Fundamentos de la cromatografía de alta resolución de intercambio aniónico (HPAEc–PAD): Determinación estructural de glicoproteína

Históricamente la purificación y el análisis de hidratos de carbono involucró el uso de técnicas como filtración en geles, cromatografía de afinidad (p. ej. lectinas) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). En esta última técnica se utilizaron columnas de fase reversa con resinas alquílicas o fases amino para la separación de monosacáridos neutros y cromatografía de par iónico para oligosacáridos (Honda 1984, Hicks 1988; Huber & Bonn 1995). Las columnas de celite-carbón que habían sido utilizadas para la separación de hidratos de carbono no pudieron ser aplicadas en HPLC dado su fragilidad a la presión. Así, existen en el mercado numerosas columnas de HPLC aplicables al análisis de azúcares con diferentes grados de entrecruzamiento, diferentes formas iónicas y tamaños de partículas de las fases estacionarias y también de diferentes largos, aplicables a la separación de monosacáridos y oligosacáridos y que utilizan en general como fase móvil acetonitrilo: agua. Más recientemente, sistemas cromatográficos de interacción hidrofílica usando columnas basadas en empacados de fase unida a sílica con fases móviles de acetonitrilo: agua, también han sido utilizadas para la separación de hidratos de carbono. Sin embargo, este modo de HPLC puede tener desventajas como la inestabilidad y corto tiempo de vida de las fases unidad y la pobre selectividad y eficiencia de las columnas (Corradini et al., 2012).Debido a que los hidratos de carbono no absorben a longitudes de onda ultravioleta, el método de detección más utilizado es el índice de refracción. Si bien de esta forma se han podido separar oligosacáridos neutros, oligosacáridos que difieren en las ramificaciones y oligosacáridos conteniendo ácido siálico, no se logra la separación de oligosacáridos que difieran en el tipo de unión: por ejemplo Glcp(1-2)Glcp, Glcp(1-3)Glcp y Glcp(1-4)Glcp Otra metodología muy utilizada es la cromatografía gas-líquido, pero dado que los azúcares no son volátiles, exige una etapa previa de derivatización. (Reinhold, 1972; Laine et al., 1972) También se ha acoplado el uso de cromóforos o fluoróforos con el fin de aumentar la sensibilidad de detección (Muramoto et. al. 1987; Rosenfelder et al. 1985; Takemoto et al. 1985; Lin et al. 1985). Más recientemente existen en la literatura ejemplos de separaciones de hidratos de carbono que utilizan electroforesis capilar. Sin embargo, con el fin de mejorar las separaciones y facilitar el análisis de azúcares se desarrolló una técnica de HPLC que utiliza resinas básicas y eluyentes de alto pH (1-4) (Hardy et al., 1988). La separación se basa en la pequeña acidez que presentan los hidratos de carbono (Frahn et al., 1959) y se combina con un detector de pulso amperométrico que no requiere derivatizaciones y que permite la detección de los azúcares en el orden de pico y nanomoles (Rockin et al., 1983). Así en la figura 1 se observa una separación de monosacáridos y en la figura 2, la separación de oligosacáridos obtenidos por hidrólisis enzimática de fetuina. Nótese que aún dentro de cada grupo de oligosacáridos mono, di, tri y tetrasialilados, se distinguen especies que tienen diferencias solo en los tipos de unión y que se detectan como picos diferentes.Fil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentin

Bordetella bronchiseptica glycosyltransferase core mutants trigger changes in lipid A structure

Bordetella bronchiseptica, known to infect animals and rarely humans, expresses a lipopolysaccharide that plays an essential role in host interactions, being critical for early clearance of the bacteria. On a B. bronchiseptica 9.73 isolate, mutants defective in the expression of genes involved in the biosynthesis of the core region were previously constructed. Herein, a comparative detailed structural analysis of the expressed lipids A by MALDI-TOF mass spectrometry was performed. The Bb3394 LPS defective in a 2-amino-2-deoxy-d-galacturonic acid lateral residue of the core presented a penta-acylated diglucosamine backbone modified with two glucosamine phosphates, similar to the wild-type lipid A. In contrast, BbLP39, resulting in the interruption of the LPS core oligosaccharide synthesis, presented lipid A species consisting in a diglucosamine backbone N-substituted with C14:0(3-O-C12:0) in C-2 and C14:0(3-O-C14:0) in C-2′, O-acylated with C14:0(3-O-C10:0(3-OH) in C-3′ and with a pyrophosphate in C-1. Regarding Bb3398 also presenting a rough LPS, the lipid A is formed by a hexa-acylated diglucosamine backbone carrying one pyrophosphate group in C-1 and one phosphate in C-4′, both substituted with ethanolamine groups. As far as we know, this is the first description of a phosphoethanolamine modification in B. bronchiseptica lipid A. Our results demonstrate that although gene deletions were not directed to the lipid A moiety, each mutant presented different modifications. MALDI-TOF mass spectrometry was an excellent tool to highlight the structural diversity of the lipid A structures biosynthesized during its transit through the periplasm to the final localization in the outer surface of the outer membrane. [Figure not available: see fulltext.].Fil: Casabuono, Adriana Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Sisti, Federico Bernardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Fernández, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Hozbor, Daniela Flavia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentin

Pheromone-induced morphogenesis improves osmoadaptation capacity by activating the HOG MAPK pathway

Environmental and internal conditions expose cells to a multiplicity of stimuli whose consequences are difficult to predict. We investigate the response to mating pheromone of yeast cells adapted to high osmolarity. Events downstream of pheromone binding involve two mitogen-activated protein kinase (MAPK) cascades: the pheromone response (PR) and the cell wall integrity (CWI) response. Although the PR MAPK pathway shares components with a third MAPK pathway, the high osmolarity (HOG) response, each one is normally only activated by its cognate stimulus, a phenomenon called insulation. We found that in cells adapted to high osmolarity, PR activated the HOG pathway in a pheromone- and osmolarity-dependent manner. Activation of HOG by the PR was not due to loss of insulation, but rather a response to a reduction in internal osmolarity, which resulted from an increase in glycerol release caused by the PR. By analyzing single-cell time courses, we found that stimulation of HOG occurred in discrete bursts that coincided with the "shmooing" morphogenetic process. Activation required the polarisome, the CWI MAPK Slt2, and the aquaglyceroporin Fps1. HOG activation resulted in high glycerol turnover, which improved adaptability to rapid changes in osmolarity. Our work shows how a differentiation signal can recruit a second, unrelated sensory pathway to fine-tune yeast response in a complex environment.Fil: Baltanas, Rodrigo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Bush, Alan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Durrieu, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Hohmann, Stefan. University of Gothenburg. Department of Cell and Molecular Biology; SueciaFil: Colman Lerner, Alejandro Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin

Immunostimulation by Lactobacillus kefiri S-layer proteins with distinct glycosylation patterns requires different lectin partners

S-layer (glyco)-proteins (SLPs) form a nanostructured envelope that covers the surface of different prokaryotes and show immunomodulatory activity. Previously, we have demonstrated that the S-layer glycoprotein from probiotic Lactobacillus kefiri CIDCA 8348 (SLP-8348) is recognized by Mincle (macrophage inducible C-type lectin receptor) and its adjuvanticity depends on the integrity of its glycans. However, the glycan´s structure has not been described so far. Herein, we analyze the glycosylation pattern of three SLPs, SLP-8348, SLP-8321, and SLP-5818, and explore how these patterns impacts their recognition by Ctype lectin receptors (CLRs) and the immunomodulatory effect of the L. kefiri SLPs on antigen-presenting cells. HPAEC-PAD performed after β-elimination showed glucose as the major component in the O-glycans of the three SLPs, however, some differences in the length of hexose chains were observed. No N-glycosylation signals were detected in SLP-8348 and SLP-8321, but SLP5818 was observed to have two sites carrying complex N-glycans based on a site-specific analysis and a glycomic workflow of the permethylated glycans. SLP-8348 was previously shown to enhance LPS-induced activation on both RAW264.7 macrophages and murine BMDCs; we now show SLP-8321 and SLP-5818 have a similar effect regardless of the differences in their glycosylation patterns. Studies performed with BMDCs from CLR-deficient mice revealed that the immunostimulatory activity of SLP-8321 depends on its recognition by Mincle, whereas SLP-5818’s effects are dependent on SignR3 (murine ortholog of human DC-SIGN). These findings encourage further investigation of both the potential application of these SLPs as new adjuvants and the protein glycosylation mechanisms in these bacteria.Fil: Malamud, Mariano. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina. University of Veterinary Medicine Hannover; Alemania. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Cavallero, Gustavo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Casabuono, Adriana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Lepenies, Bernd. University of Veterinary Medicine Hannover; AlemaniaFil: Serradell, María de los Ángeles. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Subsede del Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentin

RomA, A Periplasmic Protein Involved in the Synthesis of the Lipopolysaccharide, Tunes Down the Inflammatory Response Triggered by Brucella

Brucellaceae are stealthy pathogens with the ability to survive and replicate in the host in the context of a strong immune response. This capacity relies on several virulence factors that are able to modulate the immune system and in their structural components that have low proinflammatory activities. Lipopolysaccharide (LPS), the main component of the outer membrane, is a central virulence factor of Brucella, and it has been well established that it induces a low inflammatory response. We describe here the identification and characterization of a novel periplasmic protein (RomA) conserved in alpha-proteobacteria, which is involved in the homeostasis of the outer membrane. A mutant in this gene showed several phenotypes, such as membrane defects, altered LPS composition, reduced adhesion, and increased virulence and inflammation. We show that RomA is involved in the synthesis of LPS, probably coordinating part of the biosynthetic complex in the periplasm. Its absence alters the normal synthesis of this macromolecule and affects the homeostasis of the outer membrane, resulting in a strain with a hyperinflammatory phenotype. Our results suggest that the proper synthesis of LPS is central to maximize virulence and minimize inflammation.Fil: Valguarnera, Pablo Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Spera, Juan Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Czibener, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Fulgenzi, Fabiana Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Casabuono, Adriana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Altabe, Silvia Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Pasquevich, Karina Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Guaimas, Francisco Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Cassataro, Juliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Ugalde, Juan Esteban. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

A rhomboid protease gene deletion affects a novel oligosaccharide N-linked to the S-layer glycoprotein of Haloferax volcanii

Rhomboid proteases occur in all domains of life; however, their physiological role is not completely understood, and nothing is known of the biology of these enzymes in Archaea. One of the two rhomboid homologs of Haloferax volcanii (RhoII) is fused to a zinc finger domain. Chromosomal deletion of rhoII was successful, indicating that this gene is not essential for this organism; however, the mutant strain (MIG1) showed reduced motility and increased sensitivity to novobiocin. Membrane preparations of MIG1 were enriched in two glycoproteins, identified as the S-layer glycoprotein and an ABC transporter component. The H. volcanii S-layer glycoprotein has been extensively used as a model to study haloarchaeal protein N-glycosylation. HPLC analysis of oligosaccharides released from the S-layer glycoprotein after PNGase treatment revealed that MIG1 was enriched in species with lower retention times than those derived from the parent strain. Mass spectrometry analysis showed that the wild type glycoprotein released a novel oligosaccharide species corresponding to GlcNAc-GlcNAc(Hex)2-(SQ-Hex)6 in contrast to the mutant protein, which contained the shorter form GlcNAc2(Hex)2-SQ-Hex-SQ. A glycoproteomics approach of the wild type glycopeptide fraction revealed Asn-732 peptide fragments linked to the sulfoquinovose-containing oligosaccharide. This work describes a novel N-linked oligosaccharide containing a repeating SQ-Hex unit bound to Asn-732 of the H. volcanii S-layer glycoprotein, a position that had not been reported as glycosylated. Furthermore, this study provides the first insight on the biological role of rhomboid proteases in Archaea, suggesting a link between protein glycosylation and this protease family.Fil: Parente, Juliana Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Casabuono, Adriana Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Ferrari, María Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Paggi, Roberto Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: de Castro, Rosana Esther. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Gimenez, Maria Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Mar del Plata. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones Biológicas; Argentin

Input of NAcGlc6SO3 epitopes (sulfotopes) present in Trypanosoma cruzi glycoproteins, and their specific antibodies, in the infection and immune pathogenesis of experimental Chagas disease

Background: Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease contains a major antigen, cruzipain (Cz). The C-terminal domain (C-T) of this glycoprotein bears N-linked high mannose type sulfated oligosaccharide chains and is responsible for most antibodiesinnaturalandexperimentalinfections.Miceimmunization with C-T has shown that sulfate moieties of Cz molecule are targets for specific immune responses and responsible for cardiac ultrastructural abnormalities in absence of infection. Methods & Materials: After the molecular characterization of these sufotopes, BALB/c mice were immunized with Cz/C-T, prior and after desulfation treatment, and with NAcGlc6SO3-BSA, to be furthersublethallychallengedwithtrypomastigotestoinvestigate whether they are involved in immunepathogenesis and/or infection of experimental Chagas disease. Results: C-T-immunized mice showed low IL-4 levels and elevated IFN- concentration by capture ELISA using C-T as stimulus and a cytokines profile compatible with a mixed response showing: Th2 tendency with excessively high IFN and raised IL-17 levels. By contrast, dC-T-immunized-mice presented undetectable IL-4 levels, low IFN- level and a cytokines profile like that of control but with a significantly elevated IL-10 value. In addition, ultrastructuralcardiacalterationsandmainimmunorecognitionof fibrils and mitochondria were observed in C-T-immunized mice bothconfrontedwithpolyclonalanti-CzandmyosinadsorbedantiCz sera. After sublethal challenge, elevated parasitaemias were observed. Mortality was 20 and 80% in C-T and dC-T immunized mice, respectively and mice from dC-T group that survived presentedseveremusclealterations.BSA-NAcGlc6SO3-immunized mice mounted a predominant IgG1and IgG2b immune response followed by IgG2a, demonstrating the immunodominance of the sulfotope and a vigorous mice memory T cells response, similarly toC-T-immunizedmice.Aftersublethalinfection,miceimmunized with the sulfotope displayed excessively elevated parasitemias, similarIFN-levelsandsignificantlowermortalitypercentagethan those from BSA-NAcGlc control group. Furthermore, mice treated by passive transference of sulfate-specific IgGs purified from sera of BSA-NAcGlc6SO3-immunized mice, exhibited ultrastructural alterations in cardiac tissue. After challenge, those treated with sulfate-specific IgGs presented higher parasitemias than controls Conclusion:Altogether,thesefindingshavedemonstratedthat sulfotopes and their specific antibodies display a dual role, participating in the host-tissue immunopathogenicity of experimental Chagas disease and favoring the infection by T. cruziFil: Soprano, Luciana Lía. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ferrero, Maximiliano Ruben. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Olgiati, María Laura. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Landoni, Malena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Garcia, Gabriela Andrea. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Esteva, Mónica Inés. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Duschak, Vilma Gladys. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina18th International Congress of Infectious diseasesBuenos AiresArgentinaInternational Society of Infectious Disease

Strawberry fatty acyl glycosides enhance disease protection, have antibiotic activity and stimulate plant growth

An increasing interest in the development of products of natural origin for crop disease and pest control has emerged in the last decade. Here we introduce a new family of strawberry acyl glycosides (SAGs) formed by a trisaccharide (GalNAc-GalNAc-Glc) and a monounsaturated fatty acid of 6 to 12 carbon atoms linked to the glucose unit. Application of SAGs to Arabidopsis thaliana (hereafter Arabidopsis) plants triggered a transient oxidative burst, callose deposition and defense gene expression, accompanied by increased protection against two phytopathogens, Pseudomonas viridiflava and Botrytis cinerea. SAGs-induced disease protection was also demonstrated in soybean infected with the causal agent of target spot, Corynespora cassiicola. SAGs were shown to exhibit important antimicrobial activity against a wide-range of bacterial and fungal phytopathogens, most probably through membrane destabilization, and the potential use of SAGs as a biofungicide for postharvest disease protection was demonstrated on lemon fruits infected with Penicillium digitatum. Plant growth promotion by application of SAGs was shown by augmented primary root elongation, secondary roots development and increased siliques formation in Arabidopsis, whereas a significant increment in number of seed pods was demonstrated in soybean. Stimulation of radicle development and the induction of an auxin-responsive reporter system (DR5::GUS) in transgenic Arabidopsis plants, suggested that SAGs-stimulated growth at least partly acts through the auxin response pathway. These results indicate that strawberry fatty acid glycosides are promising candidates for the development of environmental-friendly products for disease management in soybean and lemon.Fil: Grellet Bournonville, Carlos Froilan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Filippone, María Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Di Peto, Pía de Los Ángeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Trejo, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Mamaní de Marchese, Alicia. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Agronomía y Zootecnia; ArgentinaFil: Diaz Ricci, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet Noa Sur. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Grupo de Investigación y Desarrollo del Noroeste Argentino | Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Grupo de Investigación y Desarrollo del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Welin, Björn. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Castagnaro, Atilio Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino. Provincia de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial "Obispo Colombres" (p). Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; Argentin

In depth N-glycoproteomics shows glyco-features of chicken egg white

Chicken egg white proteins have been studied using proteomic approaches. Some glycomic studies of isolated egg white proteins and of the complex egg white have been reported. However, no detailed glycoproteomic studies on the whole egg white have been performed so far to simultaneously characterize the modified peptides along with their glycan moieties. In this study, using a nanoHPLC-ESI-Orbitrap-HCD analysis, glycoproteins from chicken egg white were studied in a single experiment using a three-step workflow. Using this glycoproteomic approach, 19 glycoproteins were characterized. Among them, glycosylation sites and their linked glycan structures in 6 low abundance proteins (heat shock cognate 71 kDa protein, vimentin (fragment), E1BY93 uncharacterized protein, transforming growth factor beta-2 proprotein, ITA6_CHICK integrin alpha-6 and VIT2_CHICK vitellogenin-2) were obtained. Chicken egg white is an easily available source of high quality proteins in the human diet. However, there are reports describing protein-induced allerginicity associated with egg consumption probably due to glycosylated proteins. This new characterization will be useful for the development of appropriate processing methods to decrease the adverse health effects of glycoproteins and expand egg white nutraceutical applications.Fil: Cavallero, Gustavo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Landoni, Malena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentin

UV-MALDI Mass Spectrometry Analysis of NBD-Glycosphingolipids Without an External Matrix

Each day, advances in the instrumentation and operating protocols bring new applications and insights into the molecular processes of ultra violet-matrix assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry (UV-MALDI MS), increasing its potential use. We report here an approach in which mass spectrometry analysis of sphingolipids has been performed using a fluorescent tag (nitrobenz-2-oxa-1, 3-diazole, NBD) covalently linked to the sphingoid base as matrix. Thus, different labeled-sphingolipids were analyzed: ceramide, dihydroceramide, acetylceramide, glucosylceramide, galactosylceramide, galactosyldihydroceramide. In addition an extract of glycosphingolipids obtained from epimastigote forms of Trypanosoma cruzi metabolically labeled with NBD-ceramide was analyzed. The goal of this work is to show that no matrix needs to be added for the mass spectrometry analysis as the same tag used to label the lipids may generate efficiently analyte ions to obtain high quality signals.Fil: Landoni, Malena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Duschak, Vilma Gladys. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Erra Balsells, Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Couto, Alicia Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentin