Protection efficacy of Argentinian isolates of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis with different genotypes and virulence in a murine model

Paratuberculosis is a chronic disease caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). The disease causes economic losses and, therefore, it is imperative to follow proper control strategies, which should include an effective vaccine. Several strategies have assessed the virulence and immune response of Map strains that could be used as a vaccine. This study evaluates the degree of virulence, immune response, and protection of Argentinian strains of Map with different genotype in a murine model. Four local isolates (Cattle type) with different genotypes (analyzed by MIRU-VNTR and SSRs) were selected and evaluated in a virulence assay in BALB/c mice. This assay allowed us to differentiate virulent and low-virulence Map strains. The less virulent strains (1543/481 and A162) failed to induce a significant production of the proinflammatory cytokine IFNg, whereas the virulent strain 6611 established infection along with a proinflammatory immune response. On the other hand, the virulent strain 1347/498 was efficient in establishing a persistent infection, but failed to promote an important Th1 response compared with 6611 at the evaluated time. We selected the low-virulence strain 1543/498 as a live vaccine and the virulent strain 6611 as a live and inactivated vaccine in a protection assay in mice. Strain 1543/481 failed to protect the animals from challenge, whereas strain 6611, in its live and inactivated form, significantly reduced the CFUs count in the infected mice, although they had different immunological response profiles. The inactivated virulent strain 6611 is a potential vaccine candidate against paratuberculosis to be tested in cattle.Fil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Moyano, Roberto Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Travería, Gabriel Eduardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; ArgentinaFil: Alvarado Pinedo, María Fiorella. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; ArgentinaFil: Mon, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Gravisaco, Maria Jose Federica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Santangelo, María de la Paz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Perfil de resistencia antimicrobiana de Staphylococcus pseudintermedius resistentes a meticilina, aislados de dermatitis canina : Resultados preliminares

Staphylococcus pseudintermediuses es el patógeno oportunista más común en perros, relacionado frecuentemente a piodermias. Los aislamientos S. pseudintermedius resistentes a metilicina (SPRM) están asociados con portación del gen mecA, que codifica una proteína (PBP2a) con baja afinidad por los antibióticos beta- lactámicos. La incidencia de SPRM ha aumentado significativamente en todo el mundo y se ha convertido en un problema importante debido a la resistencia a múltiples fármacos (MDR), además del riesgo potencial de transmisión zoonótica. El objetivo de este estudio fue determinar los perfiles de sensibilidad antimicrobiana y genes de resistencia en SPMR aislados de muestras clínicas de piel de caninos en la región de Área Metropolitana de Buenos Aires (AMBA). Se analizó un total de n=52 estafilococos coagulasa-positivos (ECP) aislados de muestras clínicas de dermatitis canina, obtenidos de un laboratorio dediagnóstico veterinario de la provincia Buenos Aires. Los aislamientos se identificaron por pruebas bioquímicas convencionales y pruebas moleculares mediante la determinación del gen nuc.Trabajo publicado en Cagliada, Maria del Pilar Lilia y Galosi, Cecilia Mónica (comps.). I Congreso de Microbiología Veterinaria. Libro de resúmenes. La Plata: Facultad de Ciencias Veterinarias, 2021.Facultad de Ciencias Veterinaria

Estudio comparativo de la susceptibilidad al estrés ácido, oxidativo y sobrevida en macrófagos en aislamientos de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) es el agente causal de la paratuberculosis. Poco se conoce sobre los factores de virulencia en este patógeno. En un trabajo previo seleccionamos tres cepas, aisladas a partir de bovinos en Argentina, con diferente grado de virulencia en un modelo murino.Trabajo publicado en Cagliada, Maria del Pilar Lilia y Galosi, Cecilia Mónica (comps.). I Congreso de Microbiología Veterinaria. Libro de resúmenes. La Plata: Facultad de Ciencias Veterinarias, 2021.Facultad de Ciencias Veterinaria

Genomic comparison of two strains of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis with contrasting pathogenic phenotype

In a previous study, we evaluated the degree of virulence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) strains isolated from cattle in Argentina in a murine model. This assay allowed us to differentiate between high-virulent MapARG1347 and low-virulent MapARG1543 strains. To corroborate whether the differences in virulence could be attributed to genetic differences between the strains, we performed Whole Genome Sequencing and compared the genomes and gene content between them and determined the differences related to the reference strain MapK10. We found 233 SNPs/INDELS in one or both strains relative to Map K10. The two strains share most of the variations, but we found 15 mutations present in only one of the strains. Considering NS-SNP/INDELS that produced a severe effect in the coding sequence, we focus the analysis on four predicted proteins, putatively related to virulence. Survival of MapARG1347 strain in bMDM was higher than MapARG1543 and was more resistant to acidic pH and H2O2 stresses than MapK10. The genomic differences between the two strains found in genes MAP1203 (a putative peptidoglycan hydrolase), MAP0403 (a putative serine protease) MAP1003c (a member of the PE-PPE family) and MAP4152 (a putative mycofactocin binding protein) could contribute to explain the contrasting phenotype previously observed in mice models.Fil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Fresia, P.. Instituto Pasteur de Montevideo; UruguayFil: Graña, M.. Instituto Pasteur de Montevideo; UruguayFil: Cuerda, Maria Ximena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Nagel, Ariel Gastón. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Alvarado Pinedo, María Fiorella. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Caimi, Karina Cynthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Berná, L.. Instituto Pasteur de Montevideo; UruguayFil: Santangelo, María de la Paz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentin

Pathogenesis of domestic pigs submitted to mycobacterial sensitizations previous to experimental infection with Mycobacterium bovis

Aim of study: To demonstrate the virulence of a Mycobacterium bovis local pig isolate in order to contribute to a better understanding of the pathological and immunological consequences of M. bovis infection in previous sensitized animals. Area of study: Buenos Aires, Argentina Material and methods: One group of ten pigs received two oral doses of killed M. bovis suspension and a comparative intradermal tubercu-lin test (CIT) (multiple sensitized) and then was infected with the M. bovis strain. Another group only received the CIT (single sensitized) and the infective dose. Humoral immune response was followed monthly, and gross pathology, histopathological and bacteriological analysis were performed at necropsy 100 days after infection. Main results: M. bovis oral infection induced lesions and allowed bacterial growth in most of the animals. Previous sensitization with killed M. bovis suspension slightly raised the intensity of the response, as the multiple sensitized group showed higher lesion scores and humoral response. Research highlights: Although the differences in lesion scores were not statistically significant, oral route infection after sensitization can modify the course of infections towards a fast development of lesions with a higher fibrotic component suggestive of increased resistance to infection in the right conditions.Fil: Cuerda, Maria Ximena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gravisaco, María J.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Barandiaran, Soledad. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sevilla, Iker A.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Garrido, Joseba M.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Moyano, Roberto Damian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Juste, Ramón A.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Santangelo, María de la Paz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentin

Protection efficacy of Argentinian isolates of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis with different genotypes and virulence in a murine model

Paratuberculosis is a chronic disease caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis ( Map ). The disease causes economic losses and, therefore, it is imperative to follow proper control strategies, which should include an effective vaccine. Several strategies have assessed the virulence and immune response of Map strains that could be used as a vaccine. This study evaluates the degree of virulence, immune response, and protection of Argentinian strains of Map with different genotype in a murine model. Four local isolates (Cattle type) with different genotypes (analyzed by MIRU-VNTR and SSRs) were selected and evaluated in a virulence assay in BALB/c mice. This assay allowed us to differentiate virulent and low-virulence Map strains. The less virulent strains (1543/481 and A162) failed to induce a significant production of the proinflammatory cytokine IFNg, whereas the virulent strain 6611 established infection along with a proinflammatory immune response. On the other hand, the virulent strain 1347/498 was efficient in establishing a persistent infection, but failed to promote an important Th1 response compared with 6611 at the evaluated time. We selected the low-virulence strain 1543/498 as a live vaccine and the virulent strain 6611 as a live and inactivated vaccine in a protection assay in mice. Strain 1543/481 failed to protect the animals from challenge, whereas strain 6611, in its live and inactivated form, significantly reduced the CFUs count in the infected mice, although they had different immunological response profiles. The inactivated virulent strain 6611 is a potential vaccine candidate against paratuberculosis to be tested in cattle.Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinaria

Development and validation of a Novel ELISA for the specific detection of antibodies against Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis based on a chimeric polyprotein

Bovine paratuberculosis (PTB) is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). The optimization of detection tests specific for MAP is crucial to improve PTB control. In this work, we aimed to develop and validate a diagnostic tool based on an ELISA to specifically detect anti-MAP antibodies from bovine serum samples. For that purpose, we designed a recombinant polyprotein containing four specific antigens from MAP and optimized the ELISA. The validation consisted of the assessment of 10 sera from PTB-infected and healthy bovines with different OD values. The diagnostic performance of the polyprotein-ELISA was evaluated by testing 130 bovine serum samples (47 healthy, 48 MAP-infected, and 35 M. bovis-infected bovines). The ELISA using the polyprotein yielded an area under the ROC curve (AUC) of 0.9912 (95% CI, 0.9758-1.007; P < 0.0001). Moreover, for this ELISA, the cut-off selected from the ROC curve based on the point with a sensitivity of 95.56% (95% CI, 0.8485-0.9946) and specificity of 97.92 (95% CI, 0.8893-0.9995) was 0.3328. Similar results were obtained with an ELISA using the commercial Paratuberculosis Protoplasmatic Antigen (PPA). However, the ELISA with the polyprotein antigen showed a better performance against sera from animals infected with Mycobacterium bovis compared to the ELISA with PPA: lower cross-reactivity (2.85% versus 25.71%). These results demonstrate a very low cross-reactivity of the polyprotein with antibodies present in serum samples from animals infected with M. bovis. The designed polyprotein and the validated ELISA could be very useful for the specific identification of MAP-infected animals in herds.Fil: Moyano, Roberto Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Romero, Magali Andrea. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Alvarado Pinedo, María Fiorella. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; ArgentinaFil: Travería, Gabriel Eduardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Clínica. Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinarias; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Alonso, Maria Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentin

Proteomic study to improve PPD-B reagent used in the diagnosis of bovine tuberculosis: Production of new mixtures enriched with PPD-B antigenic components

La reacción de hipersensibilidad retardada (DTH) producida por la aplicación intradérmica del derivado proteico purificado de una cepa de M. bovis (PPD-B) y la prueba que mide liberación de interferón-gamma (IFN-ϒ) son usadas para el diagnóstico de tuberculosis bovina (TBB). La especificidad de estas pruebas puede verse comprometida si se utiliza PPD-B, debido a reaccionantes positivos por sensibilización con otras micobacterias. En el presente estudio evaluamos dichas pruebas con dos mezclas conteniendo proteínas recombinantes de M. bovis: Mezcla 1 (M1): con ESAT-6, CFP-10 y MPB83; y mezcla 2 (M2): con ESAT-6, CFP-10, MPB83, HspX, TB10:3 y MPB70. Las mezclas M1, M2 y PPD-B aplicadas intradérmicamente en cobayos sensibilizados con M. bovis mostraron respuestas similares. Sin embargo, M1 indujo una reacción significativamente menor que la PPD-B en cobayos sensibilizados con M. avium. En bovinos, utilizando M1 en la prueba de IFN-γ se obtuvo mayor especificidad que con PPD-B o M2, dado que M1 fue mínimamente detectada por animales con paratuberculosis (PTB) o experimentalmente vacunados con BCG. Para optimizar estas mezclas, se obtuvieron diferentes fracciones de las PPD-B identificándose 7 proteínas en aquellas fracciones más inmunogénicas: MPB70, MPB83, CFP10, CFP2, FixB, PepA y HspX. Al utilizar M1 con FixB en la prueba de IFN-γ aumentó el reconocimiento de animales en un rodeo con TBB, sin reaccionar animales de un rodeo con PTB. Nuestros resultados demuestran que esta nueva mezcla antigénica es detectada específicamente por animales con TBB, mientras que el reactivo PPD-B fue detectado por animales infectados con otras micobacterias.The delayed type hypersensitivity skin test (DTH) and the interferon-gamma (IFN-γ) assay are used for the diagnosis of bovine tuberculosis (TBB). However, the specificity of these tests is compromised because both are based on the response against purified protein derivative of Mycobacterium bovis (PPD-B). In the current study, we assessed the potential of two cocktails with M. bovis recombinant proteins: Cocktail 1 (C1) contained ESAT-6, CFP-10 and MPB83, and cocktail 2 (C2) with ESAT-6, CFP-10, MPB83, HspX, TB10:3 and MPB70. C1, C2 and PPD-B showed similar response by DTH in M. bovis-sensitized guinea pigs. Importantly, C1 induced a significantly lower response than PPD-B in M. avium-sensitized guinea pigs. In cattle, C1 had better performance diagnostic than PPD-B and even than C2 by IFN-γ assay; indeed, C1 detected animals with TBB, with the least detection of animals either vaccinated with BCG or with paratuberculosis. For an optimization of the cocktails, we obtained different protein fractions of PPD-B and tested them in experimentally M. bovis-infected cattle. In a fraction highly reactive seven proteins were identified: MPB70, MPB83, CFP10, CFP2, FixB, PepA and HspX. The inclusion of FixB in C1 enhanced the recognition of naturally M. bovis-infected cattle by IFN-γ assay without compromising specificity. Our data provide a promising basis for the future development of a cocktail for detection of TBB without interference by the presence of animals sensitized or infected with other mycobacteria.Fil: Mon, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Moyano, Roberto Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Viale, Mariana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Norte. Estación Experimental Agropecuaria Delta del Paraná; ArgentinaFil: Gamietea, Ignacio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Alonso, Bernardo. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Santangelo, María de la Paz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Characterization of a Mycobacterium avium subsp. avium Operon Associated with Virulence and Drug Detoxification

The lprG-p55 operon of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis is involved in the transport of toxic compounds. P55 is an efflux pump that provides resistance to several drugs, while LprG is a lipoprotein that modulates the host's immune response against mycobacteria. The knockout mutation of this operon severely reduces the replication of both mycobacterial species during infection in mice and increases susceptibility to toxic compounds. In order to gain insight into the function of LprG in the Mycobacterium avium complex, in this study, we assayed the effect of the deletion of lprG gene in the D4ER strain of Mycobacterium avium subsp. avium. The replacement of lprG gene with a hygromycin cassette caused a polar effect on the expression of p55. Also, a twofold decrease in ethidium bromide susceptibility was observed and the resistance to the antibiotics rifampicin, amikacin, linezolid, and rifabutin was impaired in the mutant strain. In addition, the mutation decreased the virulence of the bacteria in macrophages in vitro and in a mice model in vivo. These findings clearly indicate that functional LprG and P55 are necessary for the correct transport of toxic compounds and for the survival of MAA in vitro and in vivo