Stability of Citrus tristeza virus protective isolates in field conditions

O objetivo deste trabalho foi monitorar a manutenção da estabilidade de isolados protetores contra Citrus tristeza virus (CTV) em clones selecionados de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis) pré-imunizados ou infectados naturalmente pelo vírus, após sucessivas propagações clonais. O trabalho foi realizado em condições de campo, no norte do Estado do Paraná. A análise do gene da capa protéica (GPC) de 33 isolados, coletados de 16 clones de laranjeira 'Pêra', foi realizada com o uso da técnica polimorfismo conformacional da fita simples (SSCP). Inicialmente, os isolados foram caracterizados por meio de sintomas de caneluras observados nos clones. Em seguida, o genoma viral foi extraído e utilizado como molde para a amplificação do GCP com uso da transcrição reversa da reação em cadeia da polimerase (RTPCR). Os perfis eletroforéticos dos produtos da RTPCR foram analisados alterações nos perfis dos isolados de CTV. Contudo, a estabilidade dos complexos protetores foi mantida, com exceção dos isolados presentes em dois dos clones analisados. Foi observada baixa variabilidade genética nos isolados durante os anos avaliados.The objective of this work was to monitor the maintenance of Citrus tristeza virus (CTV) protective isolates stability in selected clones of 'Pêra' sweet orange (Citrus sinensis), preimmunized or naturally infected by the virus, after successive clonal propagations. The work was carried out in field conditions in the north of Paraná State, Brazil. Coat protein gene (CPG) analysis of 33 isolates collected from 16 clones of 'Pêra' sweet orange was performed using single strand conformational polymorphism (SSCP). Initially, the isolates were characterized by symptoms of stem pitting observed in clones. Then viral genome was extracted and used as template for the amplification of CPG by reverse transcription polimerase chain reaction (RTPCR). RTPCR products electrophoretic profiles were analyzed using the Jaccard coefficient and the UPGMA method. The majority of the clones had weak to moderate stem pitting symptoms and its CTV isolates showed alterations in the SSCP profiles. However, the stability of the protective complex has been maintained, except for isolates from two analised clones. Low genetic variability was observed within the isolates during the studied years

Stability of Citrus tristeza virus protective isolates in field conditions

O objetivo deste trabalho foi monitorar a manutenção da estabilidade de isolados protetores contra Citrus tristeza virus (CTV) em clones selecionados de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis) pré-imunizados ou infectados naturalmente pelo vírus, após sucessivas propagações clonais. O trabalho foi realizado em condições de campo, no norte do Estado do Paraná. A análise do gene da capa protéica (GPC) de 33 isolados, coletados de 16 clones de laranjeira 'Pêra', foi realizada com o uso da técnica polimorfismo conformacional da fita simples (SSCP). Inicialmente, os isolados foram caracterizados por meio de sintomas de caneluras observados nos clones. Em seguida, o genoma viral foi extraído e utilizado como molde para a amplificação do GCP com uso da transcrição reversa da reação em cadeia da polimerase (RTPCR). Os perfis eletroforéticos dos produtos da RTPCR foram analisados alterações nos perfis dos isolados de CTV. Contudo, a estabilidade dos complexos protetores foi mantida, com exceção dos isolados presentes em dois dos clones analisados. Foi observada baixa variabilidade genética nos isolados durante os anos avaliados.The objective of this work was to monitor the maintenance of Citrus tristeza virus (CTV) protective isolates stability in selected clones of 'Pêra' sweet orange (Citrus sinensis), preimmunized or naturally infected by the virus, after successive clonal propagations. The work was carried out in field conditions in the north of Paraná State, Brazil. Coat protein gene (CPG) analysis of 33 isolates collected from 16 clones of 'Pêra' sweet orange was performed using single strand conformational polymorphism (SSCP). Initially, the isolates were characterized by symptoms of stem pitting observed in clones. Then viral genome was extracted and used as template for the amplification of CPG by reverse transcription polimerase chain reaction (RTPCR). RTPCR products electrophoretic profiles were analyzed using the Jaccard coefficient and the UPGMA method. The majority of the clones had weak to moderate stem pitting symptoms and its CTV isolates showed alterations in the SSCP profiles. However, the stability of the protective complex has been maintained, except for isolates from two analised clones. Low genetic variability was observed within the isolates during the studied years

Capacidade protetiva de novos isolados fracos de Citrus tristeza virus para utilização em programa de pré-imunização de laranja 'Pêra'

For the control of the damages induced by the Citrus tristeza virus (CTV), it was adopted the use of tolerant rootstock and the pre-immunization, which uses mild CTV isolates to protect against subsequent infections with severe isolates. Studies have demonstrated that selected mild isolates in the region of orchard are superior in their protective characteristics. In this perspective, 20 plants of elite 'Pêra' sweet orange, which have been standing out for their production and development were selected in the North and Northwest regions of the State of Paraná and subjected to the biological indexation and molecular tests for detection of virus, viroides and bacteria, responsible for the diseases in citrus. The protective value of the isolates of CTV of those plants was determined, in a first stage, through the molecular characterization by the RFLP analyses (restriction fragment length polymorphism) and SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) of the gene of the capsid protein, establishing comparisons between mild and severe isolates. In the next stage, those isolates potentially mild and protective, were subjected to challenge tests with the inoculation of severe isolate 'Rolândia' through the union of tissues (grafting) or through the vector 'Brown citrus aphid' (Toxoptera citricida Kirkaldy). The results showed that the selected plants presented potential to be used in pre-immunization programs, and biological indexation and the molecular characterization through RFLP and SSCP of the gene of the capsid protein indicated the presence of mild isolates of the virus. Among those isolates, some stood out, showing a better protective value, front to the challenge with the severe isolate, evidenced by SSCP analysis of the plants kept in greenhouse. The molecular analysis SSCP showed to be an excellent complementary tool to experiments of field performance, in order to monitor the stability of the viral complex presented in the plants. The evaluation of isolates through the SSCP analysis and in field experiment, showed the isolate number 1, collected in the Cruzeiro do Sul County (CS-1) as the most promising isolate to the protection of 'Pera' sweet orange on commercial orchards located in northern and northwestern of Paraná. The severe isolate of the CTV called Rolândia, showed itself stable and with high genetic divergence among the others severe isolates used (Capão Bonito and Barão B), as well as all the isolates tested.Para o controle dos danos induzidos pelo vírus da tristeza dos citros, adotou-se o uso de porta-enxertos tolerante e a pré-imunização, que utiliza isolados fracos do Citrus Tristeza Virus (CTV) para proteger contra infecções posteriores com isolados severos. Estudos demonstram que isolados fracos selecionados na região de implantação do pomar são superiores em suas características protetivas. Nessa perspectiva, 20 plantas de laranja elite da variedade 'Pêra', que se destacavam das demais pela produção e desenvolvimento, foram selecionadas nas regiões Norte e Noroeste do Estado do Paraná e submetidas à indexação biológica e testes moleculares para detecção de vírus, viróides e bactérias, causadores de doenças em citros. O valor protetivo dos isolados de CTV dessas plantas foi determinado, em uma primeira etapa, por meio da caracterização molecular pelas análises RFLP (restriction fragment length polymorphism) e SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) do gene da proteína do capsídeo, estabelecendo comparações com isolados fracos e severos conhecidos. Na etapa seguinte, esses isolados potencialmente fracos e protetivos foram submetidos a testes de desafio com a inoculação de isolado severo 'Rolândia' por meio da união de tecido (enxertia) ou pelo vetor 'Pulgão Preto dos Citros' (Toxoptera citricida Kirkaldy). Os resultados mostraram que as plantas selecionadas apresentavam potencial para serem utilizadas em programas de pré-imunização, visto que a indexação biológica e a caracterização molecular através de RFLP e SSCP do gene da capa protéica indicaram a presença de isolados fracos do vírus da tristeza. Dentre esses, alguns isolados se destacavam mostrando um melhor valor protetivo frente ao desafio com isolados severos, evidenciado pela análise SSCP das plantas desafiadas e mantidas em estufa. A análise molecular SSCP mostrou ser uma excelente ferramenta complementar a experimentos de desempenho a campo para se monitorar a estabilidade do complexo viral presente nas plantas. A avaliação dos isolados através da análise SSCP e em experimento a campo apontou o isolado número 1, coletado no Município de Cruzeiro do Sul (CS-1), como o isolado mais promissor e que pode oferecer melhor proteção a plantas de laranja 'Pêra' em pomares comerciais implantados no Norte e Noroeste do Paraná. O isolado severo do CTV, denominado Rolândia, mostrou-se estável e com alta divergência genética em relação aos demais isolados severos utilizados (Capão Bonito e Barão B) e a todos os isolados testados.xi, 117

Utilização da levedura de recuperação (<em>Saccharomyces</em> sp.), seca por rolo rotativo ou por <em>spray-dry</em>, na alimentação de leitões na fase inicial Use of rotative-roll-dried or spray dried sugar cane yeast in the feeding of piglets in the initial phase

Um experimento foi conduzido utilizando, 144 leitões, mestiços, machos e fêmeas, na fase inicial dos 48 a 69 dias de idade, peso inicial de 15,9kg, com o objetivo de se avaliar nutricional e economicamente a levedura de recuperação (<em>Saccharomyces</em> sp.), seca por <em>spray-dry</em> (LRSD) e por rolo rotativo (LRRR). O delineamento experimental foi o de blocos ao acaso, com quatro tratamentos em esquema fatorial 2x2, com dois níveis de levedura em rações fareladas (7 e 14%) e dois processos de secagem da levedura (LRSD ou LRRR), com quatro repetições e nove animais por unidade experimental. Não foram observados efeitos da inclusão da levedura às rações sobre o consumo diário de ração e ganho diário de peso; entretanto, o nível de 7% de inclusão proporcionou melhora na conversão alimentar e redução no custo em ração por quilograma de peso vivo ganho. O processo de secagem reduziu o custo em ração por quilograma de peso vivo ganho quando os leitões consumiam rações contendo LRRR. O nível de 7% de inclusão de levedura às rações proporcionou redução no consumo por quilograma de peso vivo ganho de energia digestível, lisina e metionina+cistina, independentemente do processo de secagem.<br>A trial was undertaken using 144 male and female half-breed piglets (15.9 kg), with the objective to evaluate nutritionally and economically sugar cane yeast (Saccharomyces sp.), dried by spray-dryer (SCYSD) or by rotative roll dryer (SCYRD). The experimental design was of randomized blocks, with four treatments, in a 2x2 factorial scheme, using two inclusion levels of yeast in meal diets (7 and 14%) and two yeast drying processes (SCYSD or SCYRD), with four replications and nine animals per experimental unit. There were no effects of yeast inclusion in diets on feed intake and daily weight gain, nevertheless the 7% inclusion level provided an improvement in feed conversion and reduction in diet cost per kilogram of live weight gain. The drying process reduced the diet cost per kilogram of live weight gain when the piglets consumed diets containing SCYRD. The 7% inclusion level of yeast in diets provided a decrease in intake per kilogram of live weight gain of digestible energy, lysine and methionine+cystine

Evaluation of the protective capacity of new mild Citrus tristeza virus (CTV) isolates selected for a preimmunization program

The use of tolerant rootstocks and preimmunization has satisfactorily controlled losses associated with the Citrus tristeza virus (CTV). Several researchers have shown that CTV mild isolates that are selected in the same region where they are used are superior to isolates obtained from other areas. Thus, budwoods of 20 outstanding citrus trees were collected in north and northwestern Paraná state (Brazil) citrus-producing areas and established to be used in a preimmunization program. These budwoods were tested to evaluate the potential protection of the inherently present viral complex. Based on biological indexing and molecular characterization of the capsid protein gene by RFLP (restriction fragment length polymorphism, which indicated that the plants were infected with mild isolates of CTV), some of the selected plants could be used in a preimmunization program. These potentially mild and protective isolates were challenged with severe 'Rolândia' isolate inoculations by grafting and by the brown citrus aphid (Toxoptera citricida Kirkaldy) vector, which was faster in transmitting the virus. Some isolates had a better protective value than others, particularly when challenged with the severe CTV isolate. The SSCP (single strand conformational polymorphism) molecular analysis was an excellent complementary tool for monitoring the performance of the experiments and the stability of the viral complex present in the plants. Isolate number 1, collected in the municipality of Cruzeiro do Sul (CS-1), was the most promising for protecting commercial Pêra sweet orange (C. sinensis L.) orchards in northern and northwestern Paraná. The Rolândia severe CTV isolate was stable and had a high genetic divergence among the severe isolates used as a control (Capão Bonito and Barão B) and all of the isolates tested

Incidência de Dilobopterus costalimai Young e Acrogonia citrina Marucci & Cavichioli, em pomares cítricos no noroeste paranaense = Incidence of Dilobopterus costalimai Young and Acrogonia citrina Marucci & Cavichioli, in citrus orchards in Northwestern Paraná

As cigarrinhas das famílias Cicadellidae e Cercopidae são vetores da bactéria Xylella fastidiosa Wells, causadora da Clorose variegada dos citros. Esta doença traz sérios prejuízos à lavoura de citros no Noroeste Paranaense, e é estudada no Brasil desde 1987, quando foi descoberta pela primeira vez na região de Colina, São Paulo. Os vetores transmitem a X. fastidiosa quando se alimentam sugando a seiva do xilema, local onde a bactéria se instala, obstruindo a passagem da seiva. Este trabalho teve o objetivo de avaliar aocorrência das cigarrinhas vetoras Dilobopterus costalimai e Acrogonia citrina em pomar comercial de citros. O experimento foi realizado no sítio “Laranjeiras I”, município de Nova Esperança, região noroeste do Paraná, no período de julho de 2004 a agosto de 2006. Foram feitas amostragens mensais, por meio de armadilhas adesivas amarelas (Biocontrole®), nas variedades de laranjeiras [Citrus sinensis (L.) Osbeck] Folha Murcha, Valência, Pêra e Natal.Nas variedades Pêra e Valência, a cigarrinha mais capturada foi Dilobopterus costalimai. Os meses de maior ocorrência das espécies foram entre dezembro e maio de cada ano.The sharpshooters of the families Cicadellidae and Cercopidae are vectors of Xylella fastidiosa (Wells), which causes citrus variegated chlorosis. This disease causes severe damage to the Paraná citrus industry, and it has been studied in Brazil since 1987, when it was discovered for the first time in the area of Colina, SP. The vectors transmit X. fastidiosa when they feed on the xylem sap, where the bacteria settles, obstructing the passage of the sap. This workhad the objective of evaluating the occurrence of the vector sharpshooter Dilobopterus costalimai and Acrogonia citrina in a commercial citrus orchard during the period between July 2004 and August 2006. The experiment was accomplished in the Laranjeiras I farm, in the city of Nova Esperança, northwestern Paraná. The collections were undertaken monthly, and yellow stick traps (Biocontrole®) was used as a sampling method in Folha murcha,Valência, Pêra and Natal oranges trees [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. In Pêra and Valência trees, the most often captured sharpshooter was Dilobopterus costalimai. The months of higher occurrence of these species were between December and May of each year