Desenvolvimento, preparação e aplicação de nanopartículas magnéticas para o carreamento de siRNA para interferência na expressão do gene VEGF em linhagem celular de câncer de mama

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015.O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente, atingindo 1.7 milhões de mulheres no mundo. É caracterizado pelo crescimento e proliferação celular desordenado, podendo ocorrer migração das células tumorais, invasão e metástase para outros tecidos e órgãos. Os tratamentos convencionais para o câncer não atingem somente as células tumorais, mas também os tecidos saudáveis apresentando uma série de efeitos adversos que podem levar a complicações severas. Com o avanço do entendimento da genética do câncer e a identificação de genes alvos, a aplicação do efeito de RNA de interferência (RNAi) apresenta-se como alternativa viável para a melhora do prognóstico. A estratégia anti-angiogênica com a introdução de siRNA contra proteína-chave da angiogênese surge como opção entre os genes alvo superexpressos no câncer de mama. Porém, o sucesso da aplicação de RNAi na terapêutica depende do desenvolvimento de nanocarreadores de siRNA efetivos no transporte e na proteção da molécula contra a rápida degradação na circulação. Desta forma, neste trabalho foram preparados dois tipos de suspensão de nanopartículas carreadoras em diferentes pHs (NP1 e NP2), constituídos de 3 componentes (SPIONs, CaP e copolímero PEG-PAsp) responsáveis por realizar funções distintas desde a formação das nanopartículas até a liberação controlada no citoplasma de células de carcinoma de mama. As nanopartículas foram caracterizadas por espalhamento dinâmico de luz, apresentando diâmetro hidrodinâmico médio entre 120 nm e 140 nm em distribuição por intensidade, e índice de polidispersão (PdI) entre 0,05 e 0,15. A avaliação do tamanho e da morfologia por microscopia eletrônica de transmissão corroborou os resultados de caracterização pela comparação com o histograma em número. As nanopartículas se apresentaram com alto potencial magnético, verificado pela capacidade de magnetização dos mesmos, sugerindo estruturas cristalinas de magnetita e maghemita. De acordo com os estudos de citoxicidade realizados por MTT, ambas NP1 e NP2 não foram citotóxicas em células de câncer de mama MDA-MB 231. A avaliação da eficácia em promover o escape endossomal e entregar o siRNA para o silenciamento foi estudada por microscopia confocal e RT-qPCR. A microscopia confocal confirmou a habilidade dos sistemas nanocarreadores em promover o escape endossomal, enquanto que a partir do ensaio de qPCR foi possível observar a redução da expressão do gene VEGF em cerca de 60% em relação aos controles. Diante deste cenário, as nanopartículas carreadoras NP1 e NP2 apresentam-se como alternativas viáveis para aplicação do efeito de RNA de interferência invivo, devido a sua capacidade de carreamento ativo de siRNA no campo magnético, ausência de citotoxicidade, e eficiência na entrega ao citoplasma celular para o silenciamento do gene VEGF objetivando a terapia anti-angiogênica contra o câncer de mama.Abstract : Breast cancer is the second most common cancer, affecting 1.7 million women. It is characterized by disordered cell growth and proliferation, tumor cells migration, invasion and metastasis. Conventional cancer treatments affect not only tumor cells but also healthy tissue presenting a series of adverse effects that may lead to severe poisoning. With the advancement of the understanding of the cancer genetics and the identification of target genes, application of interference RNA (RNAi) effect is presented as a viable alternative to a better prognosis. The anti-angiogenic strategy with the introduction of siRNA against key protein of angiogenesis appears as an option between the target genes overexpressed in breast cancer. However, the successful application of RNAi depends exclusively on the development of effective siRNA nanocarriers to transport and to protect the molecule against rapid degradation in the blood circulation. Thus, in this work were prepared two kinds of nanoparticles at different pHs (NP1 and NP2), consisting of 3 components (SPIONs, CaP and PEG-PAsp copolymer) responsible for performing different functions from the formation of nanoparticles to controlled release in the cytoplasm of breast carcinoma cells. The nanoparticles were characterized by dynamic light scattering, with hydrodynamic average diameter between 120 nm and 140 nm by intensity distribution and polydispersity index (PdI) of 0.05 to 0.15. The evaluation of the size and morphology by transmission electron microscopy confirmed the characterization results by comparison with the histogram in number. Nanoparticles presented high magnetic potential, verified by magnetizing capacity thereof, suggesting crystal structures of magnetite and maghemite. According to the cytotoxicity by MTT studies, both NP1 and NP2 are not cytotoxic in the MDA-MB 231 breast cancer cells. The efficacy in promoting endosomal escape and deliver siRNA for silencing was studied by confocal microscopy and RT-qPCR. Confocal microscopy confirmed the ability of nanocarriers to promote endosomal escape, while the qPCR assay was possible to observe a reduction in the expression of VEGF gene in about 60% compared to controls. In this scenario, the NP1 and NP2 nanoparticles are presented as a viable alternative carrier for application in RNA interference in vivo, due to its capacity of carrying siRNA by active targeting with application of a magnetic field, lack ofcytotoxicity, and efficiency in delivery to cell cytoplasm to silencing of VEGF gene with the objective of anti-angiogenic therapy against breast cancer

Development of New Nanocarriers for the Delivery of siRNA against RUNX1/ETO gene for the Treatment of Acute Myeloid Leukaemia

Ph. D. ThesisA new platform for the delivery of short interfering RNA (siRNA) was investigated. Polymer-coated AuNPs were functionalised with phosphorothioate modified (PS) nucleic acids. The PS-modification allows their conjugation onto AuNPs though the formation of Au-S bonds. The conjugation of PS-single strand oligonucleotide (PSssODN) on polymer-coated AuNPs resulted in high loading efficiency. Particles prepared with PS-siRNA, which is a double-stranded molecule, did not show loading of siRNA. The addition of three PS-modifications on the siRNA (3PS-siRNA) did not improve the loading efficiency. These observations suggest that the conjugation of PS-ssODN onto AuNPs was not exclusively driven by the Au-S bond formation, but that the exposed bases within the single strand can also drive the conjugation onto Au, presumably through the formation of Au-N bonds. Work in this thesis also investigated the introduction of pH-sensitivity into a siRNA delivery platform. An important feature of any nanocarrier is its stimuli response towards an intracellular trigger. Polymers presenting pH-responsiveness are potentially useful in siRNA delivery as the endosomal acidic environment within the target cells can be harnessed to trigger siRNA release. The pH-sensitivity of model hydrazone and imine bonds was evaluated. The model hydrazones tested did not show the required pH-sensitivity, however, two imines were identified stable at pH 7 and hydrolyzed at pH 5, a suitable pH-sensitivity for siRNA applications. Time limits prevented the further development of the imine system, however, the model hydrazone was successfully appended onto polymer scaffolds and conjugated onto AuNPs. Their complexation with siRNA resulted in 60 % loading efficiency, however, the particles did not release siRNA after incubation in a buffer at pH 5.0. This observation confirms the poor pH-sensitivity of hydrazone bonds. Further studies must be developed to determine the pH-sensitivity of imines in polymer systems, and thus, evaluate its potential as candidates for the safe delivery of siRNA

A rede urbana no extremo oeste catarinense: uma reflexão sobre sua formação

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Urbanismo, História e Arquitetura da Cidade, Florianópolis, 2016.A rede urbana articula as cidades através das suas funcionalidades e seus níveis de centralidade, pela compreensão da produção, circulação e comercialização das mercadorias. A proposta desse trabalho é refletir sobre a rede urbana do Extremo Oeste Catarinense considerando sua história e economia, sua inserção e divisão do trabalho. É a partir de sua história que consegue-se entender a formação do território atual, através do movimento dos núcleos colonizadores e a região de fronteira do Extremo Oeste e a Argentina. Para conseguir analisar a rede urbana no seu caráter local, buscou-se entender o Extrato superior da rede, ou seja, a Rede Nacional, a qual foi analisada pelo REGIC (Regiões de Influências das Cidades) e abordada nesse trabalho. A rede catarinense foi marcada por uma desintegração histórica que refletiu na formação do território e nas relações comerciais do Extremo Oeste Catarinense, sendo que a cidade de Chapecó foi a principal intercomunicadora entre a capital Florianópolis e o Oeste. Chapecó e as agroindústrias possuem grande influência no Extremo Oeste, o que motiva o seu estudo como uma cidade média. A partir de do entendimento geral busca-se identificar as polaridades e influências, possibilitando uma breve análise sobre a estrutura atual da rede no Extremo Oeste. Para isso entender os processos demográficos, as relações entre o meio rural e urbano, a formação da agroindústria, as associações de municípios, as gestões em seus níveis federais, estaduais e municipais, bem como as ligações aéreas e rodoviárias são de fundamental importância para o entendimento da estruturação da rede do Extremo Oeste Catarinense.Abstract : The urban network articulates the cities through their functionalities and their levels of centrality, through the understanding of the production, circulation and commercialization of products. The proposal of this work is to reflect on the urban network of the Far West of Santa Catarina considering its history and economy, its insertion and division of labor. It is from its history that it is possible to understand the formation of the present territory, through the movement of the colonizing nuclei and the border region of the Extreme West and Argentina. In order to be able to analyze the urban network in its local character, it was tried to understand the Superior Extract of the network, that is to say, the National Network, which was analyzed by REGIC (Regions of Influences of the cities) and approached in this work. The Santa Catarina network was marked by a historical disintegration that reflected in the formation of the territory and the commercial relations of the Far West of Santa Catarina. The city of Chapecó was the main intercommunication between the capital Florianópolis and the West. Chapecó and agroindustries have great influence in the Far West, which motivates their study as a middle city. From the general understanding it is sought to identify the polarities and influences, allowing a brief analysis on the current structure of the network in the Far West. In order to understand demographic processes, the relationships between rural and urban environments, the formation of agribusiness, associations of municipalities, management at federal, state and municipal levels, as well as air and road links are of fundamental importance for the understanding of the structure of the Far West Santa Catarina network

A contribuição da aprendizagem mediada para a formação de professores

O objetivo deste artigo é elaborar uma reflexão crítica sobre a formação docente com base em autores como Imbernón (2011), Nóvoa (1991) e Zabala (1998). Analisar sua contribuição para a aprendizagem de um comportamento mais reflexivo, que somado ao conhecimento, saberes e práticas educativas constrói a imagem e identidade para o exercício docente. Trata-se de uma revisão de literatura sobre o tema com base nos autores referidos e na teoria de Reuven Feuerstein, com o intuito de trazer a perspectiva da aprendizagem mediada para a formação de professores, levando em consideração os três princípios universais da mediação: mediação de intencionalidade e reciprocidade, mediação de transcendência e mediação de significado. A teoria da modificabilidade se fundamentada na crença de que todo ser humano é capaz de aprender desde que esteja aberto às mudanças, independente de sua idade, condição genética ou experiência de vida.   

Enhancing the kinetics of hydrazone exchange processes: an experimental and computational study

The capacity of hydrazone bonds to readily undergo component exchange processes sees their extensive utilization in dynamic combinatorial chemistry. The kinetics of hydrazone exchange are optimal at pH ∼4.5, which limits the use of hydrazone-based dynamic combinatorial libraries, particularly for biological targets which are only stable at near-neutral pH values. It would thus be advantageous if hydrazone exchange proceeded with faster rates at pH values closer to neutral. We experimentally and computationally evaluated the hypothesis that hydrazones possessing neighbouring acidic or basic functional groups within the carbonyl-derived moitety of the hydrazone would enhance exchange rates. Our work suggests that judiciously placed N- or O-hydrogen bond acceptors within the carbonyl-derived moiety of the hydrazone stabilize transition states via hydrogen bonding interactions, providing a valuable boost to exchange kinetics at near-neutral pH values. We anticipate these findings will be of interest in dynamic combinatorial chemistry, dynamic covalent polymers/materials, functionalized nanoparticles and interlocked molecules, all of which may benefit from hydrazone exchange processes able to operate at near-neutral pH values

LEI MARIA DA PENHA EFICÁCIA OU INEFICÁCIA

Neste artigo irá se abordar a eficácia ou a ineficácia da Lei Maria da Penha, a mesma foi sancionada no dia 7 de Agosto de 2006 e, visa criar mecanismos para coibir a violênciadoméstica e familiar contra a mulher e estabelecendo medidas de assistência e proteção. O nome que deu origem a essa lei foi uma homenagem a biofarmaceutica Maria da Penha Maia Fernandes que foi casada com o professor universitário Marco Antônio Heredia Viveiros, de quem sofreu inúmeras agressões e abusos, assim, como duas tentativas de assassinato. Maria da Penha lutou para que houvesse justiça, e assim fez uma denuncia pública, para que outras mulheres não sofressem o que ela sofreu. Palavras-Chaves: Violência. Agressão. Violência contra a mulher. Maus Tratos. Violência física. A Lei nº 11.340/06 logo após ser editada passou a ser conhecida como Lei Maria da Penha pelo episódio ocorrido em Fortaleza, Estado do Ceará, quando a história de vida da farmacêutica Maria da Penha Maia Fernandes, apenas mais uma mulher vítima da violência doméstica, tornou-se pública. No ano de 1983, por duas vezes o seu então marido, Marco Antônio Heredia Viveiros, economista e professor universitário tentou matá-la. Na primeira vez, Maria da Penha ficou paraplégica, após a simulação de assalto realizada por seu marido, que desferiu-lhe um tiro de espingarda fazendo com que sua coluna fosse obstruída. Já na segunda tentativa de morte, o ataque ocorreu quando a vítima tomava banho e recebeu uma descarga elétrica

A FERRAMENTA DE CENÁRIOS PROSPECTIVOS NA CONSTRUÇÃO DE DIAGNÓSTICOS MUNICIPAIS VISANDO A ELABORAÇÃO DE PLANOS DIRETORES

Falar em planejamento urbano exige conhecimento e reflexão sobre desdobramentos sócioespaciais, porém, ao planejar não se deve tentar prever o futuro em seu sentido determinado, já quenão é passível de determinação. Dessa forma, a ferramenta dos cenários prospectivos surge como umabusca para simular os desdobramentos sem a quantificação de suas probabilidades e sem restringir oesperado ou a tendência plausível. Este estudo tem como objetivo principal compreender asferramentas de cenários prospectivos no desenvolvimento de diagnóstico para a construção dos planosdiretores municipais, buscando verificar as potencialidade da ferramenta de cenários e suas limitações.Para tanto, busca esclarecer conceitos relativos ao planejamento urbano e o seu desenvolvimento noBrasil, em seu reflexo nos planos diretores atuais e também, sobre o uso da ferramenta de cenários.Para atingir o objetivo, foi desenvolvida uma pesquisa bibliográfica e levantamento de dados, sendorealizado um estudo teórico sobre o conceito de cenários e contexto histórico dos planejamentosurbanos no Brasil. Quanto ao levantamento de dados, uma breve avaliação sobre a ferramenta decenários no caso dos planos diretores dos municípios presentes na Associação de Municípios doExtremo Oeste Catarinense – AMEOSC. Concluiu-se então, que o processo de intervenção no espaçoatravés da forma de elaboração do plano diretor requer um estudo amplo e que respeite asespecificidades e particularidades de cada região, que seja elaborado com estudos aprofundados acercadestas e com o auxílio de várias ferramentas de cenários

Latinx Immigrant Families With Youth With Disabilities Participating in Civic Engagement to Promote Social Justice

Vulnerable populations are exposed to several disparities and inequalities representing an infringement of social justice and limiting their opportunities to live healthy and fulfilling lives. Latinx immigrant families with youth and young adults with disabilities represent one such vulnerable population. The purpose of this article is to describe and discuss the participation of Latinx immigrant families of youth and young adults with disabilities in two interrelated civic engagement projects aimed at promoting social justice and community participation. First, we will discuss the conceptual framework of social justice that grounded these cases of civic engagement, and then we will describe two case studies. Both cases of civic engagement emerged from Latinx immigrant families as part of meaningful conversations they had with the research team related to healthy lifestyles and community participation. The first case of civic engagement addresses walkability safety, and the second describes a community-engaged asset-mapping process. These two cases of civic engagement provided participants an opportunity to advocate for justice. Finally, we discuss the implications and challenges that vulnerable populations experience in making their voices heard by those in positions of power