Az ischaemiás agykárosodásban szerepet játszó TrpM2 kationcsatorna szerkezet-funkció vizsgálata = Structure-function studies of the TrpM2 cation channel involved in ischaemic brain damage.

Megállapítottuk, hogy a csatornát 4 Ca2+ ion kötődése aktiválja. Az aktiváció a Monod-Wymann-Changeux mechanizmust követi, 1 Ca2+ kötődése ~33-szorosra, a 4 ion összesen ~10^6-szorosra, növeli a nyitott-csukott egyensúlyi állandót. A Ca2+ kötőhelyei a kaputól intracelluláris irányban találhatók egy védett üregben, közel a pórus nyílásához. A nyitott póruson beáramló Ca2+ telítésben tartja az aktiváló helyeket, ezért intakt sejtekben, ADPR jelenlétében, egy rövid Ca2+ szignál is elnyújtott TRPM2 aktivitást válthat ki. Megállapítottuk, hogy az ADPR nagy affinitással (K1/2=1uM) aktivál, de az ADPR-hidrolízisnek a csatorna csukódásában játszott szerepét nem tudtuk tisztázni. Az ADPRázok konzervált ""Nudix-box"" motívuma (REFXEE) a TRPM2 NUDT9-H doménjében atípusos (RILRQE). A NUDT9 enzimben az EF->IL mutáció 1%-ára csökkenti, az EE->KK mutáció felfüggeszti az ADPRáz aktivitást. Létrehoztunk egy ""inaktív"" QE->KK és egy ""hiperaktív"" IL->EF TRPM2 mutánst, de e 4 egyedi és 2 dupla mutáció egyike sem befolyásolta az ADPR iránti affinitást illetve a csukódási sebességet. Intakt sejtekben az AMP gátolta, míg a H2O2, a ciklikus ADPR (cADPR), és a nikotinsav-adenin-dinukleotid-foszfát (NAADP) aktiválták a TRPM2-t, és fokozták ADPR iránti érzékenységét. Izolált membrán patch-ben megállapítottuk, hogy a H2O2, az AMP, és a cADPR közvetlenül nem hatnak a TRPM2-re, míg az NAADP és az NAAD kis affinitású parciális agonisták. Tehát intakt sejtekben e modulátorok hatásai közvetettek. | We have revealed that the channel is activated by binding of 4 Ca2+ ions, following the Monod-Wymann-Changeux mechanism. Binding of 1 Ca2+ increases the closed-open equilibrium constant by ~33-fold, the 4 ions altogether by ~10^6-fold. The Ca2+ binding sites are found intracellularly of the gate, in a protected crevice, near the pore entrance, and are kept saturated by Ca2+ flowing through the open pore. Thus, in intact cells, in the presence of ADPR, a single brief Ca2+ spark can elicit prolonged TRPM2 channel activity. We have shown that ADPR activates the channel with high affinity (K1/2=1 uM), but could not clarify the role of ADPR hydrolysis in channel closure. The conserved ADPRase ""Nudix-box"" motif (REFXEE) is atypical in the NUDT9-H domain of TRPM2 (RILRQE). The EF->IL mutation decreases ADPRase activity of the NUDT9 enzyme to ~1%, while the EE->KK mutation completely abolishes it. We constructed an ""inactive"" QE?KK and a ""hiperactive"" IL->EF TRPM2 mutant, but neither of the 4 single and 2 double mutants affected ADPR affinity or channel closing rate. In intact cells AMP inhibits, while H2O2, cyclic ADPR (cADPR), and nicotinic acid-adenin-dinucleotide-phosphate (NAADP) activate TRPM2, and enhance its sensitivity to ADPR. We have found that direct application of H2O2, AMP, and cADPR in isolated patches does not affect the channels, while NAADP and NAAD are low-affinity partial agonists. Thus, in intact cells the effects of these modulators are indirect

Analiza energije potrebne za prešanje peleta

In order to utilize waste products such as sawdust and chips in the wood industry, pellets are made using compaction pressures in the range of 100 MPa or higher. During the compaction process, the density and the modulus of elasticity of the material rapidly increase. Wood materials generally show non-linear viscoelasticplastic behavior and, therefore, the pressure-deformation relationship is dependent on the loading velocity and on the time during which the material is subjected to constant deformation or load. The energy requirement of pellet production depends on many influencing factors and in such cases the use of dimensionless numbers in the form of similarity equation facilitates the processing of experimental results and the obtained similarity relationship has a more general validity for the users. Various fractions of different wood species were used in these experiments, and the pressure, pellet diameter, temperature were also varied. The proposed similarity equation shows a good correlation with the experimental results.U praksi se često od poljoprivrednih ili drvnih materijala prešanjem usitnjenog materijala pod visokim tlakom proizvode pelete pri čemu je tlak često jednak ili veći od 100 MPa. Tijekom prešanja gustoća peleta rzo raste, a zajedno s njom povećava se i modul elastičnosti. Drvo i od njega proizvedeni peleti ponašaju se viskoelastično, tj. njihova tlačna deformacija ovisi o vremenu odnosno brzini pterećenja. Prijašnja istraživanja prešanja usitnjenoga drvnog ostatka pokazala su da cjelovito drvo ni tijekom prilično male kompresije ne pokazuje obilježja elastičnosti prema Hookeovu zakonu. Na kraju ciklusa opterećenja uvijek se zadrži određeni stupanj deformacije, a postupkom rasterećenja velik je dio deformacije nepovratan. Osim vremenom, odnos naprezanja i deformacije određen je i veličinom naprezanja tako da se ne može govoriti o linearnoj viskoelastičnosti. Na temelju rezultata provedenih istraživanja nastala je jednadžba prema kriteriju bezdimenzionalnosti koja univerzalno (neovisno o vrsti drva) karakterizira promjenu gustoće i pritiska s obzirom na prešanje i temperaturu prešanja usitnjenoga drvnog ostatka i dobivenog peleta različitog promjera. Osim toga, istom se jednadžbom može utvrditi karakteristična energija pri izradi peleta ovisno o pritisku prešanja