Eletroestimulação na cicatrização de feridas cutâneas experimentais em coelhos

Feridas cutâneas crônicas e complicadas são frequentemente encontradas na rotina da medicina veterinária e, muitas vezes, transformam os tratamentos em verdadeiro desafio. A eletroterapia tem sido indicada como alternativa aos tratamentos convencionais, devido à sua capacidade de promover cicatrização. O objetivo deste trabalho é relatar um ensaio experimental utilizando a eletroestimulação (ES) na cicatrização de feridas cutâneas em coelhos. Para tanto, foram utilizados 10 coelhos Nova Zelândia, machos, hígidos, submetidos à anestesia geral para a indução experimental de duas feridas cutâneas de 1cm² localizadas no dorso, caudal à borda das escápulas. As lesões foram higienizadas com solução salina 0,9%, sendo a do lado direito tratada por ES e a do lado esquerdo, como controle. Para ES utilizou-se a frequência de 60Hz, por 10 minutos a cada dois dias, sendo aplicadas quatro agulhas de acupuntura em pontos equidistantes ao redor da lesão, a 0,5cm da borda. Os animais foram divididos em dois grupos, de oito e de 15 dias, conforme o período de tratamento e avaliação macroscópica e histopatológica. Não houve diferença significativa no tempo de cicatrização das lesões tratadas com ES. Porém, apresentaram qualidade tecidual, tanto na avaliação macro quanto microscópica, superior às do grupo controle. Com isso, é possível indicar a ES como tratamento de feridas cutâneas, por ser uma técnica eficiente, de fácil aplicação e de relativo baixo custo

Utilização de plasma rico em plaquetas para estimulação da angiogênese em flape de padrão axial toracodorsal em coelhos (Oryctolagus cuniculus)

Resumo: Feridas de grandes extensões, com perda da viabilidade tecidual e retardo na cicatrização por segunda intenção são casos que se faz necessário o emprego de técnicas cirúrgicas reconstrutivas. O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto com maior concentração plaquetária, adjuvante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando nos processos de hemostasia e estimulação da angiogênese. Dessa forma, delineou-se um estudo a fim de avaliar a eficácia do uso do gel produzido a partir do plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes de avanço de padrão axial toracodorsal em coelhos, para avaliar a possibilidade de favorecer a integração do retalho no leito receptor. Utilizaram-se 30 coelhos da raça Nova Zelândia branco, separados em dois grupos de 15 animais, compreendendo os grupos plasma rico em plaquetas (GPRP), na qual empregou-se o gel antes da síntese da ferida cirúrgica, e controle (GC), na qual utilizou-se apenas solução fisiológica. Para obtenção do PRP, coletou-se sangue dos animais, e determinou-se a contagem plaquetária antes da preparação do gel. No início e término do experimento os animais foram pesados para posterior análise de ganho peso médio. Após o procedimento cirúrgico iniciou-se as avaliações macroscópicas no 3º, 7º e 14º dia, e avaliou-se presença ou ausência de exsudato, integridade da pele, edema, rubor e necrose. Após esta etapa, coletou-se o material da ferida cirúrgica para confecção das lâminas histológicas e posterior avaliação microscópica. Avaliou-se a proliferação vascular, presença de células mononucleares e polimorfonucleares, proliferação fibroblástica, colagenização, reepitelização e hemorragia. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (Teste t Student, t emparalhado, e Kruskall Walis, sendo p<0,05). O ganho de peso médio não foi significativo entre os grupos; a concentração plaquetária da amostra final do PRP foi significativamente maior quando comparada com a inicial; exsudato e necrose foram significativamente maior no grupo controle quando comparado ao grupo PRP; proliferação vascular e reepitelização foram significativamente maior no grupo PRP, enquanto que a presença de mononucleares, polimorfonucleares, proliferação de fibroblastos, colagenização e hemorragia não foram significativas entre os grupos. Obteve-se no terceiro dia, diferença significativamente maior quanto à variável exsudato no grupo controle quando comparado ao grupo PRP, no sétimo dia exsudato e rubor foram significativamente maior no grupo controle, e ao décimo quarto dia exsudato e integridade da pele foram significativamente maior no grupo controle. Os resultados obtidos neste estudo evidenciaram que a utilização do plasma rico em plaquetas na forma de gel em cirurgia reconstrutiva foi capaz de estimular a angiogênese na ferida favorecendo o processo de cicatrização

Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%). The same technique of reconstructive surgery using graft mesh was performed on each rabbit. The groups differed only in the application of platelet-rich plasma before the surgical wound synthesis. Samples for evaluation of angiogenesis were collected 15 days after the surgical procedure. The dyes Hematoxylin & Eosin and Masson's Trichrome were used in the histochemical study to evaluate vascular proliferation. Markers CD31, CD34 and Caveolin-1 was used for the immunohistochemical study. The evaluation between the groups (Gprp and Gc) in regard to the categorical variable (vascular proliferation intensity) used the Kruskal-Wallis test with p values equal to or less than 0.05 being considered significant. The immunohistochemistry was subjected to analysis of variance for a completely randomized design, with two groups and five repetitions (medium) and 5% significance level. Multiple comparison of groups resulted in the Tukey test (p=0.05) used. The amount of vascular proliferation assessed by histochemical method HE and Masson's Trichrome was found to be a significant variable in Gprp when compared with group Gc. When evaluating the methods used, there was no significant difference. There was no difference in the three markers which were used for correlating microvessels; however, there was more intense staining of vessels when Caveolin-1 Antibody was used. This caused intense marking of the capillaries and small vessels, as well as of larger vessels. When using CD31 and CD34, the same was observed, but it was not as intense as with Caveolin-1; though some cases showed sincere and discreet marking. The results of this study demonstrated that the histochemical methods performed are effective for semi-quantitative assessment of angiogenesis. The immunohistochemical comparison of Caveolin-1, CD31, and CD34 as markers of angiogenesis in rabbits showed that both antibodies could immunostain the newly formed vessels; but the Caveolin-1 showed better immunostaining in small and medium-sized vessels, as well as a minor presence in the background. Although not specific markers for angiogenesis, they can be used as immunohistochemical markers of vascular endothelium in rabbits

Efeito cicatrizante e atividade antibacteriana da Calendula officinalis L. cultivada no Brasil Healing effect and antibacterial activity of Calendula officinalis L. cultivated in Brazil

Desde a antiguidade propriedades medicinais são atribuídas às flores da Calendula officinalis L. (Asteraceae) destacando-se a atividade cicatrizante. Estudos sobre a atividade geral de plantas medicinais na cicatrização vêm sendo realizados, sem especificar sobre qual das fases da cicatrização a planta atua. Neste trabalho a atividade cicatrizante e antiinflamatória do extrato etanólico das flores da C. officinalis cultivada no Brasil foi avaliada em feridas cutâneas de ratos Wistar, por meio de avaliação macroscópica e histológica. A atividade antimicrobiana do extrato e das frações hexânica e diclorometano também foi avaliada. A atividade antiinflamatória do extrato etanólico da calêndula foi atribuída à diminuição da exsudação serosa, da hiperemia, da deposição de fibrina e da hiperplasia epidermal, além de resultar em crostas mais delgadas e umedecidas. Observaram-se também aumento de colágeno no tecido de granulação e efeito antibacteriano. Assim, o extrato etanólico da calêndula atuou de forma positiva sobre a atividade cicatricial em feridas cutâneas de ratos, bem como apresentou atividade antibacteriana in vitro.<br>Since ancient history medicinal properties are attributed to flowers of Calendula officinalis L. (Asteraceae), mainly concerning its healing activity. Studies about the general activity of medicinal plants in healing wounds have been conducted without specifying in which healing phase the plant acts. In this work, the anti-inflammatory and healing activity of the ethanolic extract of C. officinalis flowers cultured in Brazil was evaluated in cutaneous wounds of Wistar rats through macroscopic and histological evaluation. The antibacterial activity of the extract and dichloromethane and hexane fractions was also evaluated. The anti-inflammatory activity of calendula ethanolic extract led to a reduction in plasmatic exudation, hyperemia, fibrin deposition and epidermal hyperplasia, besides resulting in less edematous crusts. There was also an increase in collagen in the granulation tissue and an antibacterial effect. Therefore, calendula ethanolic extract positively acted on the healing process of cutaneous wounds of rats and presented in vitro antibacterial activity

Tissue injuries of wistar rats treated with hydroalcoholic extract of Sonchus oleraceus L.

The use of plant species is emerging as an important alternative in the treatment of injuries. Therefore, the extract of Sonchus oleraceus 10% was employed in the repair of skin lesions. A total of 36 male Wistar rats were subjected to a punch injury and divided into three groups: a negative control, receiving no treatment, a positive control, treated with Dersani, and the experimental group treated with the extract. The injury was assessed macroscopically and microscopically. Morphometric data was collected at the 3rd, 5th and 7th postoperative day, and the experimental group showed greater changes in shrinkage of the lesion compared to control groups. On the 3rd postoperative day, the injury in the experimental group showed less necrotic tissue, lower slough and more granulation tissue in relation to the positive control group. On the 7th and 10th postoperative day, the injury in the experimental group showed lower slough compared to the positive control group. Microscopic analysis of lesions on the 5th postoperative day revealed increased fibroplasia in the experimental group compared to control groups, while on the 14th postoperative day less neovascularization was evident in the experimental group and increased formation of hair follicles in the negative control group. The extract of S. oleraceus provided tissue repair in accordance with normal physiological patterns thus confirming empirical evidence for its use.<br>O emprego de espécies vegetais vem surgindo como alternativa no tratamento de lesões. Dessa forma, foi utilizado o extrato hidroalcoólico de Sonchus oleraceus a 10% na reparação de lesões cutâneas. Trinta e seis ratos machos Wistar, foram submetidos a uma lesão com "punch" e distribuídos em três grupos: controle negativo, não recebeu tratamento; controle positivo, tratado com Dersani; e o experimental, tratado com extrato. A lesão foi avaliada macroscopicamente e microscopicamente. Os dados morfométricos mostraram que no 3º, 5º e 7º dia pós-operação (DPO), o grupo experimental apresentou maior evolução na retração da lesão em relação aos grupos controles. No 3° DPO a lesão do grupo experimental apresentou menor tecido necrótico, menor esfacelo e maior tecido de granulação em relação ao grupo controle positivo. No 7° e 10º DPO, a lesão do grupo experimental apresentou menor esfacelo em relação ao grupo controle positivo. A análise microscópica das lesões revelou no 5º DPO maior fibroplasia no grupo experimental em relação aos grupos controles; no 14º DPO ocorreu menor neovascularização no grupo experimental e maior formação de folículos pilosos no grupo controle negativo. O extrato hidroalcoólico de S. oleraceus propiciou reparo tecidual obedecendo a padrões fisiológicos normais e confirmando os dados empíricos de sua utilização

The effect of natural and organophilic palygorskite on skin wound healing in rats

In view of growing interest in natural treatments, clays would appear to be a good alternative for speeding up the healing process during the treatment of wounds. Of the various clays, palygorskite, a clay from the Brazilian State of Piauí, composed of silicon and aluminum, has shown itself to be pharmaceutically useful as a healing agent. The aim of this article is to evaluate the effect on the healing of wounds of Piauí palygorskite, both in its natural state and when organophilic, by way of comparative analysis of macroscopic and histological tests on skin wounds in adult male and female two-month-old Wistar rats. To this end, a circular trichotomy of the dorsal cornus of the rats was carried out to confirm the effects of treatments involving 0.9% saline solution, collagenase, natural palygorskite, organophilic palygorskite with cetyltrimethylammonium chloride, and organophilic palygorskite with alkyldimethylbenzylammonium chloride. The testing of all the clays involved microbiological evaluation using the depth of plaque and surface striation methods, along with post-treatment macroscopic analysis of skin wounds by way of organoleptics, pachymetry and histological analysis. Microbiological evaluation revealed the need for sterilization of the clay prior to incorporation in the pharmaceutical form. Macroscopic analysis suggests that healing of the wounded area occurred, and histological analysis showed the beneficial effect of the topical use of clay material. Our data suggest that palygorskite may be more powerful than other healing agents, although, on completing treatment, all the animals studied showed the same degree of tissue repair