Câncer hereditário associado aos genes TP53, BRCA1 e BRCA2 : análises genômicas, funcionais e clínicas

Aspectos genômicos, funcionais e clínicos de síndromes de predisposição hereditária ao câncer associadas aos genes TP53, BRCA1 e BRCA2 foram abordados nesta tese. No contexto do gene TP53, em que mutações germinativas causam Síndrome de Li-Fraumeni (SLF), nosso objetivo principal foi estudar as consequências funcionais e clínicas de algumas mutações encontradas em famílias brasileiras, especialmente a mutação fundadora R337H. Nossos resultados demostram que células normais (fibroblastos) de indivíduos portadores de mutações em TP53 caracterizam-se por alterações redox, com altos níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO) associados a um processo persistente de reparo de DNA, provavelmente devido a um aumento do dano oxidativo. Também foi observada alta atividade no reparo de sítios apurínicos e apirimidínicos (sítios abásicos), um tipo de dano de DNA causado, principalmente, por ERO. Devido a bem estabelecida relação entre estresse oxidativo e inflamação, 28 marcadores inflamatórios, incluindo citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento, foram dosados em plasma de indivíduos portadores da mutação R337H e controles. Um aumento significativo na dosagem de IL-12, bem como uma tendência de maiores níveis de IL-8, IL-17 e IFN-y foram encontrados no grupo R337H, sugerindo atividade inflamatória. A fim de verificar o impacto de substâncias antioxidantes sobre o fenótipo bioquímico de estresse oxidativo, indivíduos portadores da mutação R337H e controles foram suplementados com N-acetilcisteína, Idebenona e Coenzima Q10, e parâmetros oxidativos foram avaliados antes e após o período de suplementação (14 dias). Nossos resultados apontam para um efeito da Coenzima Q10 e Idebenona na correção bioquímica de estresse oxidativo, visto que a suplementação com ambas substâncias foi capaz de diminuir os níveis de lipoperoxidação lipídica. Além dos estudos funcionais e clínicos acerca da mutação R337H, análises moleculares relacionadas ao papel de genes modificadores de fenótipo e de uma nova variante associada a SLF foram realizadas. Observamos que 7/129 (5.4%) indivíduos com fenótipo clínico de SLF/LFL e negativos para mutações em regiões codificantes de TP53 são portadores de uma nova variante germinativa rara, rs78378222[C]. Achados adicionais relacionados a conservação evolutiva e impacto funcional desta 10 variante, tanto em fibroblastos quanto em tumores, confirmam sua patogenicidade e apontam para um mecanismo de haploinsuficiência de p53. Além disso, também foi observado a contribuição de um polimorfismo na região promotora do gene MDM2 (SNP309) na idade do primeiro diagnóstico de câncer em portadores da mutação R337H. Já em relação ao conjunto de resultados relacionados à BRCA1 e BRCA2 apresentados nesta tese, 39 tumores de mama de pacientes com mutações germinativas nos genes BRCA1 (n=29) e BRCA2 (n=10) foram sequenciados no intuito de identificar o perfil de variação no número de cópias de DNA e mutações somáticas. A partir do sequenciamento massivo e paralelo foi possível concluir que a grande maioria destes tumores apresenta perda do alelo selvagem de BRCA1 ou BRCA2, sendo que este parece ser um evento inicial na carcinogênese da maioria destas neoplasias. Além disso, mutações clonais em TP53 foram observadas em uma parcela significativa dos casos, sendo estas, provavelmente, anteriores a perda do alelo selvagem de BRCA1/2. A identificação de tumores que preservam o alelo selvagem de BRCA1 ou BRCA2, ou ainda que perdem este de maneira subclonal, levanta questões sobre o impacto de novas drogas que apresentam como alvo terapêutico os mecanismos de recombinação homóloga.In this work, we aimed to study genomic, functional and clinical aspects of cancer predisposition syndromes associated to germline mutations in the TP53, BRCA1 and BRCA2 genes. With regard to TP53, in which germline mutations are associated to Li-Fraumeni syndrome (LFS), we were mainly interested in understanding the clinical and biological consequences of TP53 germline mutations found in Brazilian families, with special attention to R337H mutation. Our results show that normal cells (fibroblasts) from LFS subjects have an hyperoxic phenotype characterized by high reactive oxygen species (ROS) levels, associated to a tendency for slower DNA repair and more persistent DNA damage. Interestingly, all mutant p53 fibroblasts showed higher repair activity of apurinic/pyrimidinic (AP) sites, a DNA lesion caused mainly by intensive ROS exposure. Given the well-described relationship between oxidative stress and inflammation, we then simultaneously quantified 25 cytokines, chemokines and growth factors in plasma of R337H mutation carriers and controls. We found significant higher levels of IL-12, as well as a tendency for increased IL-8, IL-17 and IFN-y, in mutation carriers when compared to controls, suggesting inflammatory activation. In order to verify the impact of antioxidants on oxidative stress, we supplemented R337H mutation carriers and controls with Nacetylcysteine, Idebenone and Coenzyme-Q10 and oxidative parameters were measured before and after supplementation period (14 days). Our findings highlight to a benefit of supplementation with Coenzyme Q10 and Idebenone, since that both were able to decrease lipid peroxidation in R337H mutation carriers group. In addition to functional e clinical studies presented here, we also aimed to study the impact of genetic modifiers on clinical manifestation of R337H carriers as well as the contribution of a new rare TP53 germline variant in LFS. In this context, we observed that 7 out of 129 (5.4%) subjects with clinical phenotype without TP53 germline mutations in the TP53 coding regions were carriers of a new functional variant, the rs78378222[C]. Further results related to the evolutionary conservation and functional impact of rs78378222[C] in both fibroblasts and in tumors confirm the pathogenicity of this variant and suggest a mechanism of haploinsufficiency. Finally, polymorphism analysis revealed an impact of the 12 MDM2 SNP309 on age at first tumor in R337H mutation carriers. Regarding BRCA1 and BRCA2, we sequenced 39 breast tumors from patients carrying BRCA1 (n=29) and BRCA2 (n=10) germline mutations in order to determine the repertoire of copy number alterations and somatic mutations of these tumors. By using ultra-deep sequencing of bulk-tumor and normal tissue, we observed that most of these tumors were characterized by somatic inactivation of BRCA1 and BRCA2 wild-type allele, which were likely to be an early genetic event in carcinogenesis. Moreover, TP53 somatic mutations were highly recurrent and all clonal, and we concluded that they likely precede BRCA1 or BRCA2 inactivation, as the latter was subclonal in some cases. The identification of tumors that preserved the BRCA1 or BRCA2 wild-type allele at all, or in which loss of the wildtype allele was restricted to subpopulations of cancers cells, raises concerns regarding response to drugs targeting homologous recombination deficiency in these tumors

Factors Influencing the Insertion and the Support in Collaborative Networks of Organizations / Fatores que Influenciam a Inserção e o Apoio em Redes Colaborativas de Organizações

Some organizations reach its objectives by establishing strategic partnerships, forming collaborative networks. Thus, this research presents in this work a study on two separate networks: network A and network B, located both in the Southern Brazil, in comparison with the results obtained by Becker et al (2009). The objective was to identify from participating companies, the influencing factors of maintenance and of insertion in collaborative networks. This is a study of multiple cases. As the surveyed elements were measured only once, it is understood that the research has cross-sectional study of feature, and identifies the qualitative and quantitative way. As result it was found that in both networks, as well as the results of Becker et al (2009), the question "corporate culture" is obstacle to the development of networks, more considerably. The similarities of the results obtained demonstrates the maturity of the network participants at different locations

Educação Ambiental entre gerações: A oralidade como instrumento construtor de opiniões / Environmental Education between generations: Orality as a tool that constructs opinions

A história oral revela novos campos de investigação perpassando por diferentes paradigmas sociais. Em seus preceitos, é possível desenvolver uma educação ambiental entre gerações que almeja não só a sensibilização frente à problemática ambiental, mas mudanças conscientes e críticas de atitudes em relação ao mundo. O artigo buscou compreender como os mais velhos enxergam a importância da natureza e da sustentabilidade, por meio da percepção de alunos da Universidade da Maturidade UMA/UFT ao longo de suas relações e lembranças. Ao relembrar o passado e comparar com atualidade, os velhos destacam as mudanças causadas pelo homem ao meio ambiente, ressaltando a importância do diálogo na construção do saber ambiental. Este diálogo aproxima gerações, amplia as relações sociais e a compreensão da realidade além dos limites postos pelo modelo educacional, frutos do modelo racional vigente.

The role of ESCO2, SALL4 and TBX5 genes in the susceptibility to thalidomide teratogenesis

Thalidomide is widely used for several diseases; however, it causes malformations in embryos exposed during pregnancy. The complete understanding of the mechanisms by which thalidomide afects the embryo development has not yet been obtained. The phenotypic similarity makes TE a phenocopy of syndromes caused by mutations in ESCO2, SALL4 and TBX5 genes. Recently, SALL4 and TBX5 were demonstrated to be thalidomide targets. To understand if these genes act in the TE development, we sequenced them in 27 individuals with TE; we verifed how thalidomide afect them in human pluripotent stem cells (hPSCs) through a diferential gene expression (DGE) analysis from GSE63935; and we evaluated how these genes are functionally related through an interaction network analysis. We identifed 8 variants in ESCO2, 15 in SALL4 and 15 in TBX5. We compared allelic frequencies with data from ExAC, 1000 Genomes and ABraOM databases; eight variants were signifcantly diferent (p<0.05). Eleven variants in SALL4 and TBX5 were previously associated with cardiac diseases or malformations; however, in TE sample there was no association. Variant efect prediction tools showed 97% of the variants with potential to infuence in these genes regulation. DGE analysis showed a signifcant reduction of ESCO2 in hPSCs after thalidomide exposure

UMA INTRODUÇÃO AOS GRUPOS SOLÚVEIS

A teoria dos Grupos ocupa uma parte importante da Álgebra abstrata, sendo sua origem advinda do estudo das equações algébricas. Neste processo, a resolução de equações por meio de radicais está relacionada ao conceito de solubilidade de certos grupos associados. Por outro lado, o conceito de solubilidade tem interesse próprio, constituindo-se uma medida da comutatividade de um grupo. Neste trabalho desenvolvemos o conceito introdutório de grupos solúveis e exploramos algumas propriedades associadas. O trabalho é um dos resultados de projetos de iniciação científica do Programa de Educação Tutorial (PET), vinculado ao curso de Matemática da UFMS. Campus de Três Lagoas. Nos projetos de iniciação científica, os alunos do PET, exploram tópicos avançados da Matemática que objetivam a iniciação à pesquisa, como também o desenvolvimento do tema como contribuição à formação dos demais alunos da graduação na área

Increased oxidative damage in carriers of the germline TP53 p.R337H mutation

Germline mutations in TP53 are the underlying defect of Li-Fraumeni Syndrome (LFS) and Li-Fraumeni-like (LFL) Syndrome, autosomal dominant disorders characterized by predisposition to multiple early onset cancers. In Brazil, a variant form of LFS/LFL is commonly detected because of the high prevalence of a founder mutation at codon 337 in TP53 (p.R337H). The p53 protein exerts multiple roles in the regulation of oxidative metabolism and cellular anti-oxidant defense systems. Herein, we analyzed the redox parameters in blood samples from p.R337H mutation carriers (C, n = 17) and non-carriers (NC, n = 17). We identified a significant increase in erythrocyte GPx activity and in plasma carbonyl content,an indicator of protein oxidative damage, in mutation carriers compared to non-carriers (P = 0.048 and P = 0.035, respectively). Mutation carriers also showed a four-fold increase in plasma malondialdehyde levels, indicating increased lipid peroxidation (NC = 40.2060.71, C = 160.560.88, P,0.0001). Finally, carriers showed increased total antioxidant status but a decrease in plasma ascorbic acid content. The observed imbalance could be associated with deregulated cell bioenergetics and/or with increased inflammatory stress, two effects that may result from loss of wild-type p53 function. These findings provide the first evidence that oxidative damage occurs in carriers of a germline TP53 mutation, and these may have important implications regarding our understanding of the mechanisms responsible for germline TP53 p.R337H mutation-associated carcinogenesis