Development and validation of sensitive real-time RT-PCR assay for broad detection of rabies virus

Rabies virus (RABV) remains one of the most important global zoonotic pathogens. RABV causes rabies, an acute encephalomyelitis associated with a high rate of mortality in humans and animals and affecting different parts of the world, particularly in Asia and Africa. Confirmation of rabies diagnosis relies on laboratory diagnosis, in which molecular techniques such as detection of viral RNA by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) are increasingly being used.  In this study, two real-time quantitative RT-PCR assays were developed for large-spectrum detection of RABV, with a focus on African isolates. The primer and probe sets were targeted highly conserved regions of the nucleoprotein (N) and polymerase (L) genes.  The results indicated the absence of non-specific amplification and cross-reaction with a range of other viruses belonging to the same taxonomic family, i.e Rhabdoviridae, as well as negative brain tissues from various host species. Analytical sensitivity ranged between 100 to 10 standard RNA copies detected per reaction for N-gene and L-gene assays, respectively. Effective detection and high sensitivity of these assays on African isolates showed that they can be successfully applied in general research and used in diagnostic process and epizootic surveillance in Africa using a double-check strategy

Facteurs associés à la dissociation immunovirologique chez les patients infectés par le VIH-1 sous traitement antirétroviral hautement actif au Centre de Traitement Ambulatoire (CTA) de Dakar

Introduction: L'objectif de ce travail était d'évaluer les différents facteurs associés à la dissociation immunovirologique malgré un traitement antirétroviral hautement actif et efficace.Méthodes: Il s'agissait d'une étude de cohorte historique, descriptive et analytique faite à partir de dossiers de patients infectés par le VIH-1; sous traitement antirétroviral depuis au moins 12 mois, suivis dans la cohorte du CTA de 2001 à 2011 et ayant une charge virale indétectable depuis 6 mois.Résultats: Durant cette période d'étude de 10 ans, la prévalence de la DIV était de 19,3%. Le sexe féminin était prédominant avec un sexe ratio de 1,9. La dissociation immunovirologique a été plus fréquemment rencontrée chez les patients de sexe masculin (29,7% vs 14,1%) avec une différence statistiquement significative (p = 0,00006). L'âge médian était de 44 ans ± 10 ans. Un antécédent de tuberculose a été retrouvé dans environ un tiers des cas (31,4%). La dissociation immunovirologique était significativement plus fréquente chez les patients ayant un antécédent de tuberculose (p = 0,00005). La plupart des patients (68%) était au stade SIDA 3 ou 4 de l'OMS. Les patients ayant une dissociation immunovirologique étaient plus souvent aux stades 3 et 4 de l'OMS (p = 0,0001). La dénutrition a été notée dans plus de la moitié des cas (56,2%) et la dissociation immunovirologique prédominait chez les patients dénutris (p=0,005). Le taux moyen de lymphocytes TCD4+ était de 86,7± 83 cellules / mm3. La dissociation immunovirologique était plus fréquente chez les patients ayant un taux de lymphocytes TCD4 bas à l'initiation avec une différence statistiquement significative (p = 0,00000). En analyse multivariée; Seuls l'âge supérieur ou égal à 43 ans, le taux de CD4 initial < 100 c/mm3 et le sexe masculin étaient significativement associés à cette dissociation immunovirologique.Conclusion: Les principaux facteurs associés à la dissociation immunovirologique étant évalués, d'autres études portant sur ce groupe mériteraient d'être envisagées afin de connaitre l'impact de cette réponse immunologique partielle sur la survenue d'infections opportunistes ou bien la mise en place d'une trithérapie spécifique uniquement dans le but d'avoir une restauration immunologique optimale.Mots clés: Dissociation, immunovirologique, VIH, DakarEnglish Title: Factors associated with immunovirologic dissociation in HIV-1-infected patients under highly active antiretroviral therapy in the Ambulatory Treatment Center (ATC) in DakarEnglish AbstractIntroduction: the objective of this work is to evaluate the different factors associated with immunovirologic dissociation despite highly active and effective antiretroviral treatment.Methods: we conducted a retrospective, cohort, descriptive and analytical study of the medical records of HIV-1 infected patients having received at least 12 months of antiretroviral therapy, followed in the ATC cohort from 2001 to 2011 and with undetectable viral load in the last 6 months.Results: during this 10-year study period, the prevalence of IVD was 19.3%. Female sex was predominant, with a sex ratio of 1.9. Immunovirologic dissociation was more frequent in male patients (29.7% vs 14.1%) with a statistically significant difference (p = 0,00006). The average age was 44 years ± 10 years. A history of tuberculosis was found in about a third of the cases (31.4%). Immunovirologic dissociation was significantly more frequent in patients with a history of tuberculosis (p = 0.00005). Most patients (68%) had AIDS at WHO clinical stages 3 or 4. Patients with immunovirologic dissociation were more often in WHO clinical stages 3 and 4 (p = 0.0001). More than half of the cases (56.2%) were found to be malnourished and immunovirologic dissociation was prevalent in malnourished patients (p=0.005). The mean CD4+ T lymphocytes counts was 86.7± 83 cells / mm3. Immunovirologic dissociation was more frequent in patients with initial low CD4+ T lymphocyte counts and with a statistically significant difference (p = 0.00000). By multivariate analysis, only age greater than or equal to 43 years, CD4 initial counts < 100 c/mm3 and male sex were significantly associated with this immunovirologic dissociation.Conclusion: our study assessed the main factors associated with immunovirologic dissociation. Other studies of this nature would also merit consideration in order to highlight the impact of this partial immune response on the emergence of opportunistic infections or the implementation of a specific tritherapy for the sole purpose of producing fully successful immune restoration.Keywords: Dissociation, immunovirologic, HIV, Daka

Utilisation du test GeneXpert pour le diagnostic de la tuberculose au service des maladies infectieuses du CHNU de Fann

Introduction: Nous avons réalisé ce travail pour montrer notre expérience d’utilisation du GeneXpert et évaluer son apport dans la confirmation du diagnostic de la tuberculose. Méthodes: Etude prospective descriptive et analytique de janvier à Décembre 2013. Résultats: Quatre vingt quatorze patients ont bénéficié du geneXpert pour le dépistage de la tuberculose toute localisation confondue. Le geneXpert avait été positif dans 62% des cas. Les images radiologiques fortement évocatrices de tuberculose était associées à un geneXpert positif dans 25% des cas. La recherche de BAAR réalisée chez 55 patients était positive dans 9 cas (16%). Le geneXpert était positif sur 46 frottis négatif (54%)et dans 89% sur les frottis positifs. La prévalence de la tuberculose extrapulmonaire était de 34%. Le taux de positivité était variable en fonction du type de prélèvement. Deux cas de résistance à la rifampicine ont été détectées. Conclusion: Le geneXpert a été d’un grand apport pour le diagnostic de la tuberculose pulmonaire et extrapulmonaire mais la bacilloscopie reste incontournable.Pan African Medical Journal 2016; 2

Mesenchymal Stem Cell Therapy Regenerates the Native Bone-Tendon Junction after Surgical Repair in a Degenerative Rat Model

BACKGROUND: The enthesis, which attaches the tendon to the bone, naturally disappears with aging, thus limiting joint mobility. Surgery is frequently needed but the clinical outcome is often poor due to the decreased natural healing capacity of the elderly. This study explored the benefits of a treatment based on injecting chondrocyte and mesenchymal stem cells (MSC) in a new rat model of degenerative enthesis repair. METHODOLOGY: The Achilles' tendon was cut and the enthesis destroyed. The damage was repaired by classical surgery without cell injection (group G1, n = 52) and with chondrocyte (group G2, n = 51) or MSC injection (group G3, n = 39). The healing rate was determined macroscopically 15, 30 and 45 days later. The production and organization of a new enthesis was assessed by histological scoring of collagen II immunostaining, glycoaminoglycan production and the presence of columnar chondrocytes. The biomechanical load required to rupture the bone-tendon junction was determined. PRINCIPAL FINDINGS: The spontaneous healing rate in the G1 control group was 40%, close to those observed in humans. Cell injection significantly improved healing (69%, p = 0.0028 for G2 and p = 0.006 for G3) and the load-to-failure after 45 days (p<0.05) over controls. A new enthesis was clearly produced in cell-injected G2 and G3 rats, but not in the controls. Only the MSC-injected G3 rats had an organized enthesis with columnar chondrocytes as in a native enthesis 45 days after surgery. CONCLUSIONS: Cell therapy is an efficient procedure for reconstructing degenerative entheses. MSC treatment produced better organ regeneration than chondrocyte treatment. The morphological and biomechanical properties were similar to those of a native enthesis

Évaluation du débit salivaire chez les personnes vivant avec le VIH sous traitement antirétroviral

Introduction : L’altération de la fonction sécrétoire des glandes salivaires a souvent été associée au virus de l’immunodéficience humaine (VIH). Ces dernières années, la multithérapie associant différents antirétroviraux (ARV) est devenue la modalité de gestion de choix pour la prise en charge de l’infection à VIH. L’objectif de cette étude était d’évaluer l’effet des médicaments antirétroviraux sur la sécrétion salivaire chez des patients vivant avec le VIH. Matériel et méthodes : Une étude transversale comparative a été réalisée sur 166 patients vivant avec le VIH (dont 94 sous ARV et 72 ARV naïfs) à la clinique des Maladies infectieuses et tropicales, au CHUN de Fann (Dakar). Le débit salivaire non stimulé et le pH salivaire ont été évalués dans les deux groupes de patients. Les données ont été statistiquement analysées et exploitées en utilisant le logiciel SPSS. Résultats : Le profil sérologique des patients était largement dominé par le VIH-1 avec 87,1 %. Dans la population de patients vivant avec le VIH et sous ARV, 7,4 % présentaient une xérostomie et 5,3 % avaient une hyposialie et seule l’association thérapeutique TDF + 3TC + NVP (Ténofovir  +  Lamivudine  +  Névirapine) était statistiquement associée à l’hyposialie. Par ailleurs, dans la population de patients vivant avec le VIH ARV naïfs, 20,8 % présentaient une xérostomie et 13,9 % une hyposialie; le taux de lymphocytes T CD4 n’était pas corrélé à l’hyposialie. Conclusion : La fonction des glandes salivaires était beaucoup plus affectée chez les patients non traités; est-ce à dire que le traitement ARV agit positivement sur la fonction sécrétoire des glandes salivaires? D’autres études plus fines et sur des cohortes plus importantes devraient être envisagées pour confirmer cette tendance

Enthesis structure and healing ratse after repair.

<p>The enthesis is the area of bone-tendon junction. A) Wistar rat Achilles tendon-bone junction. B) Higher magnification of the delimited area shown in (A). T, tendon; Bo, bone. C and D) Type II collagen immunostaining of a native (C) and a destroyed enthesis (D). Native enthesis shows two positive areas of collagen II staining: E1, the insertion of the tendon (T) into the bone (Bo) and E2, the sliding zone of the tendon. Note the absence of the tendon and the E1 area just after destruction of the enthesis (D). (C and D, scale  = 200μm). E and F) Healing failure after repair was evaluated by suture breakage (E) and a distance between the bone and the tendon of greater than 1 cm (F) (E and F, scale  = 1 cm). G) Healing rate was evaluated at sacrifice for the three groups of rats and expressed as a percentage. * p<0.05 and ** p 0.01.</p

Improvement by cell therapy of the load-to-failure after repair of Achilles tendons.

<p>We determined the Load-to-failure of Achilles tendons taken from control (G1), chondrocyte- (G2) and MSC-injected (G3) rats 15, 30 and 45 days after repair and compared them to those of a native enthesis (74.4±10.9 N, white box). There was a statistically significant difference between the value for the native entheses and those for other populations at 15 days post-repair. There was a statistically significant difference between the values for the native enthesis and those of G1 and G3 30 days post-repair, and a statistically significant difference between G1 and G2 and G3, 45 days post-repair. * p<0.05, ** p<0.01 and *** p<0.001.</p

Histological scale used to assess the tissue engineering of the enthesis.

<p>The first 3 columns are visual grades assigned by examining x 25 images of the bone-tendon junction. The last 2 columns are assessments of x 100 images. The first column uses sections stained with H&E and the second immunostained for type II collagen. The third column sections were stained with Alcian Blue. Columns 1 to 3 were used to define the production of an enthesis. Columns 2 to 5 were used to rank the organization of the neo-enthesis (16-point scale). The native enthesis always scored 16 points in double blind trials (SD = 0).</p