Melanin is an essential component for the integrity of the cell wall of Aspergillus fumigatus conidia

BACKGROUND: Aspergillus fumigatus is the most common agent of invasive aspergillosis, a feared complication in severely immunocompromised patients. Despite the recent commercialisation of new antifungal drugs, the prognosis for this infection remains uncertain. Thus, there is a real need to discover new targets for therapy. Particular attention has been paid to the biochemical composition and organisation of the fungal cell wall, because it mediates the host-fungus interplay. Conidia, which are responsible for infections, have melanin as one of the cell wall components. Melanin has been established as an important virulence factor, protecting the fungus against the host\u27s immune defences. We suggested that it might also have an indirect role in virulence, because it is required for correct assembly of the cell wall layers of the conidia. RESULTS: We used three A. fumigatus isolates which grew as white or brown powdery colonies, to demonstrate the role of melanin. Firstly, sequencing the genes responsible for biosynthesis of melanin (ALB1, AYG1, ARP1, ARP2, ABR1 and ABR2) showed point mutations (missense mutation, deletion or insertion) in the ALB1 gene for pigmentless isolates or in ARP2 for the brownish isolate. The isolates were then shown by scanning electron microscopy to produce numerous, typical conidial heads, except that the conidia were smooth-walled, as previously observed for laboratory mutants with mutations in the PKSP/ALB1 gene. Flow cytometry showed an increase in the fibronectin binding capacity of conidia from mutant isolates, together with a marked decrease in the binding of laminin to the conidial surface. A marked decrease in the electronegative charge of the conidia and cell surface hydrophobicity was also seen by microelectrophoresis and two-phase partitioning, respectively. Ultrastructural studies of mutant isolates detected considerable changes in the organisation of the conidial wall, with the loss of the outermost electron dense layer responsible for the ornamentations seen on the conidial surface in wild-type strains. Finally, analysis of the conidial surface of mutant isolates by atomic force microscopy demonstrated the absence of the outer cell wall rodlet layer which is composed of hydrophobins. CONCLUSION: These results suggest that, in addition to a protective role against the host\u27s immune defences, melanin is also a structural component of the conidial wall that is required for correct assembly of the cell wall layers and the expression at the conidial surface of adhesins and other virulence factors

Comparison of two enzymatic immunoassays, high resolution mass spectrometry method and radioimmunoassay for the quantification of human plasma histamine

International audienceHistamine (HA) is one of the main immediate mediators involved in allergic reactions. HA plasma concentration is well correlated with the severity of vascular and respiratory signs of anaphylaxis. Consequently, plasma quantification of HA is useful to comfort the diagnosis of anaphylaxis. Currently, radioimmunoassay (RIA) is the gold standard method to quantify HA due to its high sensitivity, but it is time consuming, implicates specific formations and cautions for technicians, and produces hazardous radioactive wastes. The aim of this study was to compare two enzymatic immunoassays (EIA) and one in-house liquid chromatography high-resolution mass spectrometry method (LC-HRMS) with the gold standard method for HA quantification in plasma samples of patients suspected of anaphylaxis reactions. Ninety-two plasma samples were tested with the 4 methods (RIA, 2 EIA and LC-HRMS) for HA quantification. Fifty-eight samples displayed HA concentrations above the positive cut-off of 10 nM evaluated by RIA, including 18 highly positive samples (>100 nM). Our results showed that Immunotech® EIA and LC-HRMS concentrations were highly correlated with RIA values, in particular for samples with a HA concentration around the positive cut-off. In our hands, plasma concentrations obtained with the Demeditec Diagnostics® EIA correlated less with results obtained by RIA, and an underestimation of plasma HA levels led to a lack of sensitivity. In conclusion, this study demonstrates that Immunotech® EIA and LC-HRMS method could be used instead of RIA to assess plasma HA in human diagnostic use

Les autoanticorps dirigés contre l'appareil de Golgi (étude à partir de 40 sérums)

POITIERS-BU Médecine pharmacie (861942103) / SudocSudocFranceF

Test d'activation des basophiles à l'aide de l'anticorps CD203c dans le cadre des allergies aux piqûres d'insectes (mise au point et résultats sur 57 patients non sélectionnés)

ANGERS-BU Médecine-Pharmacie (490072105) / SudocSudocFranceF

Suivi des sous-populations lymphocytaires et de la mesure de l'avidité anti-VIH chez des patients sous traitement antirétroviral actif (étude AVIB)

ANGERS-BU Médecine-Pharmacie (490072105) / SudocSudocFranceF

Microbiotes, poumon et aménagement des interfaces. Nouveaux regards sur l’immunologie, et peut-être sur l’homme ?

International audienc

Immunosénescence : vieillissement « et » ou « du » système immunitaire

International audienceLa plus grande sensibilité aux infections, aux tumeurs, aux maladies auto-immunes et la moins bonne réponse vaccinale sont les caractéristiques de la réponse immunitaire du sujet âgé. Cette tranche de population en pleine expansion jusqu'en 2014 dans les sociétés industrielles, présente une plus grande fréquence de comorbidités, qui sont autant de facteurs aggravants de la déficience de la réponse immunitaire identifiée sous le vocable d'immunosénescence. Pour en rendre compte, il faut envisager la dialectique de la participation du système immunitaire au processus de vieillissement physiologique et les conséquences de ce dernier sur la réponse immunitaire dans ses branches innée et adaptative, avec des facteurs génétiques, épigénétiques et environnementaux intriqués. L'étude de nombreux paramètres immunitaires a permis d'identifier comme facteurs prédictifs de vieillissement du système immunitaire une plus grande fréquence de lymphocytes T CD8+CD28-, une faible réponse proliférative, un rapport CD4/CD8 bas (< 1), un nombre de lymphocytes B2 diminué et une séropositivité pour le CMV. Réponse immunitaire-télomère-vieillissement

Analyses de diagnostic rapide en immunologie

International audienceCertaines pathologies, relevant d'un dysfonctionnement de la réponse immunitaire, peuvent rapidement compromettre le pronostic fonctionnel de certains organes, voire le pronostic vital, car le plus souvent ce sont des maladies systémiques, de diagnostic difficile au début quand elles sont pauci-symptomatiques alors qu'elles peuvent flamber subitement. C'est pourquoi le laboratoire d'immunologie, aux techniques encore non automatisées pour certaines, et qui travaille majoritairement en série, se doit de bousculer son organisation pour répondre à la demande argumentée d'un clinicien confronté à une urgence diagnostique. Il s'agit de la recherche d'auto-anticorps dans le cadre des glomérulonéphrites rapidement progressives et des syndromes pneumo-rénaux, du dosage des médiateurs de l'allergie dans le contexte des chocs anaphylactiques, du diagnostic de l'infection tuberculeuse latente en pédiatrie, de la recherche des lymphocytes T activés en cas de syndrome d'activation macrophagique et enfin de l'analyse qualitative et quantitative des immunoglobulines, notamment devant une suspicion de syndrome d'hyper-viscosité ou d'insuffisance rénale aiguë d'origine myélomateuse

Diagnostic biologique des déficits immunitaires primitifs

International audienceLe diagnostic précoce des déficits immuni-taires primitifs (DIP) est un élément clé pour une prise en charge adéquate des patients, afin de limiter la survenue de complications. Les manifestations cliniques et biologiques des DIP sont variées, incluant les infections récurrentes, mais aussi des manifestations oncologiques ou auto immunes. Des exa-mens biologiques simples, tels que l'hémo-gramme, le dosage pondéral des immuno-globulines et les sérologies post-vaccinales, peuvent permettre d'orienter le diagnostic étiologique. Des analyses plus spécialisées, comme le phénotypage lymphocytaire ou le dosage des sous classes d'IgG peuvent être réalisées en seconde intention. L'ensemble de ces examens nécessitent une interpré-tation rigoureuse en tenant notamment compte de l'âge du patient et du spectre infectieux