Anticorpos IgG4 específicos anti-aedes aegypti como fator de proteção em crianças com dengue grave

Introduction: Dengue virus infection is a global public health problem. The bite of Aedes mosquitoes transmits the virus. The proteins in the saliva of the Aedes aegypti vector induce specific IgE and IgG4 antibodies, whose relationship with the severity of dengue is still unknown. Aim: To evaluate the association between A. aegypti-specific IgE and IgG4 antibodies and the severity of dengue infection. Method: A cross-sectional study was carried out involving 16 children with severe dengue (dg), 15 children with dengue and warning signs (dcsa), and 26 healthy children, all of them under 15 years of age. Serum levels of A. aegypti-specific IgE and IgG4 were determined; vegf, sst2, and vegfr1 were also quantified by elisa. For the qualitative variables, proportions and odds ratios (or) were calculated; as to the quantitative variables, medians and interquartile range were found and the U Mann Whitney test was used. Results: Children’s chance of having dg with specific IgG4 serum levels greater than 0.5 do is 78 % lower [or = 0.22] (95 % ci, 0.06–0.77), compared to the possibility of having dg with specific IgG4 serum levels less than 0.5 do. Platelets (p = 0.0002) and vefg (p = 0.003) that are higher in patients with dcsa and sst2 were higher in dg (p = 0.004). Conclusion: A. aegyptispecific IgG4 antibody levels are related to lower clinical severity of dengue.Introducción: la infección por el virus del dengue es un problema de salud pública mundial. El virus es transmitido por la picadura de mosquitos del género Aedes. Las proteínas de la saliva del vector Aedes aegypti inducen anticuerpos IgE e IgG4 específicos, cuya relación con la gravedad del dengue aún es desconocida. Objetivo: evaluar la asociación entre anticuerpos IgE e IgG4 específicos anti A. aegypti con la gravedad de la infección por dengue. Método: se realizó un estudio transversal en el que se incluyeron 16 niños con dengue grave (dg), 15 niños con dengue con signos de alarma (dcsa) y 26 niños sanos, todos menores de 15 años. Se determinaron niveles séricos de IgE e IgG4 específicas de A. aegypti; también se cuantificó vegf, sst2 y vegfr1 por elisa. Para las variables cualitativas se calcularon proporciones y odds ratio (or); en las variables cuantitativas se hallaron medianas, rango intercuartílico y se utilizó la prueba U Mann Whitney. Resultados: la oportunidad de los niños de tener dg con niveles séricos de IgG4 específica mayores de 0,5 od es 78 % menor [or=0,22] (ic de 95 % de 0,06-0,77), comparado con la oportunidad de tener dg con niveles séricos de IgG4 específica menores de 0,5 od. Plaquetas (p=0,0002) y vefg (p=0,003) más elevado en los pacientes con dcsa y sst2 fue más alto en el dg (p=0,004). Conclusión: niveles de anticuerpos de IgG4 anti A. aegypti se relacionan con menor gravedad clínica del dengue.Introdução: a infecção pelo vírus da dengue é um problema mundial de saúde pública. O vírus é transmitido pela picada de mosquitos do gênero Aedes. As proteínas na saliva do vetor Aedes aegypti induzem anticorpos IgE e IgG4 específicos, cuja relação com a gravidade da dengue ainda é desconhecida. Objetivo: avaliar a associação entre anticorpos IgE e IgG4 específicos Anti-Aedes aegypti com a gravidade da infecção por dengue. Método: foi realizado um estudo transversal no qual foram incluídas 16 crianças com dengue grave (dg), 15 crianças com dengue com sinais de alarme (dcsa) e 26 crianças saudáveis, todas com menos de 15 anos de idade. Os níveis séricos de IgE e IgG4 específicos para Aedes aegypti foram determinados. vegf, sst2 e vegfr1 também foram quantificados por elisa. Para as variáveis qualitativas, foram calculadas proporções e odds ratio (or). Nas variáveis quantitativas foram encontradas medianas, intervalo interquartil e utilizado o teste U de Mann Whitney. Resultados: a chance de as crianças terem dg com níveis séricos de IgG4 específica maiores que 0,5 od é 78% menor [or=0,22] (ic 95% 0,06-0,77), em comparação com a chance delas terem dg com níveis séricos de IgG4 específica menor que 0,5 od. As plaquetas (p=0,0002) e vefg (p=0,003) foram maiores nos pacientes com dcsa e o sst2 foi maior no dg (p=0,004). Conclusão: os níveis deanticorpos IgG4 Anti-Aedes aegypti estão relacionados à menor gravidade clínica da dengue

Caracterización molecular e inmunológica de dos proteínas híbridas derivadas de alérgenos de ácaros domésticos

Tesis (Doctora en Ciencias Biomédicas) -- Universidad de Cartagena. Instituto de Investigaciones Inmunológicas. Doctorado en Ciencias Biomédicas, 2019La inmunoterapia específica con extractos alergénicos, es actualmente la única terapia capaz de modular las bases inmunológicas de las enfermedades alérgicas y brindar mejoría a largo plazo. A pesar de los beneficios que se le atribuyen, el uso de extractos alergénicos presenta inconvenientes principalmente elacionados con la compleja composición y la dificultad para una buena estandarización, lo que disminuye su eficacia y seguridad. Una alternativa para solucionar estos problemas está enfocada en administrar al paciente alérgico solo los alergenos comprometidos en la respuesta inmune alérgica o derivados de éstos, en una forma altamente purificada y estandarizada, que garanticen un manejo más seguro y reproducible de las dosis administradas. En este trabajo se expresaron, purificaron y se evaluaron las características moleculares e inmunológicas y la respuesta inmune inducida en un modelo murino de inflamación alérgica, de dos proteínas recombinantes híbridas llamadas MAVACBD-2 y DPx4 diseñadas con segmentos de varios alergenos de los ácaros Blomia tropicalis y Dermatophagoides pteronyssinus, respondiendo a la necesidad de buscar moléculas para el diagnóstico y la terapia de las alergias provocadas por los ácaros domésticos. MAVAC-BD-2 y DPx4, se expresaron y se purificaron como proteínas con alto grado de pureza y con pesos moleculares de 22.8 kDa y 27.2 kDa respectivamente. Los espectros de dicroísmo circular muestran que MAVAC-BD-2 tiene estructura de proteína α-helicoidal y DPx4 tiene una estructura con un mayor contenido de cintas β. En pruebas de ELISA con sueros de alérgicos, estas dos proteínas mostraron niveles de IgE significativamente menores que los obtenidos con los alergenos recombinantes y los extractos de ácaros. Ambas proteínas híbridas inhibieron la reactividad de la IgE hacia Der p 1 y Der p 2, MAVAC-BD-2 además, inhibió la reactividad IgE hacia Blo t 5. Los anticuerpos monoclonales antiDer p 1 y anti-Der p 2 mostraron reactividad hacia las proteínas híbridas. Los ensayos in vitro con basófilos de pacientes alérgicos junto con los estudios in vivo de prueba de anafilaxia cutánea pasiva revelan que estas proteínas carecen de xvii actividad alergénica relevante. La estimulación de PBMC de pacientes alérgicos con las proteínas híbridas indujo la producción significativa de IL-10, acompañada con una baja producción de IL-5. Los estudios en ratones BALB/c, revelaron que la inmunización con las dos proteínas indujo niveles significativamente menores de IgE específicos y mayores de IgG comparados a los inducidos con los extractos alergénicos de ácaros. La relación IgG1/IgG2 sérica en los ratones mostró un mayor peso de la IgG2. Estosanticuerpos reaccionaron con los extractos de ácaros, los alergenos purificados y bloquearon la unión de los anticuerpos IgE de alérgicos a los ácaros hacia los extractos de ácaros y alergenos purificados. Lo anterior estuvo acompañado de una disminución significativa en los signos de inflamación de las vías respiratorias en los ratones inmunizados con MAVAC-BD-2 y DPx4. Todos los resultados anteriores sustentan que es posible obtener proteínas con representación de regiones antigénicas de los principales alergenos de ácaros con propiedades antigénicas e inmunológicas apropiadas para el desarrollo de vacunas para tratar las alergias por ácaros domésticos

An Engineered Hybrid Protein from Dermatophagoides pteronyssinus Allergens Shows Hypoallergenicity

The house dust mite (HDM) Dermatophagoides pteronyssinus is an important risk factor for asthma and rhinitis. Allergen specific immunotherapy that is based on recombinant proteins has been proposed for the safer and more efficient treatment of allergic diseases. The aim of this study was to design and obtain a hybrid protein (DPx4) containing antigenic regions of allergens Der p 1, Der p 2, Der p 7, and Der p 10 from this mite. DPx4 was produced in Escherichia coli and its folding was determined by circular dichroism. Non-denaturing dot-blot, ELISA, basophil activation test, dot blot with monoclonal antibodies, ELISA inhibition, and cysteine protease activity assays were performed. Mice that were immunized with DPx4 were also analyzed. We found that DPx4 had no cysteine protease activity and it showed significantly lower IgE reactivity than Der p 1, Der p 2, and D. pteronyssinus extract. DPx4 induced lower basophil activation than Der p 2 and the allergen extract. Immunized mice produced IgG antibodies that inhibited the binding of allergic patient’s IgE to the allergen extract and induced comparatively higher levels of IL-10 than the extract in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) culture. These results suggest that DPx4 has immunological properties that are useful for the development of a mite allergy vaccine

Anticorpos IgG4 específicos anti-aedes aegypti como fator de proteção em crianças com dengue grave

Introduction: Dengue virus infection is a global public health problem. The bite of Aedes mosquitoes transmits the virus. The proteins in the saliva of the Aedes aegypti vector induce specific IgE and IgG4 antibodies, whose relationship with the severity of dengue is still unknown. Aim: To evaluate the association between A. aegypti-specific IgE and IgG4 antibodies and the severity of dengue infection. Method: A cross-sectional study was carried out involving 16 children with severe dengue (dg), 15 children with dengue and warning signs (dcsa), and 26 healthy children, all of them under 15 years of age. Serum levels of A. aegypti-specific IgE and IgG4 were determined; vegf, sst2, and vegfr1 were also quantified by elisa. For the qualitative variables, proportions and odds ratios (or) were calculated; as to the quantitative variables, medians and interquartile range were found and the U Mann Whitney test was used. Results: Children’s chance of having dg with specific IgG4 serum levels greater than 0.5 do is 78 % lower [or = 0.22] (95 % ci, 0.06–0.77), compared to the possibility of having dg with specific IgG4 serum levels less than 0.5 do. Platelets (p = 0.0002) and vefg (p = 0.003) that are higher in patients with dcsa and sst2 were higher in dg (p = 0.004). Conclusion: A. aegyptispecific IgG4 antibody levels are related to lower clinical severity of dengue.Introducción: la infección por el virus del dengue es un problema de salud pública mundial. El virus es transmitido por la picadura de mosquitos del género Aedes. Las proteínas de la saliva del vector Aedes aegypti inducen anticuerpos IgE e IgG4 específicos, cuya relación con la gravedad del dengue aún es desconocida. Objetivo: evaluar la asociación entre anticuerpos IgE e IgG4 específicos anti A. aegypti con la gravedad de la infección por dengue. Método: se realizó un estudio transversal en el que se incluyeron 16 niños con dengue grave (dg), 15 niños con dengue con signos de alarma (dcsa) y 26 niños sanos, todos menores de 15 años. Se determinaron niveles séricos de IgE e IgG4 específicas de A. aegypti; también se cuantificó vegf, sst2 y vegfr1 por elisa. Para las variables cualitativas se calcularon proporciones y odds ratio (or); en las variables cuantitativas se hallaron medianas, rango intercuartílico y se utilizó la prueba U Mann Whitney. Resultados: la oportunidad de los niños de tener dg con niveles séricos de IgG4 específica mayores de 0,5 od es 78 % menor [or=0,22] (ic de 95 % de 0,06-0,77), comparado con la oportunidad de tener dg con niveles séricos de IgG4 específica menores de 0,5 od. Plaquetas (p=0,0002) y vefg (p=0,003) más elevado en los pacientes con dcsa y sst2 fue más alto en el dg (p=0,004). Conclusión: niveles de anticuerpos de IgG4 anti A. aegypti se relacionan con menor gravedad clínica del dengue.Introdução: a infecção pelo vírus da dengue é um problema mundial de saúde pública. O vírus é transmitido pela picada de mosquitos do gênero Aedes. As proteínas na saliva do vetor Aedes aegypti induzem anticorpos IgE e IgG4 específicos, cuja relação com a gravidade da dengue ainda é desconhecida. Objetivo: avaliar a associação entre anticorpos IgE e IgG4 específicos Anti-Aedes aegypti com a gravidade da infecção por dengue. Método: foi realizado um estudo transversal no qual foram incluídas 16 crianças com dengue grave (dg), 15 crianças com dengue com sinais de alarme (dcsa) e 26 crianças saudáveis, todas com menos de 15 anos de idade. Os níveis séricos de IgE e IgG4 específicos para Aedes aegypti foram determinados. vegf, sst2 e vegfr1 também foram quantificados por elisa. Para as variáveis qualitativas, foram calculadas proporções e odds ratio (or). Nas variáveis quantitativas foram encontradas medianas, intervalo interquartil e utilizado o teste U de Mann Whitney. Resultados: a chance de as crianças terem dg com níveis séricos de IgG4 específica maiores que 0,5 od é 78% menor [or=0,22] (ic 95% 0,06-0,77), em comparação com a chance delas terem dg com níveis séricos de IgG4 específica menor que 0,5 od. As plaquetas (p=0,0002) e vefg (p=0,003) foram maiores nos pacientes com dcsa e o sst2 foi maior no dg (p=0,004). Conclusão: os níveis deanticorpos IgG4 Anti-Aedes aegypti estão relacionados à menor gravidade clínica da dengue

Particular characteristics of allergic symptoms in tropical environments: follow up to 24 months in the FRAAT birth cohort study

Abstract Background Early wheezing and asthma are relevant health problems in the tropics. Mite sensitization is an important risk factor, but the roles of others, inherent in poverty, are unknown. We designed a birth-cohort study in Cartagena (Colombia) to investigate genetic and environmental risk factors for asthma and atopy, considering as particular features perennial exposure to mites, parasite infections and poor living conditions. Methods Pregnant women representative of the low-income suburbs of the city were randomly screened for eligibility at delivery; 326 mother-infant pairs were included at baseline and biological samples were collected from birth to 24 months for immunological testing, molecular genetics and gene expression analysis. Pre and post-natal information was collected using questionnaires. Results 94% of families were from the poorest communes of the city, 40% lacked sewage and 11% tap-water. Intestinal parasites were found as early as 3 months; by the second year, 37.9% of children have had parasites and 5.22% detectable eggs of Ascaris lumbricoides in stools (Median 3458 epg, IQR 975-9256). The prevalence of "wheezing ever" was 17.5% at 6 months, 31.1% at 12 months and 38.3% at 24 months; and recurrent wheezing (3 or more episodes) 7.1% at 12 months and 14.2% at 24 months. Maternal rhinitis [aOR 3.03 (95%CI 1.60-5.74), p = 0.001] and male gender [aOR 2.09 (95%CI 1.09 - 4.01), p = 0.026], increased risk for wheezing at 6 months. At 24 months, maternal asthma was the main predisposing factor for wheezing [aOR 3.65 (95%CI 1.23-10.8), p = 0.01]. Clinical symptoms of milk/egg allergy or other food-induced allergies were scarce (1.8%) and no case of atopic eczema was observed. Conclusions Wheezing is the most frequent phenotype during the first 24 months of life and is strongly associated with maternal asthma. At 24 months, the natural history of allergic symptoms is different to the "atopic march" described in some industrialized countries. This cohort is representative of socially deprived urban areas of underdeveloped tropical countries. The collection of biological samples, data on exposure and defined phenotypes, will contribute to understand the gene/environment interactions leading to allergy inception and evolution.</p