Impacto del quimerismo hematopoyético precoz en el injerto tras trasplante alogénico de progenitores de sangre de cordón umbilical de donante no emparentado para el tratamiento de hemopatías malignas

El trasplante de sangre de cordón umbilical (TSCU) ha experimentado un auge muy importante en los últimos años como alternativa a la médula ósea y sangre periférica, debido a la dificultad de encontrar donantes altruistas de estas fuentes de progenitores hematopoyéticos. Los datos clínicos disponibles hasta la fecha muestran una supervivencia libre de enfermedad similar a la observada con el trasplante de médula ósea (TMO) o sangre periférica (TSP). Sin embargo, como consecuencia de la baja dosis celular contenida en la SCU, la tasa de fallo de injertos es más elevada y el tiempo hasta la recuperación de la neutropenia más prolongado. Gran parte de la investigación en el terreno del TSCU se centra en solventar este problema. El quimerismo hematopoyético hace referencia a la coexistencia de células del donante y el receptor, en proporciones variables, tras la realización de un trasplante de progenitores hematopoyéticos (TPH). Las técnicas moleculares y citogenéticas actuales permiten determinar de forma bastante precisa el porcentaje de hematopoyesis que pertenece al donante o al receptor tras un trasplante. La principal utilidad de estos estudios es monitorizar el injerto hematopoyético y guiar las terapias destinadas a modular el mismo. Aunque escasos, existen datos en la literatura que sugieren la presencia de un prendimiento molecular previo a la recuperación hematopoyética propiamente dicha. En el caso del TMO y más aún el TSP, la determinación de este prendimiento precoz podría tener escasa utilidad a la hora de predecir el fallo primario de injerto ya que este sería fácilmente sospechable mediante los recuentos celulares en sangre periférica. Sin embargo, en el caso del TSCU la anticipación de un fallo de injerto o la de una cinética de recuperación tardía podría tener importantes implicaciones en el manejo terapéutico de estos pacientes. La hipótesis principal de trabajo de esta tesis doctoral es la posibilidad de predecir el injerto hematopoyético y su cinética de forma precoz mediante el estudio del quimerismo hematopoyético en médula ósea en la fase de aplasia post-TSCU. Para ello se incluyeron en el estudio 148 pacientes que recibieron un TSCU entre los años 2000 y 2011 en el Hospital Universitario la Fe de Valencia como parte del tratamiento de su neoplasia hematológica. La edad mediana fue de 32 años, con extremos entre 15 y 55 años. Todos los pacientes recibieron un régimen de acondicionamiento ablativo consistente en la combinación de ciclofosfamida o fludarabina con tiotepa, busulfán y ATG. En todos los casos se realizó una punción de médula ósea en el día +14 del TSCU para evaluar el estado del quimerismo. Para el análisis del quimerismo se seleccionó como técnica el estudio de short tandem repeats (pequeñas secuencias de ADN altamente variables) mediante el análisis de fragmentos marcados con fluorescencia. Esta técnica fue seleccionada por su moderada sensibilidad y alta capacidad de cuantificación. El punto de corte para definir la presencia de un quimerismo mixto fue del 90% de material del donante. Un 64% de los pacientes presentaron un quimerismo mixto en el día +14 del TSCU. El estado del quimerismo tuvo una marcada influencia en la incidencia acumulada de injerto mieloide, siendo inferior en los pacientes con una quimera mixta (83% vs. 99%; P < 0.001) y especialmente cuando el resultado del quimerismo de donante fue menor al 60% (98% vs. 50%; P < 0.001). De la misma forma, el injerto mieloide fue sensiblemente más lento en los pacientes que presentaron una quimera mixta (18 vs. 24 días; P < 0.001). En el análisis multivariante sólo la presencia de un quimerismo mixto (P < 0.001) y la dosis de linfocitos T infundidos (P < 0.001) fueron factores predictivos para la incidencia acumulada de injerto mieloide. Estos mismos datos fueron observados para el injerto plaquetar. La presencia de un quimerismo mixto no sólo resultó determinante en la incidencia acumulada de injerto mieloide, sino también en la frecuencia de fallo de injerto. Ésta fue del 43% para pacientes con una quimera de donante menor al 60% frente al 0.7% cuando el quimerismo estaba sobre ese valor. No se encontró una asociación estadísticamente significativa entre el estado del quimerismo y la incidencia de enfermedad de injerto contra huésped. Por tanto, este estudio demuestra que el estado del quimerismo en la fase de aplasia precoz posterior a un TSCU muestra una estrecha relación con la cinética del injerto mieloide y plaquetar, así como con la frecuencia de fallo de injerto. Estos datos abren la puerta a posibles intervenciones terapéuticas basadas en los resultados del qumerismo hematopoyético precoz tras TSCU

A precision medicine test predicts clinical response after idarubicin and cytarabine induction therapy in AML patients

Complete remission (CR) after induction therapy is the first treatment goal in acute myeloid leukemia (AML) patients and has prognostic impact. Our purpose is to determine the correlation between the observed CR/CRi rate after idarubicin (IDA) and cytarabine (CYT) 3 + 7 induction and the leukemic chemosensitivity measured by an ex vivo test of drug activity. Bone marrow samples from adult patients with newly diagnosed AML were included in this study. Whole bone marrow samples were incubated for 48 h in well plates containing IDA, CYT, or their combination. Pharmacological response parameters were estimated using population pharmacodynamic models. Patients attaining a CR/CRi with up to two induction cycles of 3 + 7 were classified as responders and the remaining as resistant. A total of 123 patients fulfilled the inclusion criteria and were evaluable for correlation analyses. The strongest clinical predictors were the area under the curve of the concentration response curves of CYT and IDA. The overall accuracy achieved using MaxSpSe criteria to define positivity was 81%, predicting better responder (93%) than non-responder patients (60%). The ex vivo test provides better yet similar information than cytogenetics, but can be provided before treatment representing a valuable in-time addition. After validation in an external cohort, this novel ex vivo test could be useful to select AML patients for 3 + 7 regimen vs. alternative schedules

Bone Marrow-Derived Cells from Male Donors Do Not Contribute to the Endometrial Side Population of the Recipient

Accumulated evidence demonstrates the existence of bone marrow-derived cells origin in the endometria of women undergoing bone marrow transplantation (BMT). In these reports, cells of a bone marrow (BM) origin are able to differentiate into endometrial cells, although their contribution to endometrial regeneration is not yet clear. We have previously demonstrated the functional relevance of side population (SP) cells as the endogenous source of somatic stem cells (SSC) in the human endometrium. The present work aims to understand the presence and contribution of bone marrow-derived cells to the endometrium and the endometrial SP population of women who received BMT from male donors. Five female recipients with spontaneous or induced menstruations were selected and their endometrium was examined for the contribution of XY donor-derived cells using fluorescent in situ hybridization (FISH), telomapping and SP method investigation. We confirm the presence of XY donor-derived cells in the recipient endometrium ranging from 1.7% to 2.62%. We also identify 0.45–0.85% of the donor-derived cells in the epithelial compartment displaying CD9 marker, and 1.0–1.83% of the Vimentin-positive XY donor-derived cells in the stromal compartment. Although the percentage of endometrial SP cells decreased, possibly being due to chemotherapy applied to these patients, they were not formed by XY donor-derived cells, donor BM cells were not associated with the stem cell (SC) niches assessed by telomapping technique, and engraftment percentages were very low with no correlation between time from transplant and engraftment efficiency, suggesting random terminal differentiation. In conclusion, XY donor-derived cells of a BM origin may be considered a limited exogenous source of transdifferentiated endometrial cells rather than a cyclic source of BM donor-derived stem cells

On the structure and stability of the linear complex between Li and CO

Unrestricted Hartree-Fock calculations with large basis sets including d-functions, followed by an estimation of the correlation energy by several methods such as perturbationals, configuration interactions and density functional approach, confirm that the LiCO2 system is stabilized in a linear arrangement. The weak bond between lithium and oxygen exhibits a small electron charge polarization towards the lithium atom. The decomposition of the interaction energies into components has been made

Density functionals and chemical bond, diatomic molecules

A broad set of density functionals has been used to calculate potential energy curves for diatomic hydrides. The selected functionals span the whole range of aproximatiori found in the literature! which can be grouped in four eatheSories: LDF, SICLSF, GCLDF and ZOIDF functionals. The results obtained show the differences between this four approaches and the ability of the density functional formalism to improve the GVB results

Immunophenotyping of the XY donor-derived cells in the endometria of transplanted patients.

<p>(A) XY donor-derived cells (indicated by arrows, orange and green signals) in the absence of the hematopoietic marker CD45+ (blue signal) in the recipients' endometria. Lower panel: spleen as a positive control for CD45 (blue). (B) Co-localization of XY donor-derived cells (indicated by arrows) with epithelial marker CD9 (blue) in recipients' endometria indicate the coexistence of XY+CD9+ cells in epithelial glands. Lower panel: epithelial endometrium as a positive control for CD9 (blue). (C) Co-localization of XY donor-derived cells (indicated by arrows) with stromal marker Vm (blue) in recipients' endometria, indicated by the overlapping of the XY+Vm+ expression in the stromal fraction. Lower panel: stromal endometrium as a positive control for Vm (blue). All the images were acquired using a 63×/1.7× oil immersion objective with a confocal microscope. Note that DAPI signals are shown in gray in all the images.</p

Characteristics of transplant recipients.

<p>CBSC, Cord Blood Stem Cell; BM, Bone Marrow; PBSC, Peripheral Blood Stem Cells; HRT, Hormone Replacement Therapy. (*atrophic endometrium).</p