PROTEÍNAS DO PLASMA SEMINAL ASSOCIADAS À CONGELABILIDADE DO SÊMEN SUÍNO

Esse trabalho objetivou identificar as proteínas do plasma seminal que estejam relacionadas com a proteção espermática durante o processo de criopreservação. Amostras de sêmen de 14 varrões foram coletadas e duas alíquotas foram separadas e destinadas à criopreservação do sêmen e ao estudo proteômico do plasma seminal. Os ejaculados foram submetidos a uma curva de resfriamento lenta. O sêmen descongelado foi ressuspenso e analisado quanto ao vigor e motilidade. Para o estudo das proteínas do plasma seminal, estes foram submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. Para a busca por marcadores de congelabilidade, foi feita uma divisão dos animais em dois grupos: congelabilidade boa (GFEs) e ruim (PFEs), segundo os resultados de vigor e motilidade após a descongelação. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado. Seis animais foram considerados do grupo GFEs e apresentaram uma média para vigor e motilidade espermática de 2,2 ± 0,8 e 41,8 ± 22,9, respectivamente, enquanto o grupo PFEs foi composto por oito animais que apresentaram média de 1,9 ± 0,6 de vigor espermático e 26,8 ± 17,5 de motilidade espermática. Foram encontrados 28 spots que divergiram significativamente entre os grupos, correspondendo a 16 proteínas. Dois desses foram expressos com maior intensidade no grupo GFEs, e correspondeu a apenas uma proteína característica do plasma seminal, a Carbohydrate-binding protein. Assim, conclui-se que a Carbohydrate-binding protein pode ser utilizada como um marcador de congelabilidade para a espécie suína

USO DE DIFERENTES ÍONS DE CÁLCIO ADICIONADOS AO DILUENTE DE SÊMEN SUÍNO RESFRIADO

Studies show that calcium ion is very important for the regulation of sperm motility. Thus the objective was to assess the quality of sperm swine flu under the effect of different types and concentrations of calcium ions in the BTS. The semen of boars was collected and analyzed for their parameters. The experiment included the use of different types of calcium diluted in BTS: calcium carbonate, calcium hydroxide, calcium phosphate dibasic anhydrous, hydrated calcium sulphate, anhydrous calcium sulphate, added to the BTS extender in different concentrations: 0 mM (control); 0.4 mM; 4 mM; 40mm and 400 mM. After collecting and seminal review, the samples were diluted and stored at 17 oC. To evaluate the effect of calcium was removed from an aliquot of each sample, which was subjected to a temperature of 37 °C for vigor, vitality and sperm motility, performed on D0, D2 and D4. The addition of calcium salts provides the sperm hyperactivation, and as a sperm membrane and acrosome membrane, these salts in their levels mentioned above did not exert a negative effect.Estudos mostram que o íon cálcio é muito importante para regulação da motilidade espermática. Assim, objetivou-se avaliar a qualidade dos espermatozoides suínos resfriados sob o efeito de diferentes tipos e concentrações de íons cálcio no diluente BTS. O sêmen de varrões foi coletado e analisado, quanto aos seus parâmetros. O experimento contou com a utilização de diferentes tipos de cálcio, diluídos em BTS: Carbonato de cálcio, Hidróxido de cálcio, Fostato dibásico anidro de cálcio, Sulfato hidratado de cálcio e Sulfato anidro de cálcio, adicionados ao diluente BTS em diferentes concentrações: 0 mM (controle); 0,4mM; 4mM; 40Mm e 400mM. Após a coleta e avaliação seminal, as amostras foram diluídas e armazenadas a 17 oC. Para a avaliação do efeito do cálcio, foi retirado uma alíquota de cada amostra, submetida à temperatura de 37 oC para a avaliação do vigor, motilidade e vitalidade espermática, realizadas no D0, D2 e D4. A adição dos sais de cálcio permite hiperativação aos espermatozoides quanto à membrana espermática e a membrana acrossômica, estes sais, em seus níveis já mencionados, não exerceram efeito negativo

LONGEVIDADE DO ESPERMATOZOIDE SUÍNO, INCUBADO EM DIFERENTES TEMPOS E TEMPERATURAS DE EQUILÍBRIO

The swine spermatozoa are more sensitive to temperature variations due to the lipid composition of their plasma membrane. Incubation periods can affect the membrane fluidity, providing better resistance to sperm, in addition to prolonging the period of semen storage and also can increase the proportion of spermatozoa with an intact acrosome. This study aimed to identify the best relation between temperature and incubation time of diluted swine semen. There were used 57 ejaculates from 6 boars divided into 05 treatments: T1 (control): Semen diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) at 35 °C 17 ° C (7 days); T2: Diluted semen (35 ºC) 30 ºC / 4 hours 17 ºC (7 days); T3: Diluted semen (35 ºC) 25 ºC / 4 hours 17 ºC (7 days); T4: Diluted semen (35 ° C) 30 ° C / 1 hour 25 ° C / 4 hours 17 ° C (7 days); T5: Diluted semen (35 ° C) 30 ° C / 1 hour 25 ° C / 1 hour 20 ° C / 4 hours 17 ° C (7 days). On the day of collection, in the first 8 hours weren’t observed differences between treatments (p> 0.05). In D0, values of vigor and motility of T5 were higher than T1 (p <0.05), and in D5 T1 was higher than T5 in relation to the same parameters (p <0.05). There were no differences between treatments (p>0.05), only between post-dilution semen and T3, T4 and T5 (P <0.05). Therefore, it was concluded that the previous incubation did not increase the storage time of the semen and did not bring losses during its conservation. There were statically analyzed: vigor, motility (Mann-Whitney), where in DO, T5 was superior to T1 (p<0.05), and in D5 and D9, T1 was superior to T5 (p<0.05), and morphology (“t” of Student Test), where there were not any differences between treatments. In all treatments, were found differences between pure semen and the diluted, and between the diluted and the following analyses (p<0.05). Therefore, conclusions is that incubation didn’t increase the time of semen preservation and that dilution moment is the most critical in the cooling process of the cooled semen.Os espermatozoides suínos apresentam sensibilidade às variações de temperaturas, devido à composição lipídica de sua membrana plasmática. Períodos de incubação prévia podem afetar a fluidez da membrana, proporcionando ao espermatozoide uma melhor resistência, além de prolongar o período de armazenamento do sêmen e aumentar a proporção de espermatozoides com acrossoma intacto. O presente trabalho objetivou identificar a melhor relação entre temperatura e tempo de incubação do sêmen suíno diluído. Foram utilizados 57 ejaculados, provenientes de seis varrões, divididos em cinco tratamentos: T1 (controle): Sêmen diluído em Beltsville Thawing Solution (BTS) (35 ºC) 17 ºC (7 dias); T2: Sêmen diluído (35 ºC) 30 ºC/4 horas 17 ºC (7 dias); T3: Sêmen diluído (35 ºC) 25 ºC/4 horas 17 ºC (7 dias); T4: Sêmen diluído (35 ºC) 30 ºC/1 hora 25 ºC/4 horas 17 ºC (7 dias); T5: Sêmen diluído (35 ºC) 30 ºC/1 hora 25 ºC/1 hora 20 ºC/4 horas 17 ºC (7 dias). No dia da coleta, nas primeiras 8 horas, não foram observadas diferenças entre os tratamentos, quanto ao vigor e motilidade (p>0,05). No período de conservação (0 a 7 dias), no D0, os valores de vigor e motilidade do T5 foram superiores ao T1 (p<0,05), e no D5 o T1 foi superior ao T5, em relação aos mesmos parâmetros (p<0,05). Já em relação ao percentual de acrossomas morfologicamente normais, não foram observadas diferenças entre os tratamentos (p>0,05), apenas entre o sêmen pós-diluição e T3, T4 e T5 (p<0,05). Portanto, concluiu-se que a incubação prévia não aumentou o tempo de conservação do sêmen, bem como não trouxe prejuízos, durante sua conservação

Characterization and biotechnological application of an acid α-galactosidase from Tachigali multijuga Benth. seeds

Tachigali multijuga Benth. seeds were found to contain protein (364 mg g−1 dwt), lipids (24 mg g−1 dwt), ash (35 mg g−1 dwt), and carbohydrates (577 mg g−1 dwt). Sucrose, raffinose, and stachyose concentrations were 8.3, 3.0, and 11.6 mg g−1 dwt, respectively. α-Galactosidase activity increased during seed germination and reached a maximum level at 108 h after seed imbibition. The α-galactosidase purified from germinating seeds had an Mr of 38,000 and maximal activity at pH 5.0–5.5 and 50 °C. The enzyme was stable at 35 °C and 40 °C, but lost 79% of its activity after 30 min at 50 °C. The activation energy (Ea) values for p-nitrophenyl-α-d-galactopyranoside (pNPGal) and raffinose were 13.86 and 4.75 kcal mol−1, respectively. The Km values for pNPGal, melibiose, raffinose, and stachyose were 0.45, 5.37, 39.62 and 48.80 mM, respectively. The enzyme was sensitive to inhibition by HgCl2, SDS, AgNO3, CuSO4, and melibiose. d-Galactose was a competitive inhibitor (Ki = 2.74 mM). In addition to its ability to hydrolyze raffinose and stachyose, the enzyme also hydrolyzed galactomannan