Capsule-Targeting Depolymerase, Derived from Klebsiella KP36 Phage, as a Tool for the Development of Anti-Virulent Strategy

The rise of antibiotic-resistant Klebsiella pneumoniae, a leading nosocomial pathogen, prompts the need for alternative therapies. We have identified and characterized a novel depolymerase enzyme encoded by Klebsiella phage KP36 (depoKP36), from the Siphoviridae family. To gain insights into the catalytic and structural features of depoKP36, we have recombinantly produced this protein of 93.4 kDa and showed that it is able to hydrolyze a crude exopolysaccharide of a K. pneumoniae host. Using in vitro and in vivo assays, we found that depoKP36 was also effective against a native capsule of clinical K. pneumoniae strains, representing the K63 type, and significantly inhibited Klebsiella-induced mortality of Galleria mellonella larvae in a time-dependent manner. DepoKP36 did not affect the antibiotic susceptibility of Klebsiella strains. The activity of this enzyme was retained in a broad range of pH values (4.0–7.0) and temperatures (up to 45 °C). Consistently, the circular dichroism (CD) spectroscopy revealed a highly stability with melting transition temperature (Tm) = 65 °C. In contrast to other phage tailspike proteins, this enzyme was susceptible to sodium dodecyl sulfate (SDS) denaturation and proteolytic cleavage. The structural studies in solution showed a trimeric arrangement with a high β-sheet content. Our findings identify depoKP36 as a suitable candidate for the development of new treatments for K. pneumoniae infections

Klebsiella phages representing a novel clade of viruses with an unknown DNA modification and biotechnologically interesting enzymes

Lytic bacteriophages and phage-encoded endolysins (peptidoglycan hydrolases) provide a source for the development of novel antimicrobial strategies. In the present study, we focus on the closely related (96 % DNA sequence identity) environmental myoviruses vB_KpnM_KP15 (KP15) and vB_KpnM_KP27 (KP27) infecting multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca strains. Their genome organisation and evolutionary relationship are compared to Enterobacter phage phiEap-3 and Klebsiella phages Matisse and Miro. Due to the shared and distinct evolutionary history of these phages, we propose to create a new phage genus BKp15virus^ within the Tevenvirinae subfamily. In silico genome analysis reveals two unique putative homing endonucleases of KP27 phage, probably involved in unrevealed mechanism of DNA modification and resistance to restriction digestion, resulting in a broader host spectrum. Additionally, we identified in KP15 and KP27 a complete set of lysis genes, containing holin, antiholin, spanin and endolysin. By turbidimetric assays on permeabilized Gram-negative strains, we verified the ability of the KP27 endolysin to destroy the bacterial peptidoglycan. We confirmed high stability, absence of toxicity on a human epithelial cell line and the enzymatic specificity of endolysin, which was found to possess endopeptidase activity, cleaving the peptide stem between L-alanine and D-glutamic acid

3-Bromopyruvate as a potent anticancer therapy in honor and memory of the late Professor Andre Goffeau

3-Bromopyruvate (3BP) is a small, highly reactive molecule formed by bromination of pyruvate. In the year 2000, the antitumor properties of 3BP were discovered. Studies using animal models proved its high efficacy for anticancer therapy with no apparent side effects. This was also found to be the case in a limited number of cancer patients treated with 3BP. Due to the "Warburg effect," most tumor cells exhibit metabolic changes, for example, increased glucose consumption and lactic acid production resulting from mitochondrial-bound overexpressed hexokinase 2. Such alterations promote cell migration, immortality via inhibition of apoptosis, and less dependence on the availability of oxygen. Significantly, these attributes also make cancer cells more sensitive to agents, such as 3BP that inhibits energy production pathways without harming normal cells. This selectivity of 3BP is mainly due to overexpressed monocarboxylate transporters in cancer cells. Furthermore, 3BP is not a substrate for any pumps belonging to the ATP-binding cassette superfamily, which confers resistance to a variety of drugs. Also, 3BP has the capacity to induce multiple forms of cell death, by, for example, ATP depletion resulting from inactivation of both glycolytic and mitochondrial energy production pathways. In addition to its anticancer property, 3BP also exhibits antimicrobial activity. Various species of microorganisms are characterized by different susceptibility to 3BP inhibition. Among tested strains, the most sensitive was found to be the pathogenic yeast-like fungus Cryptococcus neoformans. Significantly, studies carried out in our laboratories have shown that 3BP exhibits a remarkable capacity to eradicate cancer cells, fungi, and algae.This study was supported by the Polish National Science Center (NCN), Preludium Grant UMO‐2015/19/N/NZ7/00956 (awarded to Katarzyna Niedźwiecka) and the Ministry of Science and Higher Edu cation (Poland) within of “Statutory Research 2018/S/IGM.” Coauthors P. L. P. and Y. H. K. express their gratitude to Mr. Paul Edelman, The Oncology Foundation, Single Cause and Single Cure Foundation, Compassion Center, Dr. Ed Miller, and The G. Yu Foundation for their continued interest and support for our cancer research

The anticancer agent 3-bromopyruvate: a simple but powerful molecule taken from the lab to the bedside

At the beginning of the twenty-first century, 3-bromopyruvate (3BP), a simple alkylating chemical compound was presented to the scientific community as a potent anticancer agent, able to cause rapid toxicity to cancer cells without bystander effects on normal tissues. The altered metabolism of cancers, an essential hallmark for their progression, also became their Achilles heel by facilitating 3BP's selective entry and specific targeting. Treatment with 3BP has been administered in several cancer type models both in vitro and in vivo, either alone or in combination with other anticancer therapeutic approaches. These studies clearly demonstrate 3BP's broad action against multiple cancer types. Clinical trials using 3BP are needed to further support its anticancer efficacy against multiple cancer types thus making it available to more than 30 million patients living with cancer worldwide. This review discusses current knowledge about 3BP related to cancer and discusses also the possibility of its use in future clinical applications as it relates to safety and treatment issues.This work was supported by the strategic programme UID/BIA/04050/2013 (POCI-01-0145-FEDER-007569)funded by national funds through the FCT I.P. and by the ERDF through the COMPETE2020 - Programa Operacional Competitividade e Internacionalização (POCI). João Azevedo-Silva received a fellowship from the Portuguese government from the FCT through FSE (Fundo Social Europeu) and POPH (Programa Operacional Potencial Humano) [grant number SFRH/BD/76038/2011]. Co-author Peter L.Pedersen was supported by NIH grant NCICAl0951 for many years for cancer research that led to a number of the findings described in this review.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Avskaffandet av revisionsplikten : En studie om faktorer som påverkar valet att behålla respektive avstå från revision

Revisionsplikten i Sverige avskaffades den 1 november 2010. Ungefär 70 % av alla aktiebolag uppfyller kriterierna för frivillig revision. Dessa företag har nu ställts inför valet att avstå eller behålla revision. Denna kvantitativa uppsats undersöker vilka faktorer som påverkar aktiebolags val att behålla respektive avstå från revision.  Undersökningen är begränsad till Västerbotten och består av material från årsredovisningar och telefonenkäter. Populationen i denna studie består av småföretag. Småföretag är komplexa och det är många faktorer som påverkar hur tillväxten ser ut i ett litet företag. (Wiklund, 1998). Det varierar även om småföretag vill växa eller om de vill förbli små (Lindmark & Johannisson, 1996, s. 83). Tidigare studier om efterfrågan på revision har främst fokuserat på större företag, men det finns två undersökningar från Storbritannien som behandlar de allra minsta (Seow, 2001; Tauringana & Clarke, 2000). I tidigare studier inom ämnesområdet har vanliga undersökningsvariabler varit olika typer av agentförhållanden och faktorer som relaterar till egenskaper hos företagsledningen. Denna studie väljer ut variabler från tidigare forskning och testar om dessa även påverkar svenska mikroföretag. Dessutom testas företagsledningens risktolerans, en variabel som inte har prövats i tidigare studier. Eftersom företagen först nu får välja om de vill behålla eller avstå från revision har det inte tidigare gjorts någon studie om vad som påverkar valet i Sverige när beslutet är taget. Denna undersökning har bearbetat material från cirka 8500 aktiebolag, och av dessa har 200 företag slumpats ut för att bli intervjuade via telefon. Företagens årsredovisningar hämtades från databasen Affärsdata och sammanställdes sedan i Excel. Telefonenkäten består av 13 frågor med förutbestämda svarsalternativ och varje företag ringdes upp vid tre olika tillfällen när de inte svarade. Många av de undersökta företagen är mycket små, vilket innebär att för vissa är företaget endast en sidoverksamhet. Det vanligaste bland de undersökta aktiebolagen är att antalet ägare är en eller två stycken och att alla ägarna arbetar i företaget. De flesta av företagen, oavsett om de behållit eller avstått från revision, har haft en bra relation med sin revisor, och förtroendet för revisionsbolaget är ännu högre. En annan typisk egenskap för de undersökta företagen, oavsett om de har kvar revision eller inte, är att majoriteten av företagen tycker att revisionens kostnad är högre än nyttan. De hypoteser som har testats är företagets storlek, ägares agentförhållande, relationen till revisorn, köp av andra tjänster, agentförhållande till långivare, intresset för externfinansiering, uppfattningen om revisionens kostnad samt risktoleransen hos företagsledningen. Dessa åtta hypoteser har prövats statistiskt genom t-tester respektive chi två tester. Den variabel som visade sig vara signifikant är storlek, vilket har testats som antalet anställda och omsättning.  Agentrelationer till långivare har ett visst empiriskt stöd. Det har även identifierats ett svagt empiriskt stöd för att behov av externfinansiering ökar efterfrågan på revision. Dessutom finns det ett svagt empiriskt stöd för att högre risktolerans ökar efterfrågan på revision, vilket är tvärtom mot vad den formulerade hypotesen uttrycker