use application that has security filters and policies that cover damages to ensure a pleasant experience for both parties. In order to execute our business plan, we have carried out different actions such as business and market validations, real marketing actions and the elaboration of a financial plan where we will evaluate the results to confirm that this business idea is profitable and sustainable over time.Trabajo de investigació

HGF, IL-1α, and IL-27 are robust biomarkers in early severity stratification of COVID-19 patients

© 2021 by the authors.Pneumonia is the leading cause of hospital admission and mortality in coronavirus disease 2019 (COVID-19). We aimed to identify the cytokines responsible for lung damage and mortality. We prospectively recruited 108 COVID-19 patients between March and April 2020 and divided them into four groups according to the severity of respiratory symptoms. Twenty-eight healthy volunteers were used for normalization of the results. Multiple cytokines showed statistically significant differences between mild and critical patients. High HGF levels were associated with the critical group (OR = 3.51; p < 0.001; 95%CI = 1.95–6.33). Moreover, high IL-1α (OR = 1.36; p = 0.01; 95%CI = 1.07–1.73) and low IL-27 (OR = 0.58; p < 0.005; 95%CI = 0.39–0.85) greatly increased the risk of ending up in the severe group. This model was especially sensitive in order to predict critical status (AUC = 0.794; specificity = 69.74%; sensitivity = 81.25%). Furthermore, high levels of HGF and IL-1α showed significant results in the survival analysis (p = 0.033 and p = 0.011, respectively). HGF, IL-1α, and IL 27 at hospital admission were strongly associated with severe/critical COVID-19 patients and therefore are excellent predictors of bad prognosis. HGF and IL-1α were also mortality biomarkers.This work was supported by the Carlos III Health Institute (Grant COV20/00491)