Utilidad de la morfología de los huevos como un método indirecto para identificar Anopheles benarrochi Gabaldón,Cova García & López, Anopheles oswaldoi (Peryassu) y Anopheles rangeli Gabaldón, Cova García & López, (Diptera:Culicidae) en Putumayo, Colombia.

In the Department of Putumayo in southern Colombia, malaria transmission has continued in the absence of the 4 traditional Latin American vector species--Anopheles darlingi, Anopheles nuneztovari, Anopheles albimanus or Anopheles trinkae. Human bait collections yielded Anopheles mosquitoes and a morphological variant of Anopheles benarrochi, the adult females of which can easily be misidentified as Anopheles oswaldoi. Species identification of females of Anopheles in the subgenus Nyssorhynchus is generally difficult due to overlapping morphological characters; therefore, progeny of field collected females were link-reared to assess species identity. Herein a robust method is presented to identify the species Anopheles benarrochi, Anopheles oswaldoi and Anopheles rangeli from southern Colombia, using the morphology of the eggs induced from wild-caught females. Eggs of A. rangeli and A. benarrochi were differentiated on the basis of the anterior crown. In A. rangeli, this feature is positioned apically with high walls. In A. benarrochi, anterior crown is positioned more ventrally with comparatively shorter walls. No crown is present in A. oswaldoi. These differences are clear with the aid of a dissecting microscope and make accurate species determination possible even in field conditions. Egg morphology is shown to be an accurate, albeit indirect, method for the taxonomic determination for the three southern Colombian species and may also be useful in other regions of Latin America where the morphological variant of A. benarrochi is sympatric with A. oswaldoi.La identificación correcta de las hembras es esencial para el éxito de cualquier estudio de epidemiología, resistencia a insecticidas o de control de vectores. En el departamento del Putumayo, en el sur de Colombia, la transmisión de malaria continúa siendo un problema, a pesar de la ausencia de los vectores principales de Latinoamérica (Anopheles darlingi Root, Anopheles nuneztovari Gabaldón, Anopheles albimanus Wideman, Anopheles trinkae Faran) en esta región. Se recolectaron. con cebo humano, hembras de Anopheles y se encontró una variante morfológica de Anopheles benarrochi, que en su estadio adulto fácilmente se confunde con Anopheles oswaldoi. La identificación de hembras de Anopheles, particularmente del subgénero Nyssorhynchus, es en general notoriamente difícil debido a la superposición de caracteres morfológicos en el estadio adulto; por tanto, las colecciones deben estar ligadas a la cría de material asociado para identificar correctamente las especies. Esto requiere tiempo y es difícil de obtener en muchas ocasiones. Se presenta un método indirecto de identificación de las especies A. benarrochi, A. oswaldoi y Anopheles rangeli del sur de Colombia usando la morfología de los huevos de hembras silvestres. Los huevos de A. rangeli y A. benarrochi se diferencian por la corona anterior, la cual es apical en A. rangeli y con paredes altas, mientras que en A. benarrochi es ventral y con paredes más cortas. Esta corona está ausente en A. oswaldoi. Estas diferencias fueron obvias incluso bajo un microscopio de luz, lo que hace posible una identificación correcta de estas especies en condiciones de campo. Se muestra cómo la observación de la morfología de los huevos puede permitir la determinación taxonómica correcta, aunque indirecta, de estas tres especies de Nyssorhynchus encontradas en el sur de Colombia, el cual puede ser útil también en otras regiones de Latinoamérica, en donde se encuentre la variante morfológica de A. benarrochi en simpatría con A. oswaldoi

Aplicação da reação em cadeia pela polimerase para detecção de riquetsias em carrapatos (Acari: Ixodidae) coletados no municipio de Campinas, SP

Orientador: Aricio Xavier LinharesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Hoje em dia são reconhecidas muitas espécies de riquétsias pertencentes ao Grupo da Febre Maculosa (GFM) e ao Grupo do Tifo (GT), mas os métodos atualmente disponíveis para a identificação de suas espécies têm limitações técnicas. Para detecção preliminar de riquétsias, a prova da hemolinfa é o método mais amplamente usado. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) tem sido usada para detectar a presença de riquétsias diretamente de amostras teciduais ou sangüíneas de indivíduos e de artrópodes infectados. No presente trabalho foi utilizada a análise pela PCR para detectar infecção riquétsial do GFM em carrapatos coletados em dois parques urbanos do Município de Campinas, SP e comparada com a prova da hemolinfa. Foram coletados adultos deAmblyomma cooperi em capivaras Hydrochaeris hydrochaeris no Lago do Café, analisados para possível infecção riquetsial pela prova da hemolinfa e posteriormente submetidos à análise pela PCR No Parque Hermógenes Leitão Filho e no Lago do Café foram coletadas, sobre vegetação, ninfas do gênero Amblyomma e adultos de A. cajennenese e A. cooperi, analisados pela PCR com quatro pares de iniciadores. Os resultados indicam a superioridade da PCR sob a prova da hemolinfa para detectar carrapatos infectados com riquétsias com maior sensibilidade, especificidade e facil execução, enquanto que a prova da hemolinfa produz falsos positivos e falsos negativos. Nenhuma amostra foi positiva para o GFM, o que poderia indicar problemas nos iniciadores utilizados e portanto a ocorrência de carrapatos infectados com riquétsias do GFM com PCR negativa para a região de 190 kDa. É necessário desenhar iniciadores a partir de carrapatos brasileiros naturalmente infectados e seqüenciar as amostras positivas, para um melhor entendimento da epidemiologia da Febre Maculosa no Município de Campinas. Palavras-chave: Amblyomma, Rickettsia, Febre Maculosa, PCR,CampinasAbstract: Presently, several species of Spotted Fever Group (SFG) and Typhus Group rickettsiae are recognized, but the available methods to obtain a more specific identification present technical limitations. The hemolymph test is the method most widely used in preliminary detection of rickettsiae. The Polymerase Chain Reaction (PCR) procedure has been employed to detect rickettsiae direct1y from clinical specimens and infected arthropods. In the present work we apply the PCR method to detect SFG rickettsiae in ticks collected in two locations of the urban area in Campinas City, SP and we compare the results with those obtained via the hemolymph test. Adults of Amblyomma cooperi were collected from capybaras (Hydrochaeris hydrochaens) at "Lago do Café", and analyzed for possible infection with rickettsia using the hemolymph test. After that the collected ticks were processed and submitted to PCR analysis. Nymphs of Amblyomma sp. and adults of A. cajennenese and A. cooperi were collected from vegetation at "Lago do Café" and "Parque Hermógenes Leitão Filho". These nymphs and adults were analyzed using the PCR procedure with 4 primer pairs. The results indicated a higher sensitivity and specificity of the PCR method when compared to the hemolymph test to detect rickettsiae-infected ticks as well as being easier to perform. Moreover, the hemolymph test produces false-positives and false-negatives. Due to the fact that no positive sample was found or the Spotted Fever specific region, it is possible that ticks infected with SFG rickettsiae produced PCR negative for the region of 190 kDa. Therefore, it is necessary to develop primers from naturally infected Brazilian ticks and to sequence the DNA of the rickettsiae found in the positive samples. This is a pre-requisite for a better understanding of the epidemiology of the Brazilian Spotted Fever in Campinas. Key words: Amblyomma, Rickettsia, Spotted Fever, PCR, CampinasMestradoMestre em Parasitologi

1993-1994 Guidelines for Submitting Program Proposals to the Graduate Curriculum and Research Policies Standing Committee of the Faculty Senate

The city of Campinas is located in an endemic area for Brazilian spotted fever in São Paulo State, where several cases have recently occurred. Capybaras have been associated with the cycle of this disease, for they present positive serology and serve as host for ticks of the genus Amblyomma, the main vectors of Brazilian spotted fever. Ticks were collected both from Capybaras and from the vegetation in the city park Lago do Café, located in the urban area of Campinas City, SP, a site associated with suspected human cases of Brazilian spotted fever. The ticks collected were examinated for the presence of rickettsiae using polymerase chain reaction and the haemolymph test. Through analysis of the gene gltA nucleotide sequence, adults of Amblyomma cajennense and Amblyomma cooperi were found to be infected with the non pathogenic Rickettsia bellii. However, no rickettsiae of the Spotted Fever Group were detected. These results indicate that the role of capybaras as reservoirs of rickettsiae of the Spotted Fever Group is still uncertain and further studies are required.3968-7