Fluorescent labeling in semi-solid medium for selection of mammalian cells secreting high-levels of recombinant proteins

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Despite the powerful impact in recent years of gene expression markers like the green fluorescent protein (GFP) to link the expression of recombinant protein for selection of high producers, there is a strong incentive to develop rapid and efficient methods for isolating mammalian cell clones secreting high levels of marker-free recombinant proteins. Recently, a method combining cell colony growth in methylcellulose-based medium with detection by a fluorescently labeled secondary antibody or antigen has shown promise for the selection of Chinese Hamster Ovary (CHO) cell lines secreting recombinant antibodies. Here we report an extension of this method referred to as fluorescent labeling in semi-solid medium (FLSSM) to detect recombinant proteins significantly smaller than antibodies, such as IGF-E5, a 25 kDa insulin-like growth factor derivative.</p> <p>Results</p> <p>CHO cell clones, expressing 300 μg/ml IGF-E5 in batch culture, were isolated more easily and quickly compared to the classic limiting dilution method. The intensity of the detected fluorescent signal was found to be proportional to the amount of IGF-E5 secreted, thus allowing the highest producers in the population to be identified and picked. CHO clones producing up to 9.5 μg/ml of Tissue-Plasminogen Activator (tPA, 67 kDa) were also generated using FLSSM. In addition, IGF-E5 high-producers were isolated from 293SF transfectants, showing that cell selection in semi-solid medium is not limited to CHO and lymphoid cells. The best positive clones were collected with a micromanipulator as well as with an automated colony picker, thus demonstrating the method's high throughput potential.</p> <p>Conclusion</p> <p>FLSSM allows rapid visualization of the high secretors from transfected pools prior to picking, thus eliminating the tedious task of screening a high number of cell isolates. Because of its rapidity and its simplicity, FLSSM is a versatile method for the screening of high producers for research and industry.</p

Comment des parents d’élèves et des enseignants spécialisés voient la réussite et la difficulté scolaires

L’objectif de cette étude est d’explorer la manière dont des acteurs du système scolaire profanes (parents d’élèves) ou experts (enseignants spécialisés) se représentent l’élève en réussite scolaire et l’élève en difficulté scolaire. Pour ce faire, nous avons interrogé 29 parents d’élèves et 33 enseignants spécialisés. Les résultats indiquent que la représentation de la difficulté se décompose en trois catégories (environnement, caractéristiques personnelles et culture), alors que celle de la réussite se compose de deux catégories (environnement et caractéristiques personnelles). Les autres résultats montrent que la représentation d’un élève en difficulté scolaire n’est pas l’inverse de celle d’un élève en réussite, et que les causes évoquées pour expliquer ces statuts ne sont pas non plus opposées. Enfin la représentation des parents et des enseignants spécialisés diffèrent globalement, avec notamment une homogénéité et un consensus plus grands dans la représentation de ces derniers.The purpose of this study is to look closely at the way people within the school system–uninitiated (parents) or expert (special education teachers)–see successful students and those having learning difficulties. To do so we have questioned 29 parents and 33 special education teachers. The results show that in those people’s minds, difficulties are sorted out into three categories: backgrounds, personal and cultural features whereas success is divided into two categories: backgrounds, and personal features. Other results show that the mental representation that people have of a child with learning difficulties is not the opposite of that of a successful one, and the reasons given to explain these phenomena are not opposed either. Finally the parents’ and teachers’ mental representations are on the whole rather different, with, for instance, better homogeneity and wider consensus in teachers.El objetivo de este estudio estriba en explorar cómo actores profanos del sistema escolar (padres de alumnos) o expertos (docentes especializados) se representan al alumno en situación de éxito escolar y al alumno con dificultades escolares. Para ello, interrogamos a 29 padres de alumnos y a 33 docentes especializados. Los resultados indican que la representación de las dificultades se descompone en tres categorías (entorno, características personales y cultura), mientras el éxito se compone de dos categorías (entorno y características personales). Los otros resultados muestran que la representación de un alumno con dificultades escolares no es inversa a la de un alumno que conoce el éxito escolar, y que los motivos mencionados para explicar esos estatus tampoco se oponen. Por fin, la representación de los padres y de los docentes especializados difiere globalmente, en particular con una homogeneidad y un consenso más importantes en la representación de los docentes.Das Ziel dieser Studie ist, die Art und Weise zu beobachten, wie Laien (Eltern) oder Profis (Sonderschullehrer) im Schulsystem sich den erfolgreichen Schüler und den Schüler mit Schwierigkeiten vorstellen. Zu diesem Zweck haben wir 29 Eltern und 33 Sonderschullehrer befragt. Die Ergebnisse zeigen, dass die Vorstellung der Schwierigkeit sich in drei Kategorien gliedert (Umfeld, persönliche Merkmale und Kultur), während der Erfolg aus zwei Kategorien besteht (Umfeld und persönliche Merkmale). Die übrigen Ergebnisse zeigen, dass die Vorstellung eines Schülers mit Schwierigkeiten nicht das genaue Gegenteil von der eines erfolgreichen Schülers ist, und dass die Gründe, die diese beiden Status erklären können auch nicht entgegengesetzt sind. Zum Schluss unterscheiden sich insgesamt die Vorstellungen der Eltern und die der Sonderschullehrer, insbesondere mit größerer Homogenität und größerem Konsens in den Vorstellungen der Lehrer

Stéréotypes de la difficulté scolaire : un outil de recueil

Les recherches actuelles dans le domaine de l’éducation attestent de l’influence des stéréotypes sociaux sur les résultats académiques des élèves. Afin de connaître les stéréotypes liés aux « élèves en difficulté scolaire » au cycle 3, nous avons construit un outil auprès de psychologues scolaires, d’étudiants, de parents d’élèves, d’élèves de cycle 3, d’enseignants spécialisés et de stagiaires professeurs des écoles (PE2). L’analyse a permis d’obtenir quarante-neuf traits généraux mais aussi spécifiques aux groupes interrogés. Différentes méthodologies permettant de mesurer les stéréotypes avec cet outil sont présentées en discussion.Current research in the field of education shows the effects of social stereotypes on students’ academic performances. To determine the stereotypes of “5th grade students having learning disabilities”, we built an instrument with a sample of educational psychologists, undergraduate students, 5th grade students’ parents, 5th grade students, specialised teachers, and student teachers. Forty-nine traits that are general and sometimes specific to the respondent groups were obtained. The discussion section presents different ways to measure these stereotypes using this instrument

Seroprevalence of anti-SARS-CoV-2 IgG at the first epidemic peak in French Guiana, July 2020.

Funder: National Research AgencyFunder: Regional Health Agency of French GuianaFunder: Institut Pasteur Urgence COVID-19 fundraisingBACKGROUND: While Latin America has been heavily affected by the pandemic, only a few seroprevalence studies have been conducted there during the first epidemic wave in the first half of 2020. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: A cross-sectional survey was performed between 15 July 2020 and 23 July 2020 among individuals who visited 4 medical laboratories or 5 health centers for routine screening or clinical management, with the exception of symptomatic suggestive cases of covid-19. Samples were screened for the presence of anti-SARS-CoV-2 IgG directed against domain S1 of the SARS-CoV-2 spike protein using the anti-SARS-CoV-2 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from Euroimmun. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: The overall seroprevalence was 15.4% [9.3%-24.4%] among 480 participants, ranging from 4.0% to 25.5% across the different municipalities. The seroprevalence did not differ according to gender (p = 0.19) or age (p = 0.51). Among SARS-CoV-2 positive individuals, we found that 24.6% [11.5%-45.2%] reported symptoms consistent with COVID-19. Our findings revealed high levels of infection across the territory but a low number of resulting deaths, which can be explained by French Guiana's young population structure

Penile Calciphylaxis

International audienceThe proposed image reports the case of penile calciphylaxis. Calciphylaxis is a rare obliterative small vessel vasculopathy associated with diabetes mellitus, end-stage renal disease. Penile involvement is even rarer with only 50 cases reported, and agreement on appropriate diagnosis and management is unclear. This rarity exposes, as in our situation, to misdiagnosis, with possible iatrogeny (dermocorticoides in the case of balanitis). As the biopsy of the glans is not recommended, the clinical diagnosis is essential. Diffuse calcifications appearance on the reported ultrasound could support the diagnosis

Sur le front du droit

Cet ouvrage rassemble sept contributions d’un cycle de conférences organisé à l’occasion de la commémoration du centenaire de la Première Guerre mondiale par le Centre Toulousain d’Histoire du Droit et des Idées Politiques en collaboration avec le Collège supérieur de droit et l’École Européenne de droit de l’Université Toulouse Capitole. Trois temporalités sont présentées et analysées, elles intéressent les juristes en guerre et la guerre des juristes. Tout d’abord l’action, la réflexion et la pratique au quotidien de juristes plonges dans ce conflit sont mises à jour. La Grande Guerre a aussi été un temps particulier d’adaptation et d’application du droit pour répondre aux circonstances exceptionnelles. Enfin, la guerre prend place dans un mouvement long de renforcement du rôle de l’État

Difficulté scolaire : ce qu’en disent élèves, parents et professionnels de l’éducation

Malgré une volonté d’objectivité, l’évaluation des élèves en difficulté scolaire est, en partie, influencée par les représentations sociales de la difficulté scolaire que les évaluateurs possèdent. Cette étude vise à analyser ces représentations pour divers acteurs du système éducatif à savoir des élèves, des parents d’élèves, des enseignants et des psychologues scolaires. Les résultats indiquent que la difficulté scolaire se décline sous divers aspects  : problèmes liés à la famille, aux pairs, à l’école, caractéristiques personnelles (personnalité, troubles cognitifs, comportements), culture et aide à apporter. Par ailleurs, ces différentes catégories ne se retrouvent pas de manière équivalente en fonction des groupes même si les explications internes sont prédominantes dans les descriptions. Les implications de ces représentations contrastées sont discutées.In spite of a will of objectivity, the evaluation of the pupils’ learning difficulties is partly influenced by the evaluators’ social representations of learning difficulties. This study aims at analysing these representations for diverse actors of the education system, that is, pupils, parents, teachers, and educational psychologists. The results show that learning difficulty comes in a variety of forms: disorders related to the family, the peers, school, individual characteristics (personality, cognitive disorders, behaviors), culture, and help to provide. Moreover, these different categories are not found in an equivalent way according to the groups even though internal factors are predominant in the descriptions. The implications of these contrasted representations are discussed