Estudo comparativo do conceito de Mulligan e a aplicação de kinesio taping na epicondilite lateral

Introdução: A epicondilite lateral (EL) é uma das lesões mais comuns que afeta o membro superior, caracterizada pela dor lateral do cotovelo. Na literatura são descritas diferentes opções de tratamento para a EL mas sem existir consenso sobre a estratégia de intervenção com maior eficácia. A mobilização com movimento (MWM) e aplicação de kinesio taping (KT) tem apresentado bons resultados na melhoria da dor e funcionalidade e no aumento de força de preensão. No entanto, não existe estudos a comparar a efectividade das duas técnicas. Objetivo(s): Analisar e comparar os efeitos da técnica mobilização com movimento (MWM) em relação à aplicação de kinesio taping (KT), na dor, na força de preensão e na funcionalidade em indivíduos com EL. Métodos: Foram incluídos 39 participantes com EL, divididos em três grupos, um grupo de controlo (GC) e dois grupos experimentais, sendo um grupo submetido a uma das técnicas do conceito de Mulligan (GEM) e um grupo submetido a uma aplicação de KT (GEKT). Foram avaliadas a intensidade da dor através da Escala Visual Analógica (EVA), a força de preensão isométrica através de um dinamómetro digital e a funcionalidade através do questionário Patient-Rated Tennis Elbow Evaluation (PRTEE). Resultados: Observaram-se diferenças significativas entre o momento inicial e o momento final de intervenção em todos os grupos em estudo (p≤0,018). Ao analisar a EVA, a força de preensão e o questionário PRTEE, os grupos experimentais obtiveram melhores resultados relativamente ao GC (p<0,001). Comparando os dois grupos experimentais, o GEM apresentou melhores resultados na dor (p=0,012) e na funcionalidade (p=0,001). Conclusão: Ambas as técnicas estudadas promovem melhorias na sintomatologia em indivíduos com EL. Contudo, os resultados sugerem que a aplicação da técnica de Mulligan produz um maior efeito na diminuição da dor e no aumento da funcionalidade, comparativamente à aplicação de KT

Effects of bird extinctions and introductions on the functional and taxonomic diversity of oceanic islands

Human activities are causing major changes in the composition of species communities worldwide. Oceanic islands are at the epicentre of these changes, being among the most threatened ecosystems. Drastic changes in island bird communities resulting from both species extinctions and introductions are likely to have important repercussions on the composition and function of island avifaunas, potentially causing severe knock-on effects on island ecosystems. The main objective of this thesis was to explore the taxonomic and functional implications of bird extinctions and introductions for the avifauna of oceanic islands worldwide. It focuses on large oceanic islands (> 100 km2; n = 74), distributed across three oceans. Using island lists of extinct and extant, native and introduced species, plus species functional traits and island characteristics, the thesis first addresses the potential competition between native and introduced island bird species. Then, it evaluates the impacts of bird extinctions and introductions on island functional diversity, investigating island-level consequences, taxonomic and functional homogenization among archipelagos, and patterns and drivers of spatial and temporal taxonomic and functional changes. Overall, the results suggest that marked niche differentiations between native and introduced birds explain the apparent rarity of competition-driven extinctions. Similarly, introduced birds differ from extinct birds because they mostly prefer human-modified landscapes, which might explain why they do not compensate for the lost functional diversity due to extinctions. Island bird assemblages are becoming functionally poorer because they are losing unique species while gaining widespread functionally more redundant species, and therefore are becoming taxonomically and functionally homogenized. Anthropogenic pressure and human connectivity are driving the taxonomic and functional changes across oceanic islands. Assessing temporal changes in taxonomic and functional diversity is key to understand anthropogenic impacts, predict future changes and propose effective conservation tools to safeguard the resilience of ecosystem functioning

Associação entre o IMC, atividade desportiva e atividade física e desportiva no 1º ciclo: um estudo longitudinal de 6 anos no concelho de Lisboa

Orientação: António Labisa PalmeiraObjetivo: O presente estudo pretende analisar a associação entre o Índice de Massa Corporal (IMC) e atividade desportiva, comparando os dados atuais de alunos que realizaram o projeto PlayGym (PG) em 2005-2006 com alunos que não participaram no PG. Método: Realizamos um estudo observacional, realizado no ano letivo de 2006/2007 e 2012/2013, com os alunos aderentes ao projeto PG, que foi coordenado pela Federação Portuguesa de Ginástica, comparando com dados de 2013 de alunos que não participaram no PG em escolas da zona de Lisboa. Participaram neste estudo uma amostra total de 915 alunos, 286 alunos que realizaram o projeto PG em 2005-2006 e 629 alunos que não participaram no PG. As idades foram compreendidas entre os 12 e os 15 anos. Os instrumentos de estudo utilizados foram a bateria de testes do fitnessgram para o peso e altura, para se conseguir realizar o cálculo do IMC e um Questionário de Atividade Desportiva (QAD), desenvolvido por Telama, Yang, Laakso, & Viikari, (1997). Resultados: Através dos resultados verificamos que nos alunos que participaram no PG o IMC aumentou entre 2005 e 2013 (t(285)= -12.61, p<.001). Verificámos que os alunos do PG em 2013 têm um IMC inferior aos alunos que não tiveram PG (t(735.69)=2.68, p=.008), no género masculino verificou-se o aumento do percentil para os alunos que não participaram no PG. No caso das raparigas apesar de o IMC ter sido inferior para ambos os grupos, estes encontram-se no mesmo percentil. Por último, verificámos que não existem diferenças no IMC entre os alunos que não tiveram o PG, mas que praticam em 2013 atividade desportiva e os alunos que tiveram PG e que não praticam atividades desportivas (F(3.15)=.50, p=.68). Consideramos pertinente analisar individualmente os géneros e verificamos também que tanto no género feminino, como no género masculino não existem diferenças entre os grupos. Conclusões: O estudo demonstra que quanto mais cedo os alunos praticarem atividade física, em contexto escolar menos, probabilidade têm em ter um IMC mais elevado na idade da adolescência. Este estudo mostra que a atividade desportiva não tem uma influência principal no IMC dos alunos ao contrário do que parece ter acontecido para a atividade física em contexto escolar durante o 1º ciclo.Objective: The main focus of this study is to analyze the link between the Body Mass Index (BMI) and physical activity, by comparing the BMI of students that took part of the PlayGym project (PG) in 2005 with the ones that didn’t participate, in 2003. The goal is to find out if the PG project of 2005 had any influence on the BMI of students that did participate. Method: In the school year of 2006/2007 and 2012/2013, an observational study was conducted with the students that had participated in the PG project ( coordinated by the Portuguese Federation of Gymnastics) that compared the dada of the students that did not participate in the PG project in Lisbon schools, in 2013. 915 students, aged between 12 and 15 years old, took part of this study. 286 students participated in the PG project in 2006 and 6289 didn’t. The main tool used to conduct this study was the set of fitnessgram tests for weight and height, making it possible to calculate the BMI and a Physical Activity Questionnaire (PAQ) developed by Telama, Yang, Laakso, & Viikari, (1997). Outcome: With these results it became clear that the BMI, of students that did take part of the PG project from 2005 to 2013, increased (t(285)=-12.61, p<.001). The students that participated in the PG project of 2013 have a lower BMI compared to the ones that didn’t (t(735.69)=2.68, p=.008).. There was an increase of the percentile in the male students that didn’t participate in the PG project. Although the girls BMI had been low in both groups, they were at the same percentile. At last it was confirmed that there are no BMI differences between students that didn’t take part of the PG project but did some sort of sporting activity in 2013, and the ones that participated in the PG project but didn’t do any kind of sporting activity (F(3.15)=.50, p=.68). We also found of most importance the individual analysis of gender, from which we verified the lack of difference amongst groups both in male and female gender. Conclusion: This study shows that the sooner students do a physical activity in school context, the lower the probabilities of having a high BMI during adolescence. Unlike physical school activities, this study also showed that there isn’t any influence in the students BMI

miR-9 and miR-29 in Alzheimer’s disease: assessment of a possible synergy

Alzheimer’s disease (AD) is rising as a problem with epidemic proportions. In the latest years, promising genetic therapy technology has evolved with focus on microRNAs (miRNAs) as therapeutic agents since they can be used as translation repressors or messenger RNA (mRNA) degrading agents. This property can be exploited and applied to regulate the expression of some target proteins. AD and its possible treatment with miRNA technology is in the spotlight. Several studies in the literature have reported the link between two miRNAs, the miR-9 and the miR-29, and two important proteins, namely Beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1 (BACE1) and Presenilin (PSEN), which are part of the amyloidogenic pathway. Since the amyloid-ß peptides (Aß) start to excessively accumulate, due to the increased activity of the previously mentioned proteins, the amyloid plaque is formed. Actually, at the moment this is identified as one of the main causes of the disease. Recently, our group has studied the translation repression of human BACE1 by nanoparticle-mediated delivery of recombinant pre-miR-29 into neuronal cells. Therefore, the main goal of this project was also studying the effect of pre-miR-9 in BACE1 and PSEN expression levels and to assess the possible synergy between both of the nucleic acids. Briefly, recombinant pre-miR-9 and pre-miR-29 were produced by Escherichia coli (E. coli) DH5a. Afterwards, the small RNA (sRNA) fraction was extracted by the guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform RNA isolation protocol and purified by arginine affinity chromatography, using NaCl stepwise gradients. Both pre-miRNAs were purified by two distinct methods: a stepwise gradient with three steps and a stepwise gradient with two steps. Even though the stepwise gradient with three steps allowed the purification of both miRNAs, higher recovery was achieved when using the two stepwise gradients. The purified nucleic acids were then encapsulated into chitosan (CS) nanoparticles and used to transfect N2a695 cell lines. The efficacy of the translation inhibition of the BACE1 and PSEN mRNAs was assessed by quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) being demonstrated a decrease in BACE1 and PSEN mRNAs levels in the transfected cells whereas no significant difference in the control cells was observed. Mir-9 induced a greater BACE1 and PSEN mRNA inhibition than pre-miR-29, comparing to untreated control cells. In particular, BACE1 mRNA levels suffered a 42% of reduction after cells transfection with pre-miR-9 and 22% inhibition for pre-miR-29. For PSEN mRNA, it suffered 59% inhibition by pre-miR-9 and 14% inhibition by pre-miR-29. This study allowed the understanding of the effects of pre-miR-9 and pre-miR-29 on mRNAs and protein levels involved in the amyloidogenic pathway.A doença de Alzheimer (DA) tem vindo a tornar-se uma patologia cada vez mais prepoderante principalmente entre idosos. Esta doença é a forma de demência mais prevalente, sendo responsável por 50-70% dos casos. O número de casos de DA por país é muito variável, no entanto, os países da Europa Ocidental são os que mais casos apresentam. Esta é uma doença extremamente incapacitante que leva à perda de funções cerebrais e, consequentemente, a limitações a nível físico, podendo em última instância levar à morte. Ao nível biológico, e em particular na célula, uma das alterações associadas à doença é a elevada produção de péptidos ß-amilóide (Aß) na via amiloidogénica. Esta via celular envolve a clivagem da proteína precursora amilóide (PPA), constituinte de membranas celulares nervosas, pelas ß-secretase (BACE1) e ?-secretase. Como tal, é realmente necessária uma intervenção tendo em vista o tratamento da DA procurando reverter a sua etiologia. Uma das vertentes terapêuticas em grande evolução é a terapia génica que se baseia na alteração ou correção da informação genética de um determinado organismo. Neste sentido os microRNAs (miRNAs) têm sido alvo de intensa pesquisa e investigação, uma vez que têm funções de regulação da expressão génica ao nível transcricional, mediante a clivagem ou inibição da tradução de RNA mensageiro (RNAm). Esta propriedade pode ser explorada e aplicada a RNAm que codificam proteínas de interesse. Já foram publicados alguns estudos que descrevem a associação entre dois miRNAs, o miR-9 e miR-29, e duas proteínas envolvidas na via amiloidogénica, nomeadamente a enzima BACE1 e a Presenilina (PSEN). A BACE1 é uma enzima que cliva a PPA e a presenilina (PSEN) é uma proteína necessária à correta actividade da ?-secretase que por sua vez também cliva a PPA. A DA é principalmente causada pela acumulação de péptidos ß-amilóides resultantes da acção das enzimas BACE1 e PSEN, formando a placa amilóide no cérebro e danificando os tecidos cerebrais envolventes. Recentemente, o nosso grupo de investigação comprovou o efeito do microRNA 29 (miR-29) na inibição da expressão da BACE1 em células N2a695 transfectadas com este miRNA. Desta forma, o principal objectivo desta dissertação consiste no estudo do efeito do miR-9 produzido de forma recombinante nos níveis de expressão das proteínas BACE1 e PSEN, bem como a avaliação de uma possível sinergia entre o miR-9 e o miR-29. Efetivamente, os ácidos nucleicos em questão foram transfectados na sua forma não madura, ou seja, como pre-microRNAs (pre-miRs), pre-miR-9 e pre-miR-29, pois após a sua entrada na célula estes precursores são identificados, processados e exercem a sua função. Os pre-miR-9 e pre-miR-29 foram produzidos de forma recombinante utilizando como hospedeiro Escherichia coli (E. coli) DH5a transformada com o plasmídeo pBHSR1-RM. Estas bactérias foram escolhidas porque têm um rápido crescimento e a produção das moléculas de interesse acompanha-o. É de notar que a produção recombinante de biomoléculas neste hospedeiro é vantajosa pois permite a obtenção de diversos produtos de interesse, em grandes quantidades, sendo rentável do ponto de vista económico. Neste âmbito, torna-se também importante estudar quer os perfis de crescimento da bactéria ao longo do tempo quer os perfis de produção dos miRNAs de forma a identificar o momento em que a produção é maximizada. Paralelamente, a quantidade de ADN genómico (ADNg) bem como o conteúdo proteico são também avaliados ao longo do tempo de crescimento da E. coli DH5a. Relativamente ao crescimento da E. coli DH5a verificou-se um aumento exponencial até 6 horas após o início da sua fermentação. Verificou-se igualmente que o conteúdo de pre-miR-29 e proteínas acompanhou o crescimento bacteriano, aumentando paralelamente até respetivamente 6 horas e 5 horas após o início da cultura. Por outro lado, os níveis de ADNg aumentaram substancialmente a partir de 6 horas de fermentação. Após a recuperação dos RNAs, é extremamente importante proceder à sua purificação. De facto, considerando a sua potencial aplicação terapêutica, os RNAs devem ser recuperados com elevado grau de pureza, estabilidade e atividade. Neste trabalho, a etapa de purificação foi realizada com recurso à cromatografia de afinidade com arginina imobilizada, visto que estudos anteriores indicaram que a arginina possui caraterísticas que a tornam adequada para a purificação de biomoléculas como o RNA, devido às interações que são estabelecidas. Relativamente ao suporte usado para imobilização do ligando, foi selecionado um suporte monolítico visto que apresenta diversas vantagens, tais como a redução do tempo de corrida, a maior capacidade de ligação, excelentes propriedades de transferência de massa e boa recuperação da amostra. Os suportes monolíticos apresentam também a vantagem de permitirem trabalhar a fluxos superiores e em diferentes escalas. A estratégia estabelecida para a purificação dos pre-miRNAs foi baseada na eluição em condições que promovem preferencialmente interações eletroestáticas, nomeadamente, com aplicação de um gradiente crescente de NaCl em 10 mM Tris-HCl a pH 6.5. Estabeleceram-se dois gradientes distintos para a purificação de cada um dos RNAs, um contendo dois passos de eluição e outro com três passos de eluição. As concentrações definidas para a purificação do pre-miR-29 no primeiro gradiente (de 3 passos) foram 0,94 M NaCl, 1,12 M NaCl e 1,6 M NaCl em 10 mM Tris-HCl a pH 6.5; e no gradiente com 2 passos foram usadas as concentrações de 1 M NaCl e 1,6 M NaCl em 10 mM Tris-HCl a pH 6.5. No caso da purificação do pre-miR-9, as concentrações usadas no gradiente de 3 passos foram de 0,98 M NaCl, 1,12 M NaCl e 1,62 M NaCl em 10 mM Tris-HCl a pH 6.5, ou de 1 M NaCl e 1,6 M NaCl em 10 mM Tris-HCl a pH 6.5, no gradiente de 2 passos. É de notar que apesar de ambos os métodos permitirem a purificação dos pre-miRNAs, a recuperação do pre-miR-9 foi superior no método de dois passos, minimizando desta forma as perdas do RNA de interesse. Já para purificar o pre-miR-29, a estratégia de três passos revelou-se mais adequada. Os ácidos nucleicos purificados foram posteriormente encapsulados em nanopartículas de quitosano (CS), que facilitam a entrada na célula, providenciando desta forma o suporte adequado para a entrega dos pre-miRNAs alvo no citoplasma das células neuronais. Após a síntese das nanopartículas, estas foram utilizadas para transfectar a linha celular N2a695 que sobreexpressa a BACE1 humana, permitindo a realização de estudos de avaliação da atividade dos pre-miRNAs. Neste contexto, o efeito isolado do pre-miR-9 e do pre-miR-29 nos níveis de expressão de BACE1 e PSEN foi avaliado nesta linha celular. A análise dos níveis de RNAm por reação quantitativa em cadeia da Polimerase em tempo real (RT-qPCR) demonstrou uma diminuição da quantidade de RNAm de BACE1 e PSEN nas células transfectadas, não tendo os controlos apresentado diferenças significativas. O RNAm de BACE1 sofreu 42% de inibição pela ação do pre-miR-9 e 22% de inibição pela ação do pre-miR-29, comparativamente ao controlo de células não tranfectadas. No caso do RNAm de PSEN, este sofreu uma redução de 59% pela ação do pre-miR-9 e 14% pela ação do pre-miR-29, relativamente ao controlo de células não tratadas. Os resultados obtidos demonstram a ação inibitória do pre-miR-9 e pre-miR-29 no RNAm das proteínas BACE1 e PSEN, sugerindo uma potencial aplicação no tratamento da DA, com eventual efeito aditivo ou sinérgico dos pre-miRNAs estudados

School age Portuguese children who stutter : socio-cognitive performance and the impact of stuttering in their quality of life

A gaguez é uma perturbação da fluência que tem vindo a ser descrita, por alguns autores, como uma perturbação do neurodesenvolvimento. Resulta da interação entre diversos fatores, tais como genéticos, neurofisiológicos e ambientais e é caraterizada por interrupções ou bloqueios na fluência da fala, acompanhada, frequentemente, de esforço e/ou comportamentos de evitamento. A forma como os diversos fatores, associados à gaguez, interagem entre si ainda não é totalmente conhecida e continua a ser alvo de discussão. Compreender o desenvolvimento da gaguez ao longo de diferentes faixas etárias, bem como os fatores de risco que podem estar na base da recuperação espontânea ou cronicidade da perturbação é o que tem despoletado o interesse da investigação nesta área. Nos últimos anos, vários autores mostraram que o impacto da gaguez não se limita às disfluências observadas na fala, existindo fortes evidências sobre os efeitos psicossociais da perturbação, não apenas na pessoa que gagueja, mas também junto de outros intervenientes, quer do seio familiar, quer do seio escolar. O presente trabalho apresenta um conjunto de estudos, cujos principais objetivos visam compreender a interação entre alguns dos fatores, que são apontados na literatura como relevantes para o desenvolvimento da gaguez ou que se relacionam, de alguma forma, com essa perturbação. Pretendeu-se ainda identificar o impacto da gaguez, no quotidiano das crianças Portuguesas, comparando a sua autoperceção com a de crianças de outros países. A perspetiva de impacto dos pais e os dos professores das crianças foi igualmente estudada. Participaram 100 crianças Portuguesas, em idade escolar (7-12 anos; M=9.13; SD=1.70), das quais 50 crianças gaguejavam e a outra metade correspondia aos seus pares fluentes. A amostra correspondente às crianças que gaguejam foi recolhida por conveniência, em diferentes cidades de Portugal, através de casos referenciados por profissionais de saúde ou de educação. O diagnóstico de gaguez foi confirmado através da utilização do Stuttering Severity Instrument (SSI4). Nos estudos com outros intervenientes, participaram ainda 50 pais e 27 professores das crianças do grupo de crianças que gagueja. São cinco os capítulos que constituem o presente trabalho de investigação. No primeiro, apresenta-se uma breve revisão da literatura que tem como base a v multidimensionalidade inerente à gaguez e onde se atualizam os conceitos, as causas e o impacto da perturbação na vida das crianças. De seguida, apresenta-se o primeiro estudo, cujo objetivo consistiu em relacionar a gaguez com o temperamento, o funcionamento executivo e a ansiedade, através da comparação de crianças que gaguejam e os seus pares fluentes. O temperamento foi avaliado através do questionário parental: Temperament in Middle Childhood Questionnaire (TMCQ), traduzido e adaptado para este efeito. A avaliação do funcionamento executivo foi realizada através da versão portuguesa do instrumento neuropsicológico Children Color Trails Test (CCTT). A ansiedade foi avaliada através da versão portuguesa do questionário de autoperceção Multidimensional Anxiety Scale for Children (MASC). Neste estudo, os grupos de crianças que gaguejam e que não gaguejam foram divididos em dois subgrupos, tendo em consideração a idade: o grupo de crianças mais novas (7-9 anos); e o grupo de crianças mais velhas (10-12 anos). Os resultados indicaram que as crianças que gaguejam podem precisar de mais tempo na orientação da atenção e, tendencialmente, manifestam maior reatividade emocional, em comparação com seus pares fluentes. Contudo, quando é considerada a idade das crianças, observam-se resultados significativos na comparação dos diferentes domínios de temperamento, apenas no subgrupo de crianças mais velhas, com médias superiores para as crianças que gaguejam, nas subescalas de: Raiva/Frustração; Impulsividade e Tristeza; e médias inferiores nas subescalas de: Atenção/Foco; Sensibilidade Percetiva e Recuperação de picos de Excitação. Por sua vez, no subgrupo de crianças mais novas, é no desempenho na tarefa relacionada com o funcionamento executivo que se verificam diferenças estatisticamente significativas. Neste grupo, as crianças que gaguejam utilizaram mais tempo a executar a tarefa, cometendo também um maior número de erros e falhas de execução, em comparação com os seus pares fluentes. Relativamente à ansiedade, e fazendo a mesma comparação entre os grupos de crianças que gaguejam e os seus pares fluentes, não foram encontradas diferenças significativas. Por último, foram encontradas correlações positivas entre a idade, alguns dos domínios relacionados com o funcionamento executivo e temperamento, sugerindo interação entre os diferentes fatores. Estes resultados permitiram reforçar a multidimensionalidade da gaguez e podem ser interpretados à luz do modelo Dual Diathesis - Stressor (DDS) que propõe que as capacidades endógenas (diathesis) das crianças interagem de forma dinâmica com os contextos exógenos (stressor). vi O segundo estudo pretendeu medir o impacto da gaguez na vida das crianças Portuguesas e verificou uma perceção de impacto moderado da gaguez nas suas vidas. Foi utilizado o questionário de autoperceção de impacto Overall Assessment of the Speaker’s Experience – School age children (OASES-S), que tem como base a Classificação Internacional de Funcionalidade (CIF) e que neste estudo foi traduzido, adaptado e validado para Português Europeu (OASES-S-PT). Verificou-se que o OASES-S-PT apresenta características psicométricas de fiabilidade e validade adequadas para avaliar a autoperceção de impacto nas crianças Portuguesas em idade escolar. Na comparação dos resultados com outros países, os resultados demonstraram que as crianças Portuguesas experienciam um impacto semelhante ao experienciado pelas crianças Holandesas e menor que as crianças Australianas. Verificou-se ainda um impacto menos relevante no quotidiano das crianças que gaguejam, comparando com as crianças Americanas, Holandesas e Australianas. De forma a perceber a perspetiva dos pais e professores, relativamente ao impacto da gaguez na vida dos seus filhos e alunos, respetivamente, foram realizados os últimos estudos, com os objetivos de comparar a autoperceção das crianças com a perceção dos seus pais e professores. Para estes estudos foram realizadas adaptações das questões do instrumento OASES-S-PT de forma a poderem ser respondidos por pais (OASES-S-P) e professores (OASES-S-T). No estudo direcionado para a perceção dos pais, realizou-se uma subdivisão do grupo, tendo em consideração a presença/ausência de história familiar de gaguez. Os resultados globais dos pais foram semelhantes aos resultados das crianças. No entanto, no caso dos pais com história familiar de gaguez, verificou-se maior impacto nos parâmetros relacionados com as reações das crianças à gaguez e a sua qualidade de vida. No estudo com os professores, apesar de não se terem verificado diferenças significativas na comparação das respostas com as dos seus alunos, não se observaram correlações entre as respostas dos dois grupos. Para além disso, identificou-se uma elevada taxa de absentismo num conjunto de questões sobre a gaguez em geral e intervenção terapêutica. Estes resultados sugerem que, apesar dos professores terem consciência de que a gaguez pode afetar a vida das crianças que gaguejam, as suas respostas não estão em total consonância com as dos seus alunos e denunciam desconhecimento em determinados domínios. É discutida a importância da educação dos professores relativamente à gaguez, bem como da ação destes principais intervenientes que acompanham as crianças que gaguejam. vii Os estudos realizados vêm reforçar a necessidade de desenvolver programas terapêuticos mais ajustados às particularidades de cada grupo específico, assim como destacar a importância do trabalho de parceria, quer com familiares, quer com professores. Contribui também para destacar a visão multidimensional, ressaltando a mais-valia na utilização de protocolos de avaliação que tenham em consideração outros domínios (ex: cognitivos, temperamentais, sociais), para além da fluência da fala. Conclui-se que a dessensibilização das crianças que gaguejam para a perturbação pode ajudar a lidar de uma forma mais positiva e menos reativa à gaguez, facilitando o processo terapêutico. Assim, um processo de avaliação e intervenção mais efetivos podem ser decisivos para a diminuição do impacto que a gaguez possa causar na vida das crianças.Stuttering is a multifaceted disorder resulting from the interaction between genetic, neurophysiological, environmental, and other factors. The ways these factors interact with each other is not yet fully understood, and is still subject of research. In recent years, several authors have shown the impact of the disorder to reach far beyond the surface components, with strong evidence about the psychosocial effects of stuttering not only for the person who stutters but also for their family. This research work seeks to clarify the interaction between factors that contribute to the development of stuttering. In particular, it attempts to improve the assessment and therapeutic programs for stuttering in Portugal. This work presents five chapters: the first consists of a literature review based on the multidimensionality inherent to stuttering. The following chapters consist of four studies that are detailed below. The first study aimed to relate stuttering to temperament, executive functioning, and anxiety, by comparing stuttering children and their nonstuttering peers. Participants were 100 school-age children (mean age = 9.13 mos.; SD = 1.70 mos.), which included 50 children who stutter and 50 children who did not. In this study, participants were divided into two subgroups, taking age into account: a younger group (7-9 years) and an older group (10-12 years). Their temperament was evaluated through the parental questionnaire, Temperament in Middle Childhood Questionnaire (TMCQ), translated and adapted for this purpose. Executive functioning was assessed through the Portuguese version of the neuropsychological instrument, Children Color Trails Test (CCTT). Anxiety was assessed through the Portuguese version of the Multidimensional Anxiety Scale for Children (MASC) self-assessment questionnaire. The second study aimed to measure the impact of stuttering on the Portuguese children’s lives. Participants were 50 children who stutter (Mean age = 9.10 mos.; SD = 1.7 mos.). For this study, the Overall Assessment of the Speaker's Experience of Stuttering - School age (OASES-S) (OASES-S) was translated, adapted, and validated for European Portuguese (OASES-S-PT). Good reliability and validity of the OASESS- PT were verified for the assessment of impact in Portuguese school-age children. The third and fourth studies were conducted in order to understand the parents' and teachers' perspectives regarding the impact of stuttering on the lives of their children and students, and to compare the results with the children's self-perception of impact. ix In the study related to the perception of parents, a subdivision of the group was performed, taking into account the presence or absence of a family history of stuttering. The participants were 50 parents divided into: i) group of parents with a family history of stuttering (n= 30), and ii) group of parents with no history family of stuttering (n= 20). The study that aimed to investigate the teacher’s perceptions involved 27 teachers. In both studies adaptations, of the OASES-S-PT instrument were made so that they could be answered by parents (OASES-S-P) and teachers (OASES-S-T). The results indicated that children who stutter may experience lower ability to orient attention and may have greater emotional reactivity compared with their nonstuttering peers. Portuguese children who stutter experience a moderate impact of stuttering in their lives. In general, the results of parents and teachers were in agreement with the perceptions of the children; however, parents with a family history of stuttering reported significantly higher negative impact. This finding supports the idea that refinements in clinical and educational practices are needed; findings also highlight the importance of teamwork with parents and teachers

Production of glycerol and 1,3-propanediol from renewable ressources : study of new biocatalysts and process strategies

1,3-Propanediol can be biologically produced from glycerol by several microorganisms, namely clostridia. However, no natural microorganism is able to synthesize 1,3-propanediol from glucose. Different strategies have been tried to accomplish this conversion and set up a flexible process operating either on glycerol or glucose. In this work the production of 1,3 - propanediol from glucose and sugar cane molasses was investigated in a two-step process using two recombinant microorganisms. The first stage of the process was the conversion of glucose or other sugar into glycerol by a Saccharomyces cerevisiae strain. To increase glycerol production, different tpi1Δ mutant strains of S. cerevisiae, resulting from genetic engineering strategies, focused on the redirection of metabolic fluxes and overexpression of the key enzymes of the glycerol formation pathway, were tested. Best results were obtained with the mutant strain S. cerevisiae HC42 which exhibits a glycerol yield of 0.46 g.g-1 glucose and a productivity of 3.1 mmol glycerol.h-1.g-1 dry mass on 20 g.l-1 of glucose. Genomic analysis of this strain revealed that 384 genes had significantly changed in response to the genetic modifications introduced; also, the genetic strategy followed led to an intracellular glycerol concentration 10-fold higher than in the parent strain. To solve this issue, the overexpression of FPS1 was exploited in S. cerevisiae HC42. A novel mutant strain FM62 was obtained; however no significant differences on glycerol intracellular accumulation and production were reported. The strain HC42 was not able to grow on high glucose concentrations. In order to increase the glycerol production, the strain was adapted to high glucose concentrations (> 200 g.l-1). The adapted strains FH100 and FH200 were able to grow on 100 and 200 g.l-1 glucose leading to final glycerol concentrations of 49.2 g.l-1 and 60.0 g.l-1 respectively. FH100 was also cultivated on sugar cane molasses media; the production of glycerol increased with the initial total sugars concentration and 47.1 g.l-1 of glycerol were produced when the strain was grown on 101.3 g.l-1 total sugars. The second stage of the process was carried out by the engineered strain Clostridium acetobutylicum DG1 (pSPD5) able to convert glycerol to 1,3- propanediol. This two-step strategy led to a flexible process, resulting in a 1,3- propanediol production and yield that depended on the initial sugar concentration. Below 56.2 g.l-1 of sugar concentration, cultivation on molasses or glucose showed no significant differences. However, at higher molasses concentrations glycerol initially produced by yeast could not be totally converted into 1,3- propanediol by C. acetobutylicum and a lower 1,3-propanediol overall yield was observed. Best results were obtained with an initial glucose concentration of 103 g.l-1, leading to a final 1,3-propanediol concentration of 25.5 g.l-1, a productivity of 0.16 g.l-1.h-1 and 1,3-propanediol yields of 0.56 g.g-1 glycerol and 0.24 g.g-1 sugar, which is, to our knowledge, the highest value reported for a two-step process. For an initial sugar concentration (from molasses) of 56.2 g.l-1, 27.4 g.l-1 of glycerol were produced, leading to 14.6 g.l-1 of 1.3-propanediol and similar values of productivity, 0.15 g.l-1.h-1, and overall yield, 0.26 g.g-1 sugar.O composto 1,3-propanodiol pode ser biologicamente produzido a partir de glicerol por vários microrganismos, nomeadamente clostridia. No entanto, nenhum microrganismo indígena é capaz de sintetizar 1,3-propanodiol a partir de glicose. Têm sido desenvolvidas diferentes estratégias tendo em vista esta conversão e a implementação de um processo flexível, operando quer a partir de glicerol quer a partir de glicose. Neste trabalho, foi investigada a produção de 1,3-pronanodiol a partir de glicose ou melaços de cana-de-açúcar, através de um processo em duas etapas, usando dois microrganismos geneticamente modificados. Na primeira etapa do processo a glicose, ou outro açúcar, foi convertido em glicerol por uma estirpe de Saccharomyces cerevisiae. Para aumentar a produção de glicerol, foram desenvolvidas e avaliadas diferentes estirpes mutantes tpi1Δ de S. cerevisiae, resultantes de estratégias de engenharia genética tendo em vista o redireccionamento dos fluxos metabólicos e a sobreexpressão de enzimas chave da via metabólica de produção de glicerol. Os melhores resultados foram obtidos com a estirpe mutante S. cerevisiae HC42, que apresentou um rendimento em glicerol de 0.46 g.g-1 glicose e uma produtividade de 3.1 mmol glicerol.h-1.g-1 peso seco, em 20 g.l-1 de glicose. A análise genómica desta estirpe revelou alterações na expressão de 384 genes em resposta às modificações genéticas introduzidas; para além disso, a estratégia genética seguida resultou numa concentração intracelular de glicerol 10 vezes maior do que na estirpe selvagem. Com o objectivo de resolver esta questão, foi investigada a sobre-expressão de FPS1 em S. cerevisiae HC42, tendo-se obtido uma nova estirpe mutante, FM62; no entanto, não foram observadas diferenças significativas na produção e na acumulação intracelular de glicerol. A estirpe HC42 não era capaz de crescer em concentrações elevadas de glicose. Para aumentar a produção de glicerol, esta estirpe foi adaptada a elevadas concentrações de glicose (> 200 g.l-1). As estirpes adaptadas FH100 e FH200 foram capazes de crescer em 100 e 200 g.l-1 glicose, conduzindo a concentrações finais de glicerol de 49.2 g.l-1 e 60.0 g.l-1 respectivamente. A estirpe FH100 também foi cultivada em meio de melaços de cana-de-açúcar. A produção de glicerol aumentou com a concentração inicial de açúcares totais e foram produzidos 47.1 g.l-1 de glicerol quando a estirpe foi cultivada em 101.3 g.l-1 açúcar total. A segunda etapa do processo foi realizada pela estirpe geneticamente modificada Clostridium acetobutylicum DG1 (pSPD5), capaz de converter glicerol em 1,3-propanediol. Esta estratégia em dois passos conduziu a um processo flexível, resultando numa produção e rendimento de 1,3-propanodiol dependentes da concentração inicial de açúcar no meio. Para concentrações de açúcar inferiores a 56.2 g.l-1 não foram encontradas diferenças entre os processos realizados com glicose ou com melaços. No entanto, para concentrações mais elevadas de melaços, o glicerol inicialmente produzido pela levedura não foi totalmente convertido em 1,3-propanodiol por C. acetobutylicum e observou-se um rendimento global em 1,3-propanodiol mais baixo. Os melhores resultados foram obtidos com uma concentração inicial de glicose de 103 g.l-1, que conduziu a uma concentração final de 1,3-propanodiol de 25.5 g.l-1, uma produtividade de 0.16 g.l-1.h-1 e rendimentos de 1,3-propanediol de 0.56 g.g-1 de glicerol e 0.24 g.g- 1 de açúcar, sendo este último o valor mais elevado obtido num processo em duas etapas. Para um teor inicial de açúcar (de melaços) de 56.2 g.l-1, foram produzidos 27.4 g.l-1 de glicerol, que conduziram a uma concentração de 14.6 g.l-1 de 1,3- propanodiol, a valores similares de produtividade, 0.15 g.l-1.h-1, e a um rendimento global de 0.26 g.g-1 de açúcar

Perfusion MRI quantification for Multi-Echo EPIK sequence in brain tumour patients

Tese de mestrado integrado, Engenharia Biomédica e Biofísica (Engenharia Clínica e Instrumentação Médica) Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2018The main goal of this thesis was to obtain fully quantifying perfusion parameters from both DSC (Dy-namic Susceptibility Contrast) and DCE (Dynamic Contrast Enhancement) techniques through usage of only one perfusion sequence–GESEEPIK (Gradient-echo, Spin-echo Echo-Planar Imaging with Key- hole). For this, twenty-two patients with a possible brain tumor were recruited for this study, and each patient was scanned data hybrid PET-MR 3T scanner. Firstly, T1-mapping data was acquired through a sequence of Inversion-Recovery EPIK. The contrast agent was then injected into the patient and perfusion images were acquired using the GESE EPIK sequence. Simultaneously, 18F-FET images were acquired which allowed the exclusion of patients who did not have any brain tumor. After the images were acquired, they were analyzed and the parameters were calculated. For starters, the information regarding the changes in T2 and T2*, already inherent to the data acquired, was analyzed. The curve of the MR signal was converted to the concentration curve. This curve was calculated using two different equations. With the calculated concentration curve, the DSC parameters were calculated. As expected, in areas affected by a tumor, there was an increase in vascularization due to angiogenesis. It was also observed, by comparison of the two methods used to calculate the concentration curves, that the non-removal of the leakage effects induced an unreal increase in the calculated parameters. In order to obtain images related to variations of T1 for DCE quantification, the images acquired were extrapolated to a echo time equal to zero. To these extrapolated images, the values obtained from the T1-mapping prior to the contrast’s injection were subtracted in order to obtain the concentration curve. A method that used the extrapolated images to obtain an initial T1-mapping was also tested, in order to avoid the need to implement the extra sequence for that purpose. The tofts kinetic model was applied in both methods, allowing the calculation of DCE parameters. In both applied methods, the results obtained were very similar, indicating the possibility of non-acquisition of the extra sequence if there are time constraints. However, not all parameters behaved as expected and a more detailed investigation of the literature was carried out. It is concluded that some parameters do not have a clear description and cannot characterize human physiology and be used in the study of pathologies. In conclusion, the initial goal of this thesis to obtain quantitative parameters DSC and DCE perfusion techniques, using only a single contrast sequence, was achieved with success. The need to remove leak age effects, which increased the calculated values and the tumor area, was also verified. However, some inconsistencies in the parameters’ interpretation were registered in the available literature. These inconsistencies had repercussions in some values obtained, whose interpretation was impossible, despite being in agreement with the literature. In addition, a method has been tested which further eliminates the need to acquireT1-mapping data prior to the contrast’s injection through an addition al sequence. Although not an objective of this thesis, It was not possible to relate the perfusion parameters to the degree of tumor severity