Estudio de sistemas nanométricos basados en lecitina como vehículos de oligonucleótidos en el tratamiento del cáncer de mama

The aim of the present Thesis was to study lecithin-based nanocarriers to be used as oligonucleotides delivery systems for breast cancer treatment. \nTwo kinds of carriers were developed, Phosphatidylcholine-based Nanoparticles (NPCs) and Mixed Nanoparticles (NMs). Their physicochemical properties were characterized in terms of particle size distribution, zeta potential, and morphology. Both formulations exhibited siRNA loading capacity. The NPCs showed no signs of cytotoxicity in a broad range of concentrations, and proved to be capable of mediating fluorescent siRNA delivery in MCF-7 human breast cancer cells, but no silencing effect was observed. NMs were also capable of mediating siRNA internalization and even showed efficient gene silencing in certain conditions. However, these formulations showed dose-dependent cytotoxicity related to composition and dose formulation.\nThe biological effects of these delivery systems were also studied. Cellular proliferation and signaling pathways activation were found to be dependent on both nanoparticles composition and physicochemical properties. This novel characterization of the nanocarriers biological activity, proved to be relevant even if their components are considered biocompatible.Fil: Gándola, Yamila Belén. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaEl objetivo general de esta Tesis fue estudiar el comportamiento de sistemas nanométricos basados en lecitina, para ser utilizados como vectores de oligonucleótidos en el tratamiento del cáncer de mama. Los sistemas propuestos fueron Nanopartículas de Fosfatidilcolina (NPCs) y Nanopartículas Mixtas de fosfatidilcolina y colato de sodio (NMs). Se estudiaron sus características fisicoquímicas, y se demostró su capacidad de carga de siRNA. Las NPCs no resultaron citotóxicas, y lograron promover la internalización celular de oligonucleótidos, pero no mediaron el silenciamiento post-transcripcional de un gen blanco (PTGS) eficientemente. Las NMs también fueron capaces de vehiculizar oligonucleótidos al interior celular e incluso evidenciaron mediar PTGS, pero presentaron citotoxicidad dependiente de su concentración. Los resultados mostraron características promisorias, por lo que estos sistemas podrían optimizarse y proponerse como base tecnológica para su uso en terapia génica. \nPor otro lado, se estudiaron los efectos biológicos de los sistemas nanopartículados. Se evidenciaron distintos efectos sobre la activación de vías de señalización intracelular y viabilidad celular dependiendo de la composición y características fisicoquímicas de la nanopartículas. Esta novedosa caracterización en cuanto a su actividad biológica, demostró la importancia de evaluar sus acciones sobre sistemas vivos, aún cuando el material de origen sea considerado inerte y/o biocompatible

Development, characterization, and in vitro evaluation of phosphatidylcholine–sodium cholate-based nanoparticles for siRNA delivery to MCF-7 human breast cancer cells

Phosphatidylcholine–sodium cholate (SC)-based nanoparticles were designed, characterized, and evaluated as plausible oligonucleotides delivery systems. For this purpose, formulation of the systems was optimized to obtain low cytotoxic vehicles with high siRNA-loading capacity and acceptable transfection ability. Mixtures of soybean phosphatidylcholine (SPC) and SC were prepared at different molar ratios with 2 % w/v total concentration; distilled water and two different buffers were used as dispersion medium. Nanoparticles below 150 nm were observed showing spherical shape which turned smaller in diameter as the SC molar proportion increased, accounting for small unilamellar vesicles when low proportions of SC were present in the formulation, but clear mixed micellar solutions at higher SC percentages. Macroscopic characteristics along with physico-chemical parameters values supported the presence of these types of structures. SYBR green displacement assays demonstrated an important oligonucleotide binding that increased as bile salt relative content got higher. Within the same molar ratio, nanoparticles showed the following binding efficiency order: pH 7.4 > pH 5.0 > distilled water. siRNA-loading capacity assays confirmed the higher siRNA binding by the mixed micelles containing higher SC proportion; moreover, the complexes formed were smaller as the SC:SPC ratio increased. Considering cytotoxicity and siRNA-loading capacity, 1:2 and 1:4 SPC:SC formulations were selected for further biological assays. Nanoparticles prepared in any of the three media were able to induce dsRNA uptake and efficiently transfect RNA for gene silencing, for the compositions prepared in buffer pH 5.0 being the most versatile.Fil: Pérez, Sebastián Ezequiel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Tecnología Farmacéutica; ArgentinaFil: Gándola, Yamila Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Carlucci, Adriana Mónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Tecnología Farmacéutica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gonzalez, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Mitogenic effects of phosphatidylcholine nanoparticles on MCF-7 breast cancer cells

Lecithins, mainly composed of the phospholipids phosphatidylcholines (PC), have many different uses in the pharmaceutical and clinical field. PC are involved in structural and biological functions as membrane trafficking processes and cellular signaling. Considering the increasing applications of lecithin-based nanosystems for the delivery of therapeutic agents, the aim of the present work was to determine the effects of phosphatidylcholine nanoparticles over breast cancer cellular proliferation and signaling. PC dispersions at 0.01 and 0.1% (w/v) prepared in buffer pH 7.0 and 5.0 were studied in the MCF-7 breast cancer cell line. Neutral 0.1% PC-derived nanoparticles induced the activation of the MEK-ERK1/2 pathway, increased cell viability and induced a 1.2 fold raise in proliferation. These biological effects correlated with the increase of epidermal growth factor receptor (EGFR) content and its altered cellular localization. Results suggest that nanoparticles derived from PC dispersion prepared in buffer pH 7.0 may induce physicochemical changes in the plasma membrane of cancer cells which may affect EGFR cellular localization and/or activity, increasing activation of the MEK-ERK1/2 pathway and inducing proliferation. Results from the present study suggest that possible biological effects of delivery systems based on lecithin nanoparticles should be taken into account in pharmaceutical formulation design.Fil: Gándola, Yamila Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Pérez, Sebastián E.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Tecnología Farmacéutica; ArgentinaFil: Irene, Pablo Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sotelo, Ana Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Miquet, Johanna Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Corradi, Gerardo Raul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Concentration-dependent effects of sodium cholate and deoxycholate bile salts on breast cancer cells proliferation and survival

Bile acids (BAs) are bioactive molecules that have potential therapeutic interest and their derived salts are used in several pharmaceutical systems. BAs have been associated with tumorigenesis of several tissues including the mammary tissue. Therefore, it is crucial to characterize their effects on cancer cells. The objective of this work was to analyse the molecular and cellular effects of the bile salts sodium cholate and sodium deoxycholate on epithelial breast cancer cell lines. Bile salts (BSs) effects over breast cancer cells viability and proliferation were assessed by MTS and BrdU assays, respectively. Activation of cell signaling mediators was determined by immunobloting. Microscopy was used to analyze cell migration, and cellular and nuclear morphology. Interference of membrane fluidity was studied by generalized polarization and fluorescence anisotropy. BSs preparations were characterized by transmission electron microscopy and dynamic light scattering. Sodium cholate and sodium deoxycholate had dual effects on cell viability, increasing it at the lower concentrations assessed and decreasing it at the highest ones. The increase of cell viability was associated with the promotion of AKT phosphorylation and cyclin D1 expression. High concentrations of bile salts induced apoptosis as well as sustained activation of p38 and AKT. In addition, they affected cell membrane fluidity but not significant effects on cell migration were observed. In conclusion, bile salts have concentration-dependent effects on breast cancer cells, promoting cell proliferation at physiological levels and being cytotoxic at supraphysiological ones. Their effects were associated with the activation of kinases involved in cell signalling.Fil: Gándola, Yamila Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Fontana, Camila. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Bojorge, Mariana Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Luschnat, Tania T.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Moretton, Marcela Analía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Tecnología Farmacéutica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Chiapetta, Diego A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Tecnología Farmacéutica; ArgentinaFil: Verstraeten, Sandra Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Gonzalez, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Covalent coupling of Spike’s receptor binding domain to a multimeric carrier produces a high immune response against SARS-CoV-2

The receptor binding domain (RBD) of the Spike protein from SARS-CoV-2 is a promising candidate to develop effective COVID-19 vaccines since it can induce potent neutralizing antibodies. We have previously reported the highly efficient production of RBD in Pichia pastoris, which is structurally similar to the same protein produced in mammalian HEK-293T cells. In this work we designed an RBD multimer with the purpose of increasing its immunogenicity. We produced multimeric particles by a transpeptidation reaction between RBD expressed in P. pastoris and Lumazine Synthase from Brucella abortus (BLS), which is a highly immunogenic and very stable decameric 170 kDa protein. Such particles were used to vaccinate mice with two doses 30 days apart. When the particles ratio of RBD to BLS units was high (6–7 RBD molecules per BLS decamer in average), the humoral immune response was significantly higher than that elicited by RBD alone or by RBD-BLS particles with a lower RBD to BLS ratio (1–2 RBD molecules per BLS decamer). Remarkably, multimeric particles with a high number of RBD copies elicited a high titer of neutralizing IgGs. These results indicate that multimeric particles composed of RBD covalent coupled to BLS possess an advantageous architecture for antigen presentation to the immune system, and therefore enhancing RBD immunogenicity. Thus, multimeric RBD-BLS particles are promising candidates for a protein-based vaccine.Fil: Berguer, Paula Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Blaustein, Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Bredeston, Luis María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Craig, Patricio Oliver. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: D'alessio, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Elias, Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein"; ArgentinaFil: Farré, Paola C.. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigaciones del Medio Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigaciones del Medio Ambiente; ArgentinaFil: Fernández, Natalia Brenda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gentili, Hernan Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gándola, Yamila Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; ArgentinaFil: Gasulla, Javier. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigaciones del Medio Ambiente - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigaciones del Medio Ambiente; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; ArgentinaFil: Gudesblat, Gustavo Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; ArgentinaFil: Herrera, Maria Georgina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ibañez, Lorena Itatí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Física; ArgentinaFil: Idrovo Hidalgo, Tommy. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Nadra, Alejandro Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; ArgentinaFil: Noseda, Diego Gabriel. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Pavan, Carlos Humberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Pavan, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química, Física de los Materiales, Medioambiente y Energía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química, Física de los Materiales, Medioambiente y Energía; ArgentinaFil: Pignataro, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Roman, Ernesto Andres. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Ruberto, Lucas Adolfo Mauro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Ministerio de Relaciones Exteriores, Comercio Interno y Culto. Dirección Nacional del Antártico. Instituto Antártico Argentino; ArgentinaFil: Rubinstein, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; ArgentinaFil: Sanchez Sanchez, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo; ArgentinaFil: Santos, Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Wetzler, Diana Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Zelada, Alicia Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentin

Macrophage apoptosis using alendronate in targeted nanoarchaeosomes

Nanoarchaeosomes are non-hydrolysable nanovesicles made of archaeolipids, naturally functionalised with ligand for scavenger receptor class 1. We hypothesized that nitrogenate bisphosphonate alendronate (ALN) loaded nanoarchaeosomes (nanoarchaeosomes(ALN)) may constitute more efficient macrophage targeted apoptotic inducers than ALN loaded nanoliposomes (nanoliposomes (ALN)). To that aim, ALN was loaded in cholesterol containing (nanoARC-chol(ALN)) or not (nanoARC(ALN)) nanoarchaeosomes. Nanoarchaeosomes(ALN) (220–320 nm sized, ~ −40 mV ξ potential, 38–50 μg ALN/mg lipid ratio) displayed higher structural stability than nanoliposomes(ALN) of matching size and ξ potential, retaining most of ALN against a 1/200 folds dilution. The cytotoxicity of nanoARC(ALN) on J774A.1 cells, resulted > 30 folds higher than free ALN and nanoliposomes(ALN) and was reduced by cholesterol in nanoARC-chol(ALN). Devoid of ALN, nanoARC-chol was non-cytotoxic, exhibited pronounced anti-inflammatory activity on J774.1 cells, strongly reducing reactive oxygen species (ROS) and IL-6 induced by LPS. Nanoarchaeosomes bilayer extensively interacted with serum proteins but resulted refractory to phospholipases. Upon J774A.1 cells uptake, nanoarchaeosomes induced cytoplasmic acid vesicles, reduced the mitochondrial membrane potential by 20–40 % without consuming ATP neither damaging lysosomes and increasing pERK. Refractory to chemoenzymatic attacks, either void or drug loaded, nanoarchaeosomes induced either anti-inflammation or macrophages apoptosis, constituting promising targeted nanovesicles for multiple therapeutic purposes.Fil: Jerez, Horacio Emanuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Diseño de Estrategias de Targeting de Drogas; ArgentinaFil: Altube, María Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Diseño de Estrategias de Targeting de Drogas; ArgentinaFil: Gándola, Yamila Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Gonzalez, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Gonzalez, Marina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Morilla, María José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Diseño de Estrategias de Targeting de Drogas; ArgentinaFil: Romero, Eder Lilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Diseño de Estrategias de Targeting de Drogas; Argentin

Validation of commercial Mas receptor antibodies for utilization in Western Blotting, immunofluorescence and immunohistochemistry studies.

Mas receptor (MasR) is a G protein-coupled receptor proposed as a candidate for mediating the angiotensin (Ang)-converting enzyme 2-Ang (1-7) protective axis of renin-angiotensin system. Because the role of this receptor is not definitively clarified, determination of MasR tissue distribution and expression levels constitutes a critical knowledge to fully understanding its function. Commercially available antibodies have been widely employed for MasR protein localization and quantification, but they have not been adequately validated. In this study, we carried on an exhaustive evaluation of four commercial MasR antibodies, following previously established criteria. Western Blotting (WB) and immunohistochemistry studies starting from hearts and kidneys from wild type (WT) mice revealed that antibodies raised against different MasR domains yielded different patterns of reactivity. Furthermore, staining patterns appeared identical in samples from MasR knockout (MasR-KO) mice. We verified by polymerase chain reaction analysis that the MasR-KO mice used were truly deficient in this receptor as MAS transcripts were undetectable in either heart or kidney from this animal model. In addition, we evaluated the ability of the antibodies to detect the human c-myc-tagged MasR overexpressed in human embryonic kidney cells. Three antibodies were capable of detecting the MasR either by WB or by immunofluorescence, reproducing the patterns obtained with an anti c-myc antibody. In conclusion, although three of the selected antibodies were able to detect MasR protein at high expression levels observed in a transfected cell line, they failed to detect this receptor in mice tissues at physiological expression levels. As a consequence, validated antibodies that can recognize and detect the MasR at physiological levels are still lacking

Immunohistochemistry in heart and kidney from wild-type (WT) and MasR-KO mice.

<p>Negative controls performed by omitting the primary antibody demonstrated minimal background immunostaining in heart (A) and kidney (B) sections. (A) In heart sections, NLS-1531 antibody stained predominantly the cytoplasm of cardiomyocytes with similar intensity in WT and MasR-KO hearts. The AAR-013 antibody stained the cardiomyocytes nucleus and weaker staining was observed in their cytoplasm. The same pattern was found in heart sections of MasR-KO mice. (B) In kidney sections, for NLS-1531 antibody, staining was mostly restricted to cytoplasm of numerous tubules cells with similar intensity in WT and MasR-KO kidneys. Antibody AAR-013 stained most intensely tubules cells nucleus and weaker staining was observed in their cytoplasm. Glomeruli were also stained positively. The same pattern was found in kidney sections of MasR-KO. Preincubation of the AAR-013 antibody with the blocking peptide provided by the vendors eliminated the immunohistochemical nuclear staining both in WT and MasR-KO mice kidney sections. Images are representative of n = 3. Bar, 50 μm.</p

Detection of MasR mRNA in heart and kidney from wild type and MasR-KO mice.

<p>Representative agarose gel (n = 3–5) showing reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) product obtained from hearts (A) and kidneys (B) of wild type (WT) and MasR-KO mice. MasR mRNA was undetectable in heart and kidney of MasR-KO mice. 18S ribosomal RNA (18S rRNA) was used as housekeeping gene.</p