Biomarcadores en fluídos biológicos y su potencial uso como indicadores de nefritis lúpica en individuos con lupus eritematoso sistémico

Lupus nephritis is one of the most severe manifestations of systemic lupus erythematous. Renal involvement in patients with systemic lupus erythematous is an important cause of morbidity and mortality. The pathogenesis of lupus nephritis involve multiple factors, wich include genetic predisposition, epigenetic regulation and environmental interaction. Conventional clinical parameters such as creatinine clearance, proteinuria, urinary sediments, antibodies anti-double- strand DNA and complement proteins they are not enough sensitive or specific to detect disease activity. In the last decades, “Omics” technologies (Proteomic, genomic, transcriptomic, metobolomic) have been used in an extensive way looking for biomarkers, which allowed to discovery variants associated with systemic lupus erythematous and lupus nephritis. Such findings have expanded our knowledge about molecular basis of disease and they have been very important to identification of potential therapeutic targets to prediction of disease and early treatment. In this review, we resume some of recent studies focused in identification of biomarkers associated with lupus nephritis in diverse biological fluids.La nefritis lúpica es una de las manifestaciones más severas del lupus eritematoso sistémico. El compromiso renal en pacientes con lupus eritematoso sistémico es un causal importante de morbilidad y mortalidad. La patogénesis de la nefritis lúpica involucra múltiples factores, entre los que se incluyen predisposición genética, regulación epigenética e interacción ambiental. Los parámetros clínicos convencionales tales como eliminación de creatinina, proteinuria, sedimentos urinarios, anticuerpos anti-ADN de doble cadena y niveles del complemento no son lo suficientemente sensibles o específicos para detectar actividad de la enfermedad.En las últimas décadas, las técnicas basadas en “Ómicas” (proteómica, genómica, transcriptómica, metabolómica) han sido utilizadas de manera extensa para la búsqueda de biomarcadores, las cuales han permitido descubrir una amplia variedad de variantes que son asociadas con lupus eritematoso sistémico y nefritis lúpica.Esos descubrimientos han expandido nuestro entendimiento de las bases moleculares de la enfermedad y han sido muy importantes para la identificación de potenciales blancos terapéuticos para predicción de la enfermedad y tratamiento temprano. En esta revisión, resumimos algunos de los estudios recientes enfocados en la identificación de biomarcadores asociados a nefritis lúpica en diversos fluidos biológicos

Effective gene delivery to Trypanosoma cruzi epimastigotes through nucleofection

New opportunities have raised to study the gene function approaches of Trypanosoma cruzi after its genome sequencing in 2005. Functional genomic approaches in Trypanosoma cruzi are challenging due to the reduced tools available for genetic manipulation, as well as to the reduced efficiency of the transient transfection conducted through conventional methods. The Amaxa nucleofector device was systematically tested in the present study in order to improve the electroporation conditions in the epimastigote forms of T. cruzi. The transfection efficiency was quantified using the green fluorescent protein (GFP) as reporter gene followed by cell survival assessment. The herein used nucleofection parameters have increased the survival rates (N90%) and the transfection efficiency by approximately 35%. The small amount of epimastigotes and DNA required for the nucleofection can turn the method adopted here into an attractive tool for high throughput screening (HTS) applications, and for gene editing in parasites where genetic manipulation tools remain relatively scarce

Alta prevalencia de infección por Leishmania (Kinetoplastidae: Trypanosomatidae) en caninos del norte de Colombia

Introducción. Aunque el perro se considera el principal reservorio doméstico de Leishmania infantum en varios países de Latinoamérica, se desconocen las tasas de infección por parásitos del género Leishmania en perros de algunos focos de leishmaniasis visceral del norte de Colombia. Objetivo. Establecer las tasas de infección por Leishmania spp. en poblaciones caninas del departamento de Sucre en el norte de Colombia. Materiales y métodos. Se estudiaron perros de zonas rurales de los municipios de Sincelejo, Sampués y Ovejas. Los parásitos del género Leishmania se detectaron mediante la amplificación de un segmento de ADN de la subunidad ribosómica pequeña (rSSU). Se analizó la relación entre variables como sexo, grupos etarios y presencia de signos clínicos, respecto a la infección por Leishmania. Resultados. Se amplificó un fragmento de 561 pb de la rSSU de Leishmania spp. en 34,9 % (29/83), 35,7% (15/42) y 11,1 % (1/9) de los perros analizados de Sincelejo, Sampués y Ovejas, respectivamente. La prevalencia total de infección por Leishmania spp. fue de 33,6 %. En dos perros de Sincelejo,dos de Sampués y uno de Ovejas, se obtuvo una banda de 650 pb, característica de parásitos del género Trypanosoma. El 64,2 % de los perros que mostraron al menos un signo clínico indicativo de leishmaniasis canina, fue positivo por PCR. Se halló una relación estadísticamente significativa entre los perros mayores de 33 meses de edad y el resultado positivo para Leishmania spp. (p=0,043). No se encontró relación entre el sexo del perro y el resultado positivo para Leishmania spp. (p=0,85). Conclusión. Un tercio de la población canina analizada se encontró infectada con parásitos del género Leishmania, lo cual podría sustentar su posible papel como fuente de infección para el insecto vector.   doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i3.78

Alta prevalencia de infección por Leishmania (Kinetoplastidae: Trypanosomatidae) en perros del norte de Colombia

Introduction: Although the dog is considered to be the main domestic reservoir of Leishmania infantum in several Latin American countries, the rate of infection with Leishmania parasites remains unknown in dogs from foci of visceral leishmaniasis of northern of Colombia.Objetive: To determine the prevalence of Leishmania infection in canine population from department of Sucre in northern Colombia.Materials and methods: The canine population of rural areas of the municipalities of Sincelejo, Sampués and Ovejas was studied. Parasites of the genus Leishmania were detected by amplifying a DNA segment of the small ribosomal subunit (rSSU). The relationship among sex, age group and clinical signs with infection by Leishmania was analyzed.Results: A 561 bp fragment of the Leishmania rSSU was amplified in 34.9% (29/83), 35.7% (15/42) and 11.1% (1/9) of the dogs analyzed from Sincelejo, Sampués and Ovejas, respectively. Overall prevalence of Leishmania infection was 33.6%. A 650 bp band, characteristic of parasites of the genus Trypanosoma, was amplified in two dogs from Sincelejo and Sampués and in one dog from Ovejas. The 64.2% of the dogs that showed clinical signs compatible with canine leishmaniasis, was PCR positive. A statistically significant relationship was found between dogs over 33 months old and positivity to Leishmania (p=0.043). No relationship was observed between sex and positivity to Leishmania (p=0.85).Conclusion: A third of the canine population studied is infected with Leishmania, which could supportits potential role as a source of infection for the insect vector. doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i3.780Introducción. Aunque el perro se considera el principal reservorio doméstico de Leishmania infantum en varios países de Latinoamérica, se desconocen las tasas de infección por parásitos del género Leishmania en perros de algunos focos de leishmaniasis visceral del norte de Colombia.Objetivo. Establecer las tasas de infección por Leishmania spp. en poblaciones caninas del departamento de Sucre en el norte de Colombia.Materiales y métodos. Se estudiaron perros de zonas rurales de los municipios de Sincelejo, Sampués y Ovejas. Los parásitos del género Leishmania se detectaron mediante la amplificación de un segmento de ADN de la subunidad ribosómica pequeña (rSSU). Se analizó la relación entre variables como sexo, grupos etarios y presencia de signos clínicos, respecto a la infección por Leishmania.Resultados. Se amplificó un fragmento de 561 pb de la rSSU de Leishmania spp. en 34,9 % (29/83), 35,7% (15/42) y 11,1 % (1/9) de los perros analizados de Sincelejo, Sampués y Ovejas, respectivamente. La prevalencia total de infección por Leishmania spp. fue de 33,6 %. En dos perros de Sincelejo,dos de Sampués y uno de Ovejas, se obtuvo una banda de 650 pb, característica de parásitos del género Trypanosoma. El 64,2 % de los perros que mostraron al menos un signo clínico indicativo de leishmaniasis canina, fue positivo por PCR. Se halló una relación estadísticamente significativa entre los perros mayores de 33 meses de edad y el resultado positivo para Leishmania spp. (p=0,043). No se encontró relación entre el sexo del perro y el resultado positivo para Leishmania spp. (p=0,85).Conclusión. Un tercio de la población canina analizada se encontró infectada con parásitos del género Leishmania, lo cual podría sustentar su posible papel como fuente de infección para el insecto vector. doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i3.780 

Canis familiaris, UN NUEVO HOSPEDERO DE Ornithodoros (A.) puertoricensis FOX, 1947 (ACARI: IXODIDA) EN COLOMBIA

<p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">RESUMEN </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Las garrapatas revisten gran importancia en el campo biomédico por sus hábitos hematófagos y asociación con la transmisión de agentes patógenos a humanos y animales. El objetivo de esta investigación fue establecer las especies de garrapatas que parasitan perros en tres poblaciones del área rural del Caribe colombiano. Durante los meses de agosto y diciembre del año 2006 se realizó búsqueda activa de garrapatas sobre caninos domésticos de las localidades de El Campín, Sabanas del Potrero y Escobar Arriba, departamento de Sucre. Las garrapatas recolectadas fueron almacenadas en viales con etanol al 70% e identificadas empleando claves morfológicas de referencia para cada familia. Para la determinación de especie en la familia Argasidae se realizaron estimaciones morfométricas de estructuras externas. Se recolectaron 420 garrapatas a partir de 50 caninos infestados, de un total de 134 perros examinados, que corresponde a una tasa de infestación del 37,3%. Las garrapatas fueron identificadas como <em>Rhipicephalus sanguineus</em>, <em>Rhipicephalus </em>(<em>Boophilus</em>) <em>microplus </em>y <em>Amblyomma ovale </em>pertenecientes a la familia Ixodidae, y <em>Ornithodoros </em>(<em>Alectorobius</em>) <em>puertoricensis </em>de la familia Argasidae. La especie predominante fue <em>R. sanguineus </em>(92,1%) en los estados de larva, ninfa y adulto, seguida por larvas de <em>O. puertoricensis</em>, que fueron halladas en menor número sobre caninos de las tres localidades. Se registra, por primera vez en América, el parasitismo de <em>O. puertoricensis </em>sobre caninos domésticos y se confirma su presencia en Colombia. </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Palabras clave: garrapatas, perros, <em>Ornithodoros puertoricensis</em>, Ixodida, Colombia. </span></span></p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;"> </span></span><hr size="1" /><p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">ABSTRACT </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Ticks are very important from the biomedical point of view, by their hematophagic activity and their role in the transmission of pathogenic microorganisms to man and animals. The main goal of this work was to establish the tick species parasiting dogs in three rural localities of the Colombian Caribbean. From August to December 2006, an active search of ticks on dogs was carried out in the localities of El Campín, Sabanas del Potrero and Escobar Arriba, department of Sucre. The collected ticks were preserved into eppendorf tubes with 70% ethanol, and identified using standard morphological keys for each family. Argasid species were determined by measuring external morphological characters. Of 134 examined dogs in the three localities, 50 were found infested by ticks, representing a infestation rate of 37,3%. A total of 420 ticks were collected from dogs and identified as <em>Rhipicephalus sanguineus</em>, <em>Rhipicephalus </em>(<em>Boophilus</em>) <em>microplus</em>, and <em>Amblyomma ovale </em>of the Ixodidae family, and <em>Ornithodoros puertoricensis </em>of the Argasidae family. <em>R. sanguineus </em>was the predominant species (92,1%) in the stages of larva, nymph and adult, following by <em>O. puertoricensis </em>larvae recorded in low numbers in the three regions sampled. The tick <em>O. puertoricensis </em>is recorded for the first time as ectoparasite of domestic dogs in America. Additionally, the presence of this tick species is confirmed in Colombia. </span></span></p> <p><span style="font-size: x-small; font-family: verdana;"><span style="font-size: medium;">Key words: Ticks, dogs, <em>Ornithodoros puertoricensis</em>, Ixodida, Colombia </span></span></p&gt

CREditing: a tool for gene tuning in Trypanosoma cruzi

The genetic manipulation of Trypanosoma cruzi continues to be a challenge, mainly due to the lack of available and efficient molecular tools. The CRE-lox recombination system is a site-specific recombinase technology, widely used method of achieving conditional targeted deletions, inversions, insertions, gene activation, translocation, and other modifications in chromosomal or episomal DNA. In the present study, the CRE-lox system was adapted to expand the current genetic toolbox for this hard-to-manipulate parasite. For this, evaluations of whether direct protein delivery of CRE recombinase through electroporation could improve CRE-mediated recombination in T. cruzi were performed. CRE recombinase was fused to the C-terminus of T. cruzi histone H2B, which carries the nuclear localization signal and is expressed in the prokaryotic system. The fusion protein was affinity purified and directly introduced into epimastigotes and tissue culture-derived trypomastigotes. This enabled the control of gene expression as demonstrated by turning on a tdTomato (tandem dimer fluorescent protein) reporter gene that had been previously transfected into parasites, achieving CRE-mediated recombination in up to 85% of parasites. This system was further tested for its ability to turn off gene expression, remove selectable markers integrated into the genome, and conditionally knock down the nitroreductase gene, which is involved in drug resistance. Additionally, CREditing also enabled the control of gene expression in tissue culture trypomastigotes, which are more difficult to transfect than epimastigotes. The considerable advances in genomic manipulation of T. cruzi shown in this study can be used by others to aid in the greater understanding of this parasite through gain- or loss-of function approaches

Detección de anticuerpos anti-Leishmania (Trypanosomatidae) en poblaciones caninas del departamento de Sucre, Colombia

El objetivo de la investigación fue determinar la prevalencia de anticuerpos anti-Leishmania en perros del departamento de Sucre, Colombia. Se analizaron 122 perros del área rural de los municipios de Ovejas, Sampués y Sincelejo, mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Anticuerpos anti-Leishmania fueron detectados en el 69,6 % (IC95 % = 61,1 – 78,2) de la población canina estudiada. En el municipio de Sincelejo la seropositividad fue del 72 % (IC95 % = 61,1 – 82,8), en el municipio de Sampués del 68,4 % (IC95 % = 52,3 – 84,5) y en el municipio de Ovejas del 55,5 % (IC95 % = 21,2 – 86,3). Los animales seropositivos fueron principalmente caninos jóvenes y adultos. El 17,6 % de los perros seropositivos mostró signos clínicos compatibles con leishmaniasis canina, entre los cuales la onicogrifosis, alopecia y caquexia fueron los más comunes. La alta frecuencia de caninos con anticuerpos a Leishmania detectada en el presente estudio, pone de manifiesto la hiperendemicidad de la leishmaniasis canina en esta zona del país, así como el alto riesgo de brotes epidémicos de la enfermedad

High-Throughput Sequencing Reveals Circulating miRNAs as Potential Biomarkers of Kidney Damage in Patients with Systemic Lupus Erythematosus.

Renal involvement is one of the most severe manifestations of systemic lupus erythematosus (SLE). Renal biopsy is the gold standard when it comes to knowing whether a patient has lupus nephritis, and the degree of renal disease present. However, the biopsy has various complications, bleeding being the most common. Therefore, the development of alternative, non-invasive diagnostic tests for kidney disease in patients with SLE is a priority. Micro RNAs (miRNAs) are differentially expressed in various tissues, and changes in their expression have been associated with several pathological processes. The aim of this study was to identify changes in the abundance of miRNAs in plasma samples from patients with lupus nephritis that could potentially allow the diagnosis of renal damage in SLE patients. This is an observational case-control cross-sectional study, in which we characterized the differential abundance profiles of miRNAs among patients with different degrees of lupus compared with SLE patients without renal involvement and healthy control individuals. We found 89 miRNAs with changes in their abundance between lupus nephritis patients and healthy controls, and 17 miRNAs that showed significant variations between SLE patients with or without renal involvement. Validation for qPCR of a group of miRNAs on additional samples from lupus patients with or without nephritis, and from healthy individuals, showed that five miRNAs presented an average detection sensitivity of 97%, a specificity of 70.3%, a positive predictive value of 82.5%, a negative predictive value of 96% and a diagnosis efficiency of 87.9%. These results strongly suggest that miR-221-5p, miR-380-3p, miR-556-5p, miR-758-3p and miR-3074-3p are potential diagnostic biomarkers of lupus nephritis in patients with SLE. The observed differential pattern of miRNA abundance may have functional implications in the pathophysiology of SLE renal damage