Determinación de los niveles de expresión del RNAm de adipocinas por efecto de la glicina en ratones obesos

Obesity is one of the most common diseases in the general population. It is not only a social and cosmetic problem but also a serious ailment that leads to several genetic, metabolic and psychological disturbances. Its prevalence is rapidly increasing and although the rate of population affected is variable in different countries, it is thought that in future years most of the world population will be obese or with overweight. Obesity is a chronic disease that results from an unbalance between the food eaten and energy expended. The excessive energy is stored in adipocytes (fat cells), which increase in size and/or number. Obesity is currently considered an inflammatory process since it is associated with a dysregulation in circulating levels of inflammation markers such as interleukin 6 (IL-6), tumor necrosis factor (TNF-a), resistin, and leptin, among others. These markers play a very important role in the pathophysiology of obesity, since they are dysregulated in this disease. It must be noted that these changes are also associated with several diseases such as type 2 diabetes (DT2), hypertension and cardiovascular diseases. On the other hand, the growing knowledge about genes and molecules involved in the development of obesity allows envisioning new potentially useful strategies for prevention and/or treatment of obesity. Recent studies show that glycine blocks the systemic inflammation found in many pathological states. However, the effect of glycine on obesity is unknown. The objective of this research was to study the effect of glycine on glucose tolerance, obesity and insulin resistance, as well as other biochemical, and mRNA expression of adipokines in a murine obesity model induced with monosodium glutamate (MSG). Results indicate that mice treated with MSG have impaired glucose tolerance at 14th week of age and at the end of the study (18th week) hiperinsulinemia and insulin resistance were noted. No significant changes were found in triglycerides, cholesterol and A1C, nor in glutamic-oxaloacetate transaminase (GOT) and glutamic-pyruvic transaminase (GPT) activity compared with values of lean mice (controls). Obese mice were treated with 0.1 g/kg of glycine during 30 days. At the end of treatment adipokines expression was measured with RT-PCR in real time. It was demonstrated that glycine decreases expression of proinflammatory citokines, showing a trend to increase adiponectina (anti-inflammatory adipokine). Based on our results, it can be stated that this aminoacid has antiinflammatory effects in the MSG induced obesity model, representing a very interesting option to balance the inflammation associated with the obesity.La obesidad es uno de los padecimientos más comunes que aquejan a la población en general, la cual no sólo es un problema social y estético sino también es una enfermedad seria que resulta de diversos factores, entre los que destacan los genéticos, metabólicos y psicológicos. Su prevalencia está aumentando rápidamente y aunque el porcentaje de la población afectada varía de unos países a otros, se considera que en los próximos años la mayor parte de la población mundial será obesa o presentará sobrepeso. La obesidad es una enfermedad crónica que se produce por un desequilibrio entre la energía ingerida y la energía gastada. El exceso de energía se almacena en los adipocitos, mismos que aumentan en tamaño y/o en número. En la actualidad la obesidad se considera un proceso inflamatorio debido a que se relaciona con una desregulación en los niveles circulantes de marcadores de inflamación, como interleucina 6 (IL-6), factor de necrosis tumoral (TNF-a), resistina, leptina, entre otros. Estos marcadores desempeñan un papel importante en la fisiopatología de la obesidad ya que se encuentran desregulados en esta enfermedad. Cabe señalar que estos cambios están asociados con diversas situaciones patológicas, tales como diabetes tipo 2 (DT2), hipertensión y enfermedades cardiovasculares. Por otro lado, el conocimiento creciente con respecto a los genes y moléculas implicados en el desarrollo de la obesidad permite entrever nuevas estrategias potencialmente útiles para la prevención y/o tratamiento de la obesidad. Estudios recientes demuestran que la glicina bloquea el proceso inflamatorio sistémico que se origina en una amplia variedad de estados patológicos, pero se desconoce su efecto en la obesidad. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de la glicina sobre la tolerancia a la glucosa, la obesidad y la resistencia a la insulina, así como en otros parámetros bioquímicos y sobre la expresión del RNAm de adipocinas en un modelo murino de obesidad inducido con glutamato monosódico (GMS). Los resultados indican que los ratones tratados con GMS presentan intolerancia a la glucosa a partir de las 14 semanas de edad; al final del estudio (18 semanas) se observa hiperinsulinemia y resistencia a la insulina. No se encontraron cambios significativos en los niveles de triglicéridos, colesterol y A1C; tampoco en las actividades de las transaminasas glutámico oxaloacética (TGO) y glutámico pirúvica (TGP) con respecto a los valores de ratones delgados (controles). Se trataron ratones obesos con 0.1g de glicina /kg de peso durante 30 días; al final del tratamiento se determinaron los niveles de expresión de las adipocinas por RT-PCR en tiempo real. Se demostró que el tratamiento con glicina disminuye la expresión de adipocitocinas proinflamatorias y tiende a aumentar adiponectina (adipocina antiinflamatoria). Con base en nuestros resultados, se puede decir que este aminoácido tiene efectos antiinflamatorios en el modelo de obesidad inducido con GMS, constituyendo una interesante alternativa para reducir el cuadro inflamatorio asociado con este padecimiento

La glicina inhibe la activación de NF-κB inducida por TNF-α en adipocitos 3T3-L1

Numerosos compuestos naturales que poseen propiedades quimiopreventivas o quimioprotectoras son de importancia vital en el manejo de patologías con un componente inflamatorio. Dichas propiedades suelen atribuirse a su actividad antioxidante o antiinflamatoria. La glicina posee actividad quimioprotectora debido a que reduce eficazmente los niveles séricos de citocinas proinflamatorias y aumenta los niveles de citocinas antiinflamatorias en células 3T3-L1. Disminuye significativamente el porcentaje de hemoglobina glicada (A1c), la sensibilidad a estímulos proinflamatorios e incrementa la expresión de interleucina 10 (IL-10) en monocitos. Una dieta suplementada con glicina disminuye el estrés oxidativo y aumenta la actividad de enzimas antioxidantes en ratas sometidas a shock hemorrágico. Recientemente, se ha demostrado que la glicina disminuye la expresión y secreción de adipocinas proinflamatorias en ratones obesos inducidos con glutamato monosódico (GMS/Ob). Se ha postulado que estos efectos pueden ser explicados por una reducción en la activación del factor nuclear kappa B (NF-κB). NF-κB es un factor de transcripción esencial para la respuesta inflamatoria. Hasegawa et al. (2011) reportaron una reducción de NF-κB por empleo de la glicina. En este sentido, la presente investigación se centró en estudiar la influencia de la glicina sobre la vía del NF-κB en cultivos de fibroblastos diferenciados a adipocitos. Para evaluar el efecto de la glicina en la activación del NF-κB, sobre los inhibidores de este factor de transcripción (IκB’s), sus subunidades y la expresión de adipocinas, las células fueron tratadas con TNF- 5 ng/mL durante 30 min (control positivo) con glicina 10 mM (30 min, 1 h y 2 h), seguido de la adición de 5 ng/mL de TNF- (30 min), o bien sólo el pretratamiento con glicina 10 mM (30 min, 1 h, 2 sin ningún otro estímulo. La glicina y el TNF- se disolvieron en DMEM. Las células control fueron tratadas con el mismo volumen del disolvente. Las proteínas nucleares y citosólicas fueron cuantificadas a través de ensayos de EMSA, Western Blot y Oxy-Blot, mientras que la expresión de citocinas se midió por RT-PCR en tiempo real. Los resultados muestran que el pretratamiento con glicina interfiere con la activación de NF-κB, que es estimulada por el factor de necrosis tumoral alfa (TNF- ). La glicina sola estimula la activación de NF-κB de una manera inusual, donde la degradación del inhibidor κB- (IκB-) es más importante que la de inhibidor κB- (IκB-). El pretratamiento durante 60 minutos con glicina, seguido por TNF-, suprime la expresión de TNF- e interleucina 6 (IL-6). Sin embargo, el tratamiento con glicina sin estimulación de TNF-, no modificó los niveles de expresión de ninguna adipocina. Estos resultados apoyan la idea de que la glicina podría ser utilizada en el tratamiento alternativo de la inflamación crónica que se caracteriza por una elevada producción de citocinas proinflamatorias, que es una característica de la obesidad y otras comorbilidades.Many natural compounds that possess chemopreventive or chemoprotective properties are of vital importance in the management of diseases with an inflammatory component. These properties are attributed to its antioxidant or antiinflammatory activity. Glycine has chemoprotective activity because it strongly reduces serum levels of proinflammatory cytokines and increased inflammatory cytokine levels in 3T3-L1 cells. Significantly reduces the percentage of glycated hemoglobin (A1c), proinflammatory stimuli sensitivity and increases the expression of interleukin 10 (IL-10) in monocytes. A diet supplemented with glycine reduces oxidative stress and increases antioxidant enzymes activity in rats subjected to hemorrhagic shock. Recently, it was demonstrated that glycine reduces the expression and secretion of proinflammatory adipokines in monosodium glutamateinduced obese mice (MSG/Ob). It has been postulated that these effects can be explained by a reduction in the activation of nuclear factor kappa B (NF-κB). NF-κB is a transcription factor essential for inflammatory response. Hasegawa et al. (2011) reported a reduction of NF-κB by employing glycine. In this sense, this research focused on studying the influence of glycine on the pathway of NF-κB in cultured fibroblasts differentiated into adipocytes. The effects of glycine in activation of NF-κB, on the inhibitors of this transcription factor (IκB's) and its subunits, as well as in the expression of adipokines, were evaluated in cells treated with TNF- 5 ng/mL during 30 min (positive control), 10 mM glycine (30 min, 1 h and 2 h), followed by addition of TNF- 5 (ng/mL, 30 min), either alone or with pretreatment with 10 mM glycine (30 min, 1 h, 2 h) without further stimulation. Glycine and TNF- were dissolved in DMEM. Control cells were treated with the same volume of solvent. Nuclear and cytosolic proteins were quantified by EMSA assays, Western blot and Oxy-blotting, whereas the expression of cytokines was measured by RT-PCR in real time. The results show that pretreatment with glycine interferes with activation of NF-κB, that is stimulated by tumor necrosis factor alpha (TNF-). The glycine alone stimulates the activation of NF-κB in an unusual way, where degradation κB- inhibitor (IκB-) is more important than κB- inhibitor (IκB-). Pretreatment with glycine for 60 minutes, followed by TNF-, suppresses the expression of TNF- and Interleukin 6 (IL-6). However, treatment with glycine alone without stimulation of TNF- did not change expression levels of any adipokine. These results support the idea that the glycine may be used in alternative treatment of chronic inflammation that is characterized by a high production of proinflammatory cytokines, which is a characteristic of obesity and other comorbidities

Interacción de las isoformas del receptor de glicina con glicina (GlyR/glicina) por estudios computacionales

La glicina actúa regulando la vía TNF-α/NF-ĸB bloqueando los procesos inflamatorios en adipocitos, a través de la participación de un receptor especifico, asociado a canales de Cl-, compuesto de tres subunidades distintas α, ᵦ y gefirina. Actualmente no existen estructuras cristalográficas de las isoformas α1, α2 y α4, solamente de α3 de humano, por lo que esta subunidad fue utilizada para obtener los modelos por homología para el resto de las isoformas, permitiendo determinar la energía de unión (ΔGu) entre las isoformas del GlyR/glicina. Los resultados indicaron que la unión está conducida por interacciones electrostáticas en las diferentes isoformas, principalmente por la participación de un glutámico y treonina en el sitio de unión del GlyR/glicina. La α3 presentó mayor interacción, ya que su expresión es abundante en las células de médula. Estos resultados comprueban que si existe interacción entre la glicina y su receptor.Glycine acts regulating TNF-α/NF-ĸB pathway, blocking inflammatory processes in adipocytes, through the participation of a specific receptor, associated with Cl- channels, composed of three different α, ᵦ and gephyrin subunits. Currently there are no crystallographic structures of the α1, α2 and α4 isoforms, only of human α3, therefore, this subunit was used to obtain homology models for the rest of the isoforms, allowing the determination of the binding energy (DGb) between the GlyR/glycine isoforms. The results indicated that the binding is driven by electrostatic interactions in the different isoforms, mainly by the participation of a glutamic and threonine in the GlyR/glycine binding site. α3 showed a greater interaction since its expression is abundant in marrow cells. These results prove that there is an interaction between glycine and its receptor

Resultados del tratamiento endoscópico en fugas biliares. Experiencia del Centro Médico Nacional Siglo XXI IMSS

ResumenLas lesiones o fugas biliares ocurren posterior a la colecistectomía abierta o laparoscópica con una incidencia del 0.1-1%, entre otras causas. La fuga biliar (Strasberg A-C) se trata mediante colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (CPRE). La esfinterotomía y colocación de endoprótesis biliar disminuyen la presión del conducto biliar al duodeno, y promueven el flujo biliar transpapilar, con una respuesta del 70-90%.ObjetivosDescribir las características de las fugas biliares benignas tratadas mediante CPRE, las complicaciones asociadas, así como evaluar los resultados del tratamiento endoscópico.Material y métodosEstudio descriptivo, retrospectivo. Se analizaron los reportes de CPRE de los años 2011-2013 con diagnóstico de fuga biliar de causa benigna.ResultadosSe revisaron 560 reportes. Ochenta y dos (14.64%) se sometieron a CPRE. El antecedente más común fue la colecistectomía laparoscópica en 62 (75.6%). Cincuenta y tres pacientes (64.6%) tuvieron fuga biliar de bajo y alto gasto en un34.1% y un 30.5%, respectivamente. El sitio de fuga más frecuente: muñón cístico un 29.3% y hepatocolédoco un (20.7%). A todas se realizó esfinterotomía y en las de alto gasto se colocó endoprótesis biliar, resolviéndose la fuga al mes en el 95.1% y a los 6 meses en el 100% de los pacientes. Otras complicaciones relacionadas con la fuga biliar fueron coledocolitiasis y estenosis biliar benigna en 18 pacientes (22%).ConclusionesEl tratamiento endoscópico es resolutivo en la mayoría de los pacientes con fugas biliares postoperatorias ya sea mediante la técnica de esfinterotomía o la combinada con colocación de prótesis biliar.AbstractInjuries or bile leaks, among other causes, occur after open or laparoscopic cholecystectomy with an incidence of 0.1-1%. These bile leaks (Strasberg A-C) are treated by endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP). Sphincterotomy and placement of biliary stent decreases bile duct pressure to the duodenum, and promotes transpapillary bile flow, with a 70-90% response.ObjetivesTo describe the characteristics of benign bile leaks treated by ERCP and their associated complications, as well as to evaluate the results of endoscopic treatment.Material and methodsA descriptive, retrospective study was conducted by performing an analysis on ERCP reports from2011-2013, with a diagnosis of benign bile leakage.ResultsA total of 560 reports were reviewed, of which 82 (14.64%) underwent ERCP. The most common history was laparoscopic cholecystectomy in 62 (75.6%). A low biliary leakage (30.5%) and a high output (30.5%) was observed in 53 (64.6%) patients. The most common leakage site was cystic in 29.3%, and hepatobiliary stump in 20.7%. A sphincterotomy was performed on all of them, and a biliary stent was inserted in those with high output, with the leak being resolved in 95.1% of patients at 1 month, and in 100% at 6 months. Other complications related to biliary leakage were choledocholithiasis and benign biliary stenosis in 18 (22%) patients.ConclusionsThe endoscopic treatment using the sphincterotomy technique, or combined with biliary stent placement is effective in most patients with bile leaks

Cucurbita ficifolia Bouché (Cucurbitaceae) modulates inflammatory cytokines and IFN-γ in obese mice

This study aimed to investigate the effect of aqueous extract of Cucurbita ficifolia on systemic chronic inflammation in an obesity model induced by monosodium glutamate (MSG) via modulating the expression of adipokines (TNF-α, IL-6, resitin and adiponectin) and immune-regulatory cytokines (IFN-γ and IL-10). Cucurbita ficifolia extract was administered daily by gavage to lean and MSG-obese mice for 30 days. At the end of treatment, cytokine mRNA expression in adipose tissue was determined by real-time polymerase chain reaction (PCR), and the protein levels of these cytokines were also quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Cucurbita ficifolia extract decreased body weight and inflammation in MSG-obese mice by reducing the expression of TNF-α and IL-6; these decreases were parallel to significant reductions in protein levels. The extract also increased protein levels of IL-10 in lean mice and IFN-γ in both lean and MSG-obese mice. In conclusion, Cucurbita ficifolia extract modulates systemic chronic inflammation in MSG- obese mice and could to have a beneficial effect on the adaptive immune system in obesity.The accepted manuscript in pdf format is listed with the files at the bottom of this page. The presentation of the authors' names and (or) special characters in the title of the manuscript may differ slightly between what is listed on this page and what is listed in the pdf file of the accepted manuscript; that in the pdf file of the accepted manuscript is what was submitted by the author