Nouveaux marqueurs des glioblastomes (valeur pronostique, profil d'expression, implication dans la vascularisation et la résistance aux antiangiogéniques)

L angiogenèse est une composante majeure de l agressivité des tumeurs malignes comme le glioblastome (GBM). Pourtant le traitement des patients par l Avastin, un anticorps bloquant du VEGF ne leur confère qu une augmentation limitée de la durée de survie sans progression. Les mécanismes de récurrence tumorale sont extrêmement complexes. Les glioblastomes sont en effet des tumeurs particulièrement hétérogènes sur le plan génétique, il existe très peu de marqueurs moléculaires d expression fiables. La contribution à la récidive des potentiels angiogéniques, infiltrants, et souches est difficile à modéliser. Notre laboratoire s intéresse à la caractérisation de nouveaux modulateurs de l angiogenèse, dont certains pourraient contribuer à la croissance tumorale, indépendamment ou en aval du VEGF chez les patients traités par l Avastin. Nous avons étudié l'expression de deux gènes candidats, surexprimés de façon significative dans les GBM et dont l'expression semble liée à l'angiogenèse tumorale : DPY19L1 et KIF20A. Nous avons identifié DPY19L1 comme marqueur pronostique du GBM. Ce gène est exprimé dans les cellules musculaires lisses, où il pourrait participer à la résistance de la tumeur aux anti-angiogéniques, en interagissant avec la voie thrombospondine/TGFb. KIF20A quant à lui est exprimé dans les cellules souches tumorales et semble impliqué dans la vascularisation et la résistance tumorale. Dans un second temps, nous avons étudié la façon dont les GBM échappent aux traitements anti-angiogéniques, tel que l Avastin, par la mise en place d'un système d'étude in vitro et in vivo, basé sur l utilisation de cellules de patients atteints de GBM, ayant la capacité de pousser sous forme de neurosphères. Les cellules xénogreffées chez la souris immunodéfisciente permettent le développement d une tumeur très invasive, co-optive et insensible aux traitements anti-angiogéniques. Ces tumeurs vont donc permettre d étudier ce mode de vascularisation participant activement à la récidive de la tumeur chez les patients traités avec l Avastin afin de développer des traitements contrecarrant ce mécanisme. Dans ce modèle, seul l un des gènes candidats définis au début de ce travail, DPY19L1, semble participer à la croissance tumorale.Angiogenesis is a major element driving malignancy of tumors like glioblastoma (GBM). However, Avastin,a neutralizing antibody directed against VEGF, provides only a limited therapeutical benefit in terms ofprogression free survival. The mechanisms of recurrence are complex due to extreme heterogeneity ofglioblastoma at the genetic and tissular levels. There is a lack of diagnosis and prognosis markers for GBM.The relative contribution of the angiogenic, infiltrative, and stem potentials to tumor relapse is difficult tomodel. Our laboratory aims at characterizing new modulators of tumor vascularization, some of whichcould contribute to the tumor growth and resistance, independently or downstream VEGF in patientstreated with Avastin. We have studied the expression of two candidate genes, significantly overexpressedin GBM and which expression seems to be linked to tumor vascularization: DPY19L1 and KIF20A. Weidentified DPY19L1 as a prognosis marker of GBM. This gene is expressed in smooth muscle cellsspecifically in tumoral tissue, where it could participate to tumor resistance to anti-angiogenics, byinteracting with the thrombospondin/TGFb pathway. KIF20A is expressed in glioma stem cells and seemsto be implicated in the vascularization and tumor resistance. Next, we have studied the way by whichGBM resist to anti-angiogenics such as Avastin, by the development of an in vitro and in vivo modelsystem, based on GBM cells cultured as neurospheres. When xenografted in immunodeficient mice, thesecells induce the growth of very invasive, co-optive tumors which are insensitive to angiogenesis inhibitors.These tumors will allow investigating alternative modes of vascularization which are actively involved intumor recurrence in patients treated with Avastin, namely co-option and transdifferentiation and theirmolecular regulation. In this model, one of the candidate genes defined at the beginning of this study,DPY19L1, seems to be implied in tumor growth and specifically labels tumor cells with co-optive andtransdifferenciating properties.BORDEAUX1-Bib.electronique (335229901) / SudocSudocFranceF

Evaluation de la filière AVC au CHU d'Angers (la filière thrombolyse et le parcours de soins des patients présentant un AVC ischémique ou un AIT)

L'évaluation de l'unité neuro-vasculaire et de la filière "thrombolyse" au CHU d'Angers semblait indispensable 4 ans après son ouverture. L'objectif était d'évaluer la prise en charge des patients victimes d'un AVC ischémique ou d'un AIT entre mai et novembre 2012 afin d'optimiser son fonctionnement. Concernant la filière thrombolyse, on note des délais de prise en charge proches des recommandations internationales notamment pour les délais arrivée-imagerie et arrivée-début de thrombolyse pour les patients pris en charge sur Larrey en comparaison avec une prise en charge au SAU. Cependant, nous notons un délai pré-hospitalier encore trop long. Concernant la prise en charge en unité neuro-vasculaire, celle-ci permet, en accord avec les données de la littérature, une réduction des complications en comparaison avec une prise en charge en unité d'hospitalisation conventionnelle. Cependant on note certaines faiblesses concernant le bilan étiologique souvent incomplet à la sortie d'hospitalisation du patient et des longs délais pour la réalisation des examens après la sortie, notamment pour l'IRM cérébrale et l'échographie cardiaque. Cette étude est extrêmement encourageante et montre de véritables progrès en terme de prise en charge des patients présentant un AVC. L'unité neuro-vasculaire du CHU d'Angers a su au cours des 4 dernières années se développer et occuper une place indispensable au sein du service de neurologie, du CHU mais aussi de la région.The evaluation of the neurovascular unit and die "thrombolysis" CHU d'Angers seemed necessary four years after its opening. The objective was to evaluate the management of patients who have suffered an ischemic stroke or TIA between May and November 2012 in order to optimize its operation.On thrombolysis sector, there deadlines care closer to international recommendations including the arrival-time imaging and arrival-early thrombolysis for patients supported on Larrey compared with care at UAA. However, we note a too long pre-hospital delay. Regarding support in neurovascular unit, it allows, in agreement with literature data, a reduction in complications compared with care in conventional hospital unit. However there is some weaknesses in the often incomplete in the hospital patient discharge and long delays in completion of the reviews after the release etiologic, including brain MRI and echocardiography. This study is extremely encouraging and shows real progress in terms of care for stroke patients. The Stroke Unit of the University Hospital of Angers knew in the past four years to develop and occupy a vital place in the Department of Neurology, University Hospital but also in the region.ANGERS-BU Médecine-Pharmacie (490072105) / SudocSudocFranceF

Coupling biophysical and micro-economic models to assess the effect of mitigation measures on greenhouse gas emissions from agriculture

International audienceAgricultural soils are a major source of atmospheric nitrous oxide (N2O), a potent greenhouse gas (GHG). Because N2O emissions strongly depend on soil type, climate, and crop management, their inventory requires the combination of biophysical and economic modeling, to simulate farmers' behavior. Here, we coupled a biophysical soil-crop model, CERES-EGS, with an economic farm type supply model, AROPAj, at the regional scale in northern France. Response curves of N2O emissions to fertilizer nitrogen (Nf) inputs were generated with CERES-EGC, and linearized to obtain emission factors. The latter ranged from 0.001 to 0.0225 kg N2O-N kg-1 Nf, depending on soil and crop type, compared to the fixed 0.0125 value of the IPCC guidelines. The modeled emission factors were fed into the economic model AROPAj which relates farm-level GHG emissions to production factors. This resulted in a N2O efflux 20% lower than with the default IPCC method. The costs of abating GHG emissions from agriculture were calculated using a first-best tax on GHG emissions, and a second-best tax on their presumed factors (livestock size and fertilizer inputs). The first-best taxation was relatively efficient, achieving an 8\% reduction with a tax of 11 euro/t-CO2-equivalent, compared to 68 euro/t-CO2eq for the same target with the second-best scheme

From crops to products for crops: preserving the ecosystem through the use of bio-based molecules

In a context of dwindling oil reserves and environmental pressures, the chemical industry needs to innovate by developing new processes for producing bioproducts from raw plant materials. Unsaturated fatty acids from vegetable oils constitute a highly promising renewable resource that can be used to diversify productions, decreasing reliance on petroleum. A starting material rich in oleic acid has been obtained through the selection of high-oleic sunflower varieties and enzymatic hydrolysis of the oil they produce. The double bonds of this unsaturated raw material have been cleaved in green oxidizing conditions involving a biphasic lipophilic-aqueous system including hydrogen peroxide as an oxidant and a peroxo-tungsten complex Q3 {PO2[WO(O2)2]4} as a phase-transfer catalyst (PTC) and co-oxidant. This PTC efficiently transferred oxygen to the substrate in the lipophilic phase. A mono-acid (pelargonic acid) and a di-acid (azelaic acid), with shorter, unusual hydrocarbon chains not present in the natural state, were synthesized and purified through an intensive process. Pelargonic acid was then formulated as an environmentally friendly biocontrol agent for weeds. We extended this green process of oxidative scission to other fatty acids and derivatives, to obtain other short-chain acids with diverse potential applications. This production chain (crops, reaction and purification processes, products, applications) is based on a sustainable development strategy. Dans un contexte de diminution des réserves fossiles et de pressions réglementaires et environnementales, l’industrie chimique tend à innover en développant de nouveaux procédés pour la production de bioproduits d’origine végétale. Les acides gras insaturés d’une huile végétale constitue une ressource renouvelable prometteuse qui peut être utilisée pour diversifier les productions et réduire la dépendance vis-à-vis du pétrole. Dans cet article, une matière première riche en acide oléique a été obtenue par l’hydrolyse enzymatique de l’huile de tournesol hautement oléique, obtenue par sélection variétale. Les doubles liaisons de cette matière première insaturée ont été clivées dans des conditions oxydantes impliquant un système biphasique aqueux-lipophile, avec le peroxyde d’hydrogène comme oxydant et le complexe peroxo-tungtène Q3{PO2[WO(O2)2]4} comme catalyseur de transfert de phase (CTP) et co-oxydant. Ce CTP a permis d’assurer un transfert efficace vers le substrat en phase lipophile. Un mono-acide (acide pélargonique) et un di-acide (acide azélaïque) à chaînes impaires plus courtes, peu présentes à l’état naturel, ont été ainsi synthétisés et purifiés grâce à un procédé intensifié. L’acide pélargonique a été formulé en tant qu’agent de biocontrôle écocompatible. Ce procédé vert de scission oxydante a été appliqué à d’autres acides gras et à leurs dérivés pour obtenir de nouveaux acides à chaînes courtes ayant différentes applications potentielles. Cette filière de production (culture, procédés de transformation et de purification, produits et leurs application) est basée sur une stratégie de développement durable

A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nuclei

The purpose of this study was to generate repetitive DNA sequence probes for the analysis of interphase nuclei by fluorescent in situ hybridisation (FISH). Such probes are useful for the diagnosis of chromosomal abnormalities in bovine preimplanted embryos. Of the seven probes (E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5) that were generated and partially sequenced, five corresponded to previously described Bos taurus repetitive DNA (E1A, E4A, Ba, W18, W5), one probe (W22) shared no homology with other DNA sequences and one (H1A) displayed a significant homology with Rattus norvegicus mRNA for secretin receptor transmembrane domain 3. Fluorescent in situ hybridisation was performed on metaphase bovine fibroblast cells and showed that five of the seven probes hybridised most centromeres (E1A, E4A, Ba, W18, W22), one labelled the arms of all chromosomes (W5) and the H1A probe was specific to three chromosomes (ch14, ch20, and ch25). Moreover, FISH with H1A resulted in interpretable signals on interphase nuclei in 88% of the cases, while the other probes yielded only dispersed overlapping signals

Coupling biophysical and micro-economic models to assess the effect of mitigation measures on greenhouse gas emissions from agriculture

Agricultural soils are a major source of atmospheric nitrous oxide (N2O), a potent greenhouse gas (GHG). Because N2O emissions strongly depend on soil type, climate, and crop management, their inventory requires the combination of biophysical and economic modeling, to simulate farmers' behavior. Here, we coupled a biophysical soil-crop model, CERES-EGS, with an economic farm type supply model, AROPAj, at the regional scale in northern France. Response curves of N2O emissions to fertilizer nitrogen (Nf) inputs were generated with CERES-EGC, and linearized to obtain emission factors. The latter ranged from 0.001 to 0.0225 kg N2O-N kg-1 Nf, depending on soil and crop type, compared to the fixed 0.0125 value of the IPCC guidelines. The modeled emission factors were fed into the economic model AROPAj which relates farm-level GHG emissions to production factors. This resulted in a N2O efflux 20% lower than with the default IPCC method. The costs of abating GHG emissions from agriculture were calculated using a first-best tax on GHG emissions, and a second-best tax on their presumed factors (livestock size and fertilizer inputs). The first-best taxation was relatively efficient, achieving an 8\% reduction with a tax of 11 euro/t-CO2-equivalent, compared to 68 euro/t-CO2eq for the same target with the second-best scheme.nitrous oxide; agro-ecosystem model; economic modeling; greenhouse gas; mitigation measures

Early Steps of a Thymic Tumor in SV40 Transgenic Mice: Hyperplasia of Medullary Epithelial Cells and Increased Mature Thymocyte Numbers Disturb Thymic Export

Bone marrow progenitors migrate to the thymus, where they proliferate and differentiate into immunologically competent T cells. In this report we show that mice transgenic for SV40 T and t antigens under the control of the L-pyruvate kinase promoter develop, in a first step, thymic hyperplasia of both thymocytes and epithelial cells. Morphological studies (histology, immunohistolabeling and electron microscopy) revealed modifications of the thymic microenvironment and gradual expansion of medullary epithelial cells in 1 month-old mice, taking over the cortical region. Then, a thymic carcinoma develops. Two-color labeling of frozen sections identified the transgene in medullary epithelial cells. Flow cytometry analysis demonstrated a marked increase in mature CD4+ and CD8+ thymocytes in adult mice (39±10×106 in transgenic mice and 12±5×106 in age-matched controls). Furthermore, thymocyte export was disturbed

Nouveaux procédés verts d'oxydation de l'acide oléique

Dans un contexte de raréfaction des ressources pétrolières et de pressions environnementales, l industrie chimique a besoin d'innover en développant de nouvelles filières destinées à l'élaboration de bioproduits, à partir de matières premières d'origine végétale. Les acides gras insaturés obtenus à partir des huiles végétales, constituent ainsi une ressource renouvelable à fort potentiel permettant de diversifier les approvisionnements d'origine pétrolière. Notre intérêt s'est porté sur la réaction de scission oxydative d acides gras insaturés pour conduire à des monoacides et diacides à chaînes courtes et impaires, peu ou pas disponibles à l état naturel. Ce type de chaînes hydrocarbonées est recherché dans l industrie, car elles possèdent des propriétés spécifiques, mais elles ne sont actuellement produites qu'à partir de ressources fossiles. L'objectif était donc de mettre au point un procédé de clivage oxydatif performant, moins onéreux et moins polluant que l ozonolyse, le seul procédé industriel opérationnel. Les conditions oxydantes sélectionnées font appel à l eau oxygénée en tant qu oxydant, associée à un catalyseur de transfert de phase, sans avoir recours à un solvant organique. Plusieurs catalyseurs de transfert de phase Q3{PO4[WO(O2)2]4} ont été préparés à partir de l acide tungstophosphorique, d eau oxygénée et d'un sel d ammonium quaternaire (Q+,Cl-), afin de comparer leur efficacité à transférer l'oxygène vers le substrat en phase organique. Une optimisation des paramètres réactionnels a été effectuée avec le catalyseur le plus performant. De plus, deux protocoles ont été mis au point, pour la préparation in-situ du catalyseur et pour sa récupération en fin de réaction. Le procédé a été généralisé à des dérivés d acides gras dans le but d obtenir d'autres acides à chaînes courtes, répondant à une large gamme d'applications. Le gain environnemental lié à ce nouveau procédé a été évalué par le calcul d indicateurs verts. Afin d envisager un recyclage plus aisé du catalyseur, l anion oxodiperoxotungstate {PO4[WO(O2)2]4}3-, l espèce active du catalyseur, a été supporté sur des résines échangeuses d anions. Deux types de résines macroporeuses ont été testées : des résines commerciales (Amberlite IRA 900 et Lewatit K7367) et des résines modifiées (type Merrifield). Nous avons montré que ces dernières conduisent à de meilleurs rendements de scission oxydative de l acide oléique que les résines commerciales, et ce, malgré la présence de solvants. Cependant, l immobilisation de l anion oxodiperoxotungstate sur les résines commerciales a permis la synthèse en une seule étape d acétals, composés présentant un grand intérêt pour la synthèse de dérivés à haute valeur ajoutée. En utilisant l acétone, à la fois comme réactif et solvant, nous avons obtenu de bons rendements en cétal. De plus, la réaction d acétalisation one-pot de l acide oléique a pu être étendue à d autres solvants (alcools), offrant la possibilité de synthétiser un large panel d acétals. Le procédé développé est particulièrement intéressant car il conduit directement à la synthèse d acétals ou de cétals à partir d un acide gras insaturé biosourcé, en évitant les étapes de réactions intermédiaires.In a context of scarce oil resources and environmental pressures, the chemical industry needs to innovate by developing new production chains aiming the design of bioproducts from biobased raw materials. Unsaturated fatty acids derived from vegetable oils, thus represents renewable resources with a great potential, allowing to diversify petroleum based supplies. Our interest is focused on the oxidative cleavage reaction of unsaturated fatty acids to yield mono-acids and di-acids with shorter and odd hydrocarbon chains, which are not available at a natural state. Such hydrocarbon chains are attractive for industry because they meet specific properties. But, they are currently only produced from fossil resources. Therefore, the objective was to develop an efficient method for oxidative cleavage, less expensive and less polluting than ozonolysis, the only operational industrial process. The selected oxidizing conditions employs hydrogen peroxide as oxidant, together with a phase transfer catalyst, without using an organic solvent. Several phase transfer catalysts Q3{PO4[WO(O2)2]4} were prepared from tungstophosphoric acid, hydrogen peroxide and a quaternary ammonium salt (Q+,Cl-), in order to compare their effectiveness in transferring oxygen to the substrate in the organic phase. An optimization of reaction parameters was carried out with the most performing catalyst. In addition, two protocols have been developed for the in-situ preparation of the catalyst and its recovery after reaction. The method was extended to fatty acids derivatives, in order to obtain other short chain acids, having a wide range of applications. The environmental benefits associated with this new method were evaluated by calculating green indicators. To consider an easier recycling of the catalyst, the oxodiperoxotungstate anion {PO4[WO(O2)2]4}3-, the active species of the catalyst was supported on anion-exchange resins. Two types of macroporous resins were tested: commercial resins (Amberlite IRA 900 and Lewatit K7367) and modified resins (type Merrifield). We showed that the modified resins, lead to the oxidative cleavage of oleic acid with higher yields than commercial ones, despite the presence of solvent. However, the immobilisation of the oxodiperoxtungstate anion on commercial resins allows the one-step synthesis of acetals, compounds of great interest for the synthesis of derivatives with a high added value. Using acetone as both reagent and solvent, we obtained good yields in ketal. Furthermore, the "one-pot" acetalization reaction of oleic acid was extended to other solvents (alcohols) as an opportunity to synthesize a wide range of acetals. The developed process is particularly interesting as it leads to the direct synthesis of ketal or acetals from an unsaturated fatty acid, avoiding the intermediate reaction stepsTOULOUSE-INP (315552154) / SudocSudocFranceF

Patient/family views on data sharing in rare diseases: study in the European LeukoTreat project.: Survey assessing data sharing in leukodystrophies

International audienceThe purpose of this study was to explore patient and family views on the sharing of their medical data in the context of compiling a European leukodystrophies database. A survey questionnaire was delivered with help from referral centers and the European Leukodystrophies Association, and the questionnaires returned were both quantitatively and qualitatively analyzed. This study found that patients/families were strongly in favor of participating. Patients/families hold great hope and trust in the development of this type of research. They have a strong need for information and transparency on database governance, the conditions framing access to data, all research conducted, partnerships with the pharmaceutical industry, and they also need access to results. Our findings bring ethics-driven arguments for a process combining initial broad consent with ongoing information. On both, we propose key item-deliverables to database participants