Los genes: del laboratorio a la prensa

La información sobre temas relacionados con genética comienza su auge en los medios de comunicación en 1999. En el informe Quiral del citado año reflejaba cómo los artículos periodísticos relacionados con la genética iniciaban un importante incremento sobre todo en los suplementos de Salud. = Information issues regarding genetics begins to grow in the media in 1999. The 1999. Quiral report mentioned the fact articles on genetics were growing rapidly, particularly in health newspaper supplements

Comparative transfection of DNA into primary and transformed mammalian cells from different lineages

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The delivery of DNA into human cells has been the basis of advances in the understanding of gene function and the development of genetic therapies. Numerous chemical and physical approaches have been used to deliver the DNA, but their efficacy has been variable and is highly dependent on the cell type to be transfected.</p> <p>Results</p> <p>Studies were undertaken to evaluate and compare the transfection efficacy of several chemical reagents to that of the electroporation/nucleofection system using both adherent cells (primary and transformed airway epithelial cells and primary fibroblasts as well as embryonic stem cells) and cells in suspension (primary hematopoietic stem/progenitor cells and lymphoblasts). With the exception of HEK 293 cell transfection, nucleofection proved to be less toxic and more efficient at effectively delivering DNA into the cells as determined by cell proliferation and GFP expression, respectively. Lipofectamine and nucleofection of HEK 293 were essentially equivalent in terms of toxicity and efficiency. Transient transfection efficiency in all the cell systems ranged from 40%-90%, with minimal toxicity and no apparent species specificity. Differences in efficiency and toxicity were cell type/system specific.</p> <p>Conclusions</p> <p>In general, the Amaxa electroporation/nucleofection system appears superior to other chemical systems. However, there are cell-type and species specific differences that need to be evaluated empirically to optimize the conditions for transfection efficiency and cell survival.</p

Prognostic Impact of PHIP Copy Number in Melanoma: Linkage to Ulceration

Ulceration is an important prognostic factor in melanoma whose biologic basis is poorly understood. Here we assessed the prognostic impact of pleckstrin homology domain-interacting protein (PHIP) copy number and its relationship to ulceration. PHIP copy number was determined using fluorescence in situ hybridization (FISH) in a tissue microarray cohort of 238 melanomas. Elevated PHIP copy number was associated with significantly reduced distant metastasis-free survival (DMFS; P=0.01) and disease-specific survival (DSS; P=0.009) by Kaplan–Meier analyses. PHIP FISH scores were independently predictive of DMFS (P=0.03) and DSS (P=0.03). Increased PHIP copy number was an independent predictor of ulceration status (P=0.04). The combined impact of increased PHIP copy number and tumor vascularity on ulceration status was highly significant (P<0.0001). Stable suppression of PHIP in human melanoma cells resulted in significantly reduced glycolytic activity in vitro, with lower expression of lactate dehydrogenase 5, hypoxia-inducible factor 1 alpha subunit, and vascular endothelial growth factor, and was accompanied by reduced microvessel density in vivo. These results provide further support for PHIP as a molecular prognostic marker of melanoma, and reveal a significant linkage between PHIP levels and ulceration. Moreover, they suggest that ulceration may be driven by increased glycolysis and angiogenesis

PRC2 Is Required to Maintain Expression of the Maternal Gtl2-Rian-Mirg Locus by Preventing De Novo DNA Methylation in Mouse Embryonic Stem Cells

Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2) function and DNA methylation (DNAme) are typically correlated with gene repression. Here, we show that PRC2 is required to maintain expression of maternal microRNAs (miRNAs) and long non-coding RNAs (lncRNAs) from the Gtl2-Rian-Mirg locus, which is essential for full pluripotency of iPSCs. In the absence of PRC2, the entire locus becomes transcriptionally repressed due to gain of DNAme at the intergenic differentially methylated regions (IG-DMRs). Furthermore, we demonstrate that the IG-DMR serves as an enhancer of the maternal Gtl2-Rian-Mirg locus. Further analysis reveals that PRC2 interacts physically with Dnmt3 methyltransferases and reduces recruitment to and subsequent DNAme at the IG-DMR, thereby allowing for proper expression of the maternal Gtl2-Rian-Mirg locus. Our observations are consistent with a mechanism through which PRC2 counteracts the action of Dnmt3 methyltransferases at an imprinted locus required for full pluripotency.This is the publisher’s final pdf. The published article is copyrighted by the author(s) and published by Elsevier. The published article can be found at: http://www.cell.com/cell-reports/hom

Reparación de mutaciones en el gent CFTR como estrategia de terapia génica para la fibrosis quística

La fibrosis quística (fq) es la enfermedad autosómica recesiva más frecuente en la población caucasoide con una frecuencia de portadores de 1/25. Las manifestaciones clínicas más importantes son las infecciones crónicas recurrentes del pulmón conllevando al deterioro del mismo. En esta tesis nos propusimos corregir dos mutaciones en el gen cftr, responsable de la fq, en la linea celular de epitelio bronquial ib3.1 de genotipo (f508del/w1282x). Para ello, mediante citometría de flujo y microscopía confocal pusimos a punto la incorporación no viral (vectores pei, geneporter y citofectina) de oligonucleótidos modificados (quimeraplastos y oligonucleótidos fosforotioato) y de fragmentos sfhr en estas células. Los quimeraplastos son oligonucléotidos quiméricos de rna y dna y los oligonucleótidos fosforotioato contienen enlaces fosforotioato para evitar su degradación además de enlaces fosfodiéster. Ambos, son capaces de estimular los mecanismos de reparación intrínsecos de las células para corregir a nivel de dna mutaciones puntuales. Los fragmentos sfhr (small fragment homologous replacement) son fragmentos de pcr de longitud variable con la secuencia salvaje del gen que se intercambian con las secuencias genómicas diana mutadas por recombinación homóloga para revertir mutaciones puntuales (cambios de 1 nucleótido, pequeñas inserciones o deleciones). Para estimar el porcentaje de corrección génica adaptamos la técnica diagnóstica de pcr-ola a nuestro modelo para utilizarla como metodología de cuantificación. Además, hemos confirmado que las células ib3.1 tienen los mecanismos de reparación de mutaciones puntuales activos tanto por rt-pcr como por un ensayo in vitro en e.coli con el plásmido pksm4021 que contiene el gen de resistencia a ampicilina y el gen de resistencia a kanamicina inactivado por una mutación puntual. Los resultados que se publicaron en los siguientes artículos nos han permitido extraer las siguientes conclusiones: las células Ib3.1 de epitelio bronquial de fq son competentes en cuanto al sistema de reparación mmr. La incorporación celular de quimeraplastos, oligonucleótidos monocadena y fragmentos sfhr es muy eficiente en las células ib3.1. El lípido catiónico citofectina, el policatión pei y la electroporación, aunque no el lípido catiónico geneporter, son sistemas de transfección eficientes para incorporar oligonucleótidos modificados en el núcleo de las células ib3.1. Los poliplejos de pei y los lipoplejos de citofectina son internalizados por distintos mecanismos aunque en ambos casos los oligonucleótidos modificados son degradados significativamente en las células ib3.1. El análisis genescan de electroferogramas fluorescentes constituye un sistema fiable, fácil, sensible y seguro para evaluar y cuantificar la degradación intracelular y extracelular de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en fluidos biológicos. La tecnología de pcr-ola constituye un sistema fiable y preciso de cuantificación de reparación génica aplicable a modelos celulares heterocigotos. Los fragmentos sfhr pueden actuar como cebador artefactual en las reacciones de pcr y generar un artefacto que da lugar a falsos positivos en la detección de conversión génica. Es indispensable diseñar los cebadores de detección de la modificación génica fuera de la región de homología con los fragmentos sfhr. La corrección génica de mutaciones puntuales mediada por quimeraplastos, oligonucleótidos monocadena y fragmentos sfhr es un proceso ineficiente en las células ib3.1. Será necesario estimular los mecanismos endógenos de reparación génica para incrementar la frecuencia de reparación génica hasta niveles terapéuticos en dichas células