Detecçao da resistencia de coleópteros de produtos armazenados a inseticidas, através de bioensaios e marcadores moleculares

Orientadora: Sonia M. N. LazzariMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiológicasResumo : O estudo da resistência de insetos de produtos armazenados a inseticidas é importante devido às elevadas perdas qualitativas e quantitativas, e também porque há poucos ingredientes ativos indicados para o controle destes organismos e, uma vez estabelecida a resistência, pouco poderá ser feito para efetuar um controle efetivo das populações. O objetivo desta pesquisa foi detectar populações de besouros de produtos armazenados resistentes e suscetíveis a inseticidas, baseando-se em bioensaios e marcadores moleculares. Apesar de terem sido coletadas diversas espécies, foram utilizados, para os ensaios os coleópteros Sitophilus oryzae (L.) e S. zeamais Motschulsky (Curculionidae) , Rhyzopertha dominica (F.) (Bostrychidae) e Oryzaephilus surinamensis (L.) (Silvanidae), provenientes de armazéns e criações de laboratório. A técnica utilizada para o bioensaio foi a de impregnação de papel filtro, aplicando-se 1 ml de solução de deltametrina (K-Obiol 25 CE®) em discos de papel filtro, em quatro concentrações diferentes, em cinco repetições; a testemunha continha apenas o solvente (acetona). Foram liberados 10 adultos por repetição, avaliando-se a mortalidade a 24 h. Os resultados mostraram uma mortalidade crescente de acordo com o aumento da concentração do inseticida e ao longo do tempo indicaram também que existiam populações resistentes e suscetíveis à dose utilizada. A CLso para avaliar o nível de resistência das populações foi determinada através da análise de probit. Os insetos vivos e mortos nos bioensaios foram congelados para os testes com marcadores moleculares. A técnica de PCR-RAPD utilizada para obtenção de bandas foi realizada com as seguintes condições: 1 X tampão (10 mM Tris-HCI; 3 mM MgCh e 50 mM KCI, pH 8,3), 100 J.lM de cada dNTP; 0,5 J.lM de primer; 1,25 U de Taq polimerase; 25 ng DNA e BSA 0,05%, utilizando-se o programa de amplificação: 3 min a 94°C, 3 min a 35°C e 2 min a 72°C, seguidos de 40 ciclos de 1 min a 94°C, 1 min a 36°C e 2min a 72°C, com extensão final de 5 min a 72°C. Foram utilizados os primers OPA-05, OPA-07, OPA-lO, OPA-16, OPA-18 e OPA-20. Os resultados ainda não demonstraram quais os primers que poderiam ser utilizados para detectar a resistência, mas os testes indicam que o método de extração, a quantidade de DNA por espécime e a qualidade do DNA são adequadas para os ensaios. A associação dos bioensaios com os marcadores moleculares representam uma ferramenta muito importante e precisa para a detecção e manejo da resistência das principais pragas

DISTRIBUIÇÃO ESPACIAL DE Sitophilus zeamais (Coleoptera: Curculionidae) E Oryzaephilus surinamensis (Col.: Silvanidae) EM ESTRUTURA ARMAZENADORA CONTENDO MILHO

The study describes the spatial distribution of the stored grain beetles Sitophilus zeamais (Coleoptera: Curculionidae) and Oryzaephilus surinamensis (Coleoptera: Silvanidae) collected in a corn storage facility, including the receiving and drying areas, during August 2001 to June 2002 in Videira, State of Santa Catarina, Brazil. The experiment was composed by 20 food-baited cage traps, randomly placed in the storage structure, in order to detect spots of insect infestations. A total of 77,176 insects were captured in the food-baited traps. The most abundant species were: O. surinamensis (92%) considered a secondary pest and S. zeamais (7%), which is a primary pest. Monthly the spatial distribution of the insects collected was determined and represented in graphs of seasonal distribution (four seasons) using Surfer® software. The distribution maps indicated infestation of S. zeamais in the distal areas of the storage cells and high infestation of O. surinamensis, in proximal areas of the storage cells and in the tunnel of the storage structure. This way, the monitoring with cage traps and the use of spatial distribution maps represent an indispensable tool for the previous detection of insect populations in storage structures, allowing the management of cleaning and other handling strategies to preserve the quality of the stored corn.Neste trabalho é discutida a distribuição espacial dos coleópteros de grãos armazenados Sitophilus zeamais (Coleoptera: Curculionidae) e Oryzaephilus surinamensis (Coleoptera: Silvanidae) coletados em armazém graneleiro de milho, incluindo as áreas de recebimento e secagem, durante o período de agosto de 2001 a junho de 2002 em Videira - SC. No experimento empregaram-se 20 armadilhas tipo gaiola com isca alimentar, distribuídas na estrutura armazenadora, para detectar os focos de insetos. Durante as coletas 76.931 coleópteros foram capturados nas armadilhas. As espécies encontradas em maior número foram: O. surinamensis (92%) e S. zeamais (7%) consideradas pragas secundária e primária de grãos armazenados respectivamente. Mensalmente foi determinada a distribuição espacial dos insetos coletados e representada em gráficos de distribuição sazonal (quatro estações do ano) usando o programa Surfer®. Nos mapas de distribuição espacial do número de insetos, observou-se infestação de S. zeamais nas áreas distais às células de armazenamento e infestações elevadas de O. surinamensis, nas áreas próximais às células de armazenamento e no túnel do graneleiro. Desta forma, o monitoramento com armadilhas do tipo gaiola, representa uma ferramenta indispensável para a detecção prévia das populações de insetos nas estruturas armazenadoras, permitindo o direcionamento das práticas de higienização e de outras estratégias de manejo para preservar a qualidade do milho armazenado

EFICÁCIA DE TERRA DE DIATOMÁCEA E TEMPERATURA PARA O CONTROLE DO GORGULHO-DO-MILHO EM MILHO ARMAZENADO

Treatment with diatomaceous earth (DE) is an efficient insect control technique in integrated pest management programs of stored grain. Its main advantages are: low toxicity to mammals and long lasting efficacy. The objective of this research was to evaluate the efficacy of DE under different doses and temperatures to control Sitophilus zeamais in stored maize. In vials with 100 g of clean and dry corn kernels, 30 non-sexed 7-14 day-old adults of S. zeamais were submitted to the following treatments in three replicates: DE (Keepdry®) at 500, 750 and 1000 mg kg-1, at 15, 25 and 30 °C. The mortality was evaluated from the 1st to the 28th day. After this period, the adults were removed and the progeny was kept until the 56th day, when the insects were counted and the grain moisture content evaluated. The effect of temperature on S. zeamais mortality was significant for the three DE doses. The 750 and 1000 mg kg-1 doses caused the highest mortality at 25 °C and 30 °C, but with no significant difference between them. The progeny development was significantly higher in the control compared to the treatments with DE; there was no significant difference in the number of progeny among the three DE doses at any of the temperatures studied. The results support the use of DE as an effective grain protectant against S. zeamais in stored corn.O tratamento com Terra de Diatomácea (TD) é uma técnica eficiente para o controle de insetos em programa de manejo integrado de grãos armazenados. Suas principais vantagens são: baixa toxicidade para mamíferos e períodos de eficácia mais longos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de TD em diferentes doses e temperaturas para o controle de Sitophilus zeamais em milho armazenado. Em frascos com 100 g de milho limpo e seco, foram colocados 30 adultos de S. zeamais não sexados de 7 a 14 dias de idade, e submetidos aos seguintes tratamentos com três repetições: TD (Keepdry®) a 500, 750 e 1000 mg kg-1, mantidos a 15, 25 e 30 °C. A mortalidade foi avaliada entre o 1° e o 28° dia. Após este período, os adultos foram removidos e a progênie mantida até o 56° dia quando foi contado o número de insetos e avaliado o teor de umidade dos grãos. O efeito da temperatura na mortalidade S. zeamais foi significativo para as três doses de TD. As doses de 750 e 1000 mg kg-1 proporcionaram a maior mortalidade a 25 °C e 30 °C, mas sem diferenças significativas entre elas. O desenvolvimento da progênie foi altamente significativo no controle comparado ao grão tratado com TD; não foi constatada diferença significativa na progênie entre as três doses de TD nas temperaturas estudadas. Os resultados suportam o uso de TD como um protetor eficiente para o controle de S. zeamais em milho armazenado

Rastreabilidade de grãos: conceito, desenvolvimento de software e estudos de casos de manejo de insetos no armazenamento /

Orientadora : Sonia M. N. LazzariCo-orientadores : Airton R. Pinto Jr. e Flavio A. LazzariAcompanha CD ROMTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Entomologia). Defesa: Curitiba, 2007Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentração: Entomologi

Rastreabilidade de grãos: conceito, desenvolvimento de software e estudos de casos de manejo de insetos no armazenamento /

Orientadora : Sonia M. N. LazzariCo-orientadores : Airton R. Pinto Jr. e Flavio A. LazzariAcompanha CD ROMTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Entomologia). Defesa: Curitiba, 2007Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentração: Entomologi

Combination of diatomaceous earth and powder deltamethrin for insect control in stored corn

The use of diatomaceous earth (DE) is a very efficient insect control measure in stored grain IPM due to its low cost, easy application, reduction of active ingredient residues, lower environmental contamination and operator safety. The objective of this research was to evaluate the efficacy of different dosages of DE mixed with powder deltamethrin for controlling Sitophilus zeamais in stored corn. Samples of 100 g of clean and dry corn, in three replicates, were submitted to the following treatments: DE (Keepdry®), at the dosages of 500, 750 and 1000 g/t; powder deltamethrin (K-Obiol®) at 0,5 g a.i. /t and 1,0 g a.i. /t; and combinations of the lowest and highest DE dosages with the two dosages of deltamethrin. Thirty adults of S. zeamais were placed in each vial with the treated grains and kept in environment chambers at 25ºC. Mortality was evaluated from the 1st to the 28th day. In the treatments mixing DE with deltamethrin or deltamethrin alone, the mortalyti was registered since the first day. In the treatments using only DE, the first dead insects were recorded after the 3rd day, especially in the highest dosages. After the 7th day, however, there was no statistical difference among all treatments, except for the lowest dosage of DE which reached a satisfactory control level only by the 14th day. It was concluded that treatments using DE combined with low dosages of powder deltamethrin represent an efficient control measure against S. zeamais in stored corn because insect mortality is faster than in treatments using DE alone and residues of active ingredients are much lower than using the insecticide in high dosages

Utilização de bioensaios e marcadores moleculares para detecção da resistência de coleópteros de produtos armazenados a inseticidas

The qualitative and quantitative losses caused by stored product insects are of great concern, and since there is only a few active ingredients available for their control it is very important to have a frequent insect resistance monitoring. The objective of this research is to evaluate combination of bioassays and molecular marker techniques to detect insecticide resistance in stored product beetles. The Coleoptera species used for the tests were Sitophilus oryzae (L.) (Curculionidae), Rhyzopertha dominica (F.) (Bostrichidae) and Oryzaephilus surinamensis (L.) (Silvanidae). For the bioassays it was used the impregnated filter paper technique, applying 1 mL of deltamethrin (K-Obiol 25 CE TM) using four concentrations and five replicates, including a control with solvent only. Ten adults of each species were liberated separately on each dish. The mortality was evaluated after 24 h and resistance determined by probit analysis. The samples used for the PCR-RAPD were either in vivo or preserved in 70% ethanol, kept in -18°C freezer. After extraction, quantification and DNA quality analysis, the 25 µL samples had the DNA amplified and tested with six primers. The bioassays showed a crescent mortality proportional to insecticide concentration. The resistance factor for R. dominica, S. zeamais and S. oryzae were: 2,2; 3,2 and 9,2, respectively, compared to the susceptible populations of each species. The PCR-RAPD analysis revealed bands which indicate inter and intraspecific variability in the populations, but it was not possible to correlate them to resistance. The association of bioassay and PCR-RAPD represents a precise and valuable tool for resistance management of stored product insects, but more populations and primers should be tested