Characterization of transformed phenotype and proteins with enhanced expression in v-K-ras-transformed normal rat kidney cells

Note:A normal rat kidney (NRK) cell line transformed by a temperature-sensitive mutant Kirsten murine sarcoma virus (ts-371-NRK) was used to correlate the reversion to normalcy of several transformation-related phenotypic properties, with a temperature shift from permissive (32 °C) to non-permissive (39 °C). Because cell surface-related phenotypic properties were at least partially restored post-temperature shift, potential distal effectors of v-K-ras-mediated transformation were sought by immunoprecipitation using rabbit antiserum directed against Ki-MSV -transformed NRK (KNRK) cells. Transformation-enhanced proteins included secreted 59 and 36 kDa glycoproteins with temperature-dependent expression in ts-371-NRK cells. A 10 kDa cytoplasmic protein was enhanced in mutants at either temperature. Immunoselected recombinants from a KNRK-specific Agt11 cDNA library allowed identification of the 59 and 10 kDa proteins as transin 2 and a member of the S 100 family of calcium-binding regulatory proteins (p9Ka/42A). Induction of transin 2 expression was greater in v-K-ras relative to v-src transformants, implicating transin 2 as a possible effector of ras-mediated transformation in NRK cells.Une lignée cellulaire normale de rein de rat (NRK) transformée avec un mutant thermosensible du virus du sarcome murin de Kirsten (ts-371-NRK) a été utilisée pour mesurer les corrélations entre la réversion a la normalité de plusieurs propriétés phénotypiques de cellules transformées. Ces manipulations ont utilisé un régime de température de 32 °C comme température permissive et 39 °C pour la température non-permissive. Puisque les propriétés de surface membranaires sont partiellement restaurées après un transfert à la température permissive, les effecteurs potentiels indirects de la transformation par le v-K-ras ont été immunprécipités en utilisant un antisérum dirige contre des cellules de NRK transformées par le virus du sarcome murin de Kirsten (KNRK). Parmi les protéines dont le niveau est augmenté par ce traitement, on compte des glycoprotéines de poids moléculaire de 59 et 36 kDa qui ont une expression dépendante a la température dans les cellules ts-371-NRK. Une protéine cytoplasmique de 10 kDa était augmentée dans les mutants a l'une ou l'autre des températures. Des recombinants provenant d'une banque Agt11 d'ADNc spécifique aux cellules KNRK ont permis l'identification des protéines de 59 et de 10 kDa comme étant une transine 2 et une protéine associée à la famille S100 liant le calcium (p9Ka/42A). L'induction de l'expression de la transine 2 est plus grande dans les cellules transformées par v-K-ras relativement à celles par v-src, impliquant la transine 2 comme un effecteur possible dans la transformation des cellules de NRK par la protéine ras