Caracterisatgion de deux antigenes conserves de Babesia divergens et analyse moleculaire d'une nouvelle proteine de Rhoptrie de Plasmodium falciparum identifiee par reaction immunologique croisee

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Un ARN double brin extrachromosomique influençant la virulence de Babesia canis ?

Les génomes extrachromosomiques ARN double brin d'origine virale sont retrouvés chez un grand nombre de levures, champignons filamenteux et protozoaires parasites. Actuellement, s'il apparaît de façon claire que ces génomes peuvent avoir une fonction critique dans la virulence des champignons et dans les pathologies fungiques induites, leur rôle précis dans la relation hôte- parasite au sein des protozoaires reste largement inconnu. Nous avons caractérisé un ADNc dérivant d'un ARN double brin retrouvé chez Babesia canis, un hémoprotozoaire responsable de la babésiose canine. Cet ADNc de 1135 pb contient 2 cadres de lecture ouvert chevauchants (ORFI :nt75-496 et ORF2 : nt433-930). La protéine BcVir15(M1-I141) codée par l'ORFI est le produit d'expression majeur de cet ADNc. Cependant, l'utilisation d'un système d'expression in vitro a permis de montrer qu'une protéine mineure appelée BcVir32 (M1-C285) correspondant à la fusion des produits dérivés de l'ORF1 et l'ORF2 pouvait être exprimée par un mécanisme de recodage traductionnel +1. La caractérisation moléculaire des éléments génétiques portant cette fréquence d'ADNc au sein du parasite a montré que ce dernier dérive d'un ARNm de 1200 pb mais qu'il ne présente pas de copie dans le génome ADN parasitaire. Nous avons donc démontré par hybridation qu'il dérive d'un ARN double brin de 1200 pb mais qu'il est également présent sur un ARN double brin de 2800 pb. Les protéines BCVIR15 et BcVir32 codées par cet ADNc ne présentent aucune homologie avec des protéines connues. L'analyse de leur fréquence protéique a permis d'identifier un hexapeptide consensus LPGTGA ( résidus 53-58 ) présent dans de nombreux facteurs de virulence bactériens et viraux. De plus, les 2 protéines sont hautement basiques et la partie C-Terminale de BcVir32 est riche en résidus cystéines. L'ensemble de ces analyses indiquent que BcVir15 et BcVir32 pourraient être des protéines d'interaction soit aux acides nucléiques soit à d'autres protéines. Les études biochimiques ont montré que la protéine BcVir15 reste strictement confinée dans le cytoplasme des mérozoïtes de B. canis alors que la protéine BcVir32 pourrait être exportée vers la membrane de l'hématie parasitée. De façon intéressante, des sérums dirigés contre ces protéines sont capables d'inhiber la croissance in vitro de B.canis suggérant ainsi que BcVir15 et/ou BcVir32 pourraient avoir une fonction dans la capacité du parasite à s'établir dans cette cellule hôte érythrocytaire et donc qu'elles pourraient avoir une influence sur sa virulence.MONTPELLIER-BU Pharmacie (341722105) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Analyse chromosomique du génome de Babesia (B. canis, B. divergens, B. microti)

Le génome des Babesia, hémoprotozoaires parasites du phylum des Apicomplexa, étant largement méconnu, nous avons effectué une approche chromosomique par PFGE, suivie d'expériences d'hybridation moléculaire du génome de l'espèce canine B. canis mondialement répandue, de l'espèce bovine européenne B. divergens et de l'espèce murine B. microti (Theileria microti), principal agent de la babéiose humaine aux U.S.A.. L'utilisation d'une sonde télomérique dérivée du génome de Plasmodium berghei et de sondes spécifiques du ge nome des espèces étudiées, a permis de déterminer la taille du génome, le nombre de chromosomes et d'analyser le polymorphisme caryotypique de chacune d'elles. Ainsi, l'étude du génome de B. divergens, à travers 7 isolats des deux sous-espèces canines les plus pathogènes i.e. B. canis canis (Europe) et B. canis rossi (Afrique du sud), a mis en évidence 5 chromosomes pour un génome estimé à 14,5 Mpb et 16 Mpb, respectivement. Toutefois, l'analyse comparée de l'organisation télomérique possible et du contenu génique de ces deux sous-espèces a montré qu'il existait autant de différences entre celles-ci qu'entre chacune d'elles et l'espèce B. divergens. Le génome de B. microti estimé à 6,5 Mpb pour 4 chromosomes, apparaît quant à lui comme le plus petit génome de Babesia décrit. Enfin, cette analyse chromosomique a permis de démontrer que les gènes Bd37 sont localisés sur le chromosome 2 de B. divergens, tandis que ceux de la famille Bc3.1 seraient localisés sur les 5 chromosomes de B. canis. L'analyse du polymorphisme des deux membres de la famille Bc3.1 indique un polymorphisme important entre les extrémités 3' des deux copies et une grande conservation de ces deux copies entre isolats géographiquement distants.MONTPELLIER-BU Pharmacie (341722105) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Babesia Occurrence in Rodents in Relation to Landscapes of Mainland Southeast Asia

International audienc

First molecular diagnosis of Babesia vogeli in domestic dogs from Turkey

Microscopic examination of Giemsa-stained peripheral blood smears collected from three naturally infected dogs originating from Turkey revealed the presence of large (around 4.5-5.0 mu m) intraerythrocytic Babesia parasites in all dogs. DNA was extracted from the three infected blood samples and an around 410 bp portion of the 18 S rDNA gene of Babesia species was PCR amplified for subsequent molecular characterization. RFLP analysis of the PCR products suggested the presence of the species B. vogeli in all infected dogs and sequencing of the PCR products from two of the three samples revealed 100% identity among the two Turkish isolates. Comparisons with the equivalent 4 10 bp portions of the 18 S rDNA gene of Babesia species confirmed the affiliation of these isolates to the B. vogeli species. This is the first report and molecular characterization of dog infection with a large Babesia species in Turkey. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved

Immunogenicity and antigenicity of a Plasmodium falciparum protein fraction (90–110 kDa) able to protect squirrel monkeys against asexual blood stages

International audienceA monkey vaccination trial using a Plasmodium falciparum protein fraction containing antigens of 90-110 kDa is reported. The fraction was obtained by electroelution from preparative polyacrylamide gels. Three monkeys out of five resisted a heavy challenge dose of highly virulent parasites. Using specific antisera, several components of the fraction were identified, namely heat shock protein 90 (hsp90), Ag44/RhopH3, ABRA, 96tR/GBP130 and Pf96 protease. The fraction did not contain KAHRP, nor the SERP antigen. The antibody response of the monkeys was studied on these individual antigens purified by preparative immunoprecipitation. Surprisingly, hsp90 was found in the immunoprecipitates obtained with SERP antisera. Interestingly, the response to hsp90 correlated with protection, high antibody titres being found only in the protected monkeys. In contrast, no correlation with protection could be found for the response to the other antigens

A large multigene family expressed during the erythrocytic schizogony of Plasmodium falciparum

International audienceWe report the identification of a large multigene family of Plasmodium falciparum using a clone isolated with a polyclonal antiserum raised to a Babesia divergens merozoite protein. The recombinant antigen reacted with human sera collected from individuals exposed to malaria. The deduced protein sequence contains a motif homologous to the consensus sequence of merozoite rhoptry proteins encoded by multigene families in several Babesia species. Antibodies raised to the recombinant protein reacted with a 60-kDa merozoite protein both on B. divergens and on P. falciparum immunoblots. The insert hybridized to a large number of fragments on P. falciparum Southern blots and to most chromosomes of the parasite. Specifically, approx. 3-kb RNAs were detected in 4-16-nucleus schizonts. Ten distinct cDNAs were isolated that differed in the size, position and number of restriction sites in the region homologous to the original genomic clone. With about 140 copies per haploid genome, this is the first large multigene family described in malaria parasites. The existence of a multigene family encoding proteins present in the invasive stage of malaria parasites suggests an important role in invasion and denotes a significant potential for generating diversity

Whole genome mapping and re-organization of the nuclear and mitochondrial genomes of Babesia microti isolates.

Babesia microti is the primary causative agent of human babesiosis, an emerging pathogen that causes a malaria-like illness with possible fatal outcome in immunocompromised patients. The genome sequence of the B. microti R1 strain was reported in 2012 and revealed a distinct evolutionary path for this pathogen relative to that of other apicomplexa. Lacking from the first genome assembly and initial molecular analyses was information about the terminal ends of each chromosome, and both the exact number of chromosomes in the nuclear genome and the organization of the mitochondrial genome remained ambiguous. We have now performed various molecular analyses to characterize the nuclear and mitochondrial genomes of the B. microti R1 and Gray strains and generated high-resolution Whole Genome maps. These analyses show that the genome of B. microti consists of four nuclear chromosomes and a linear mitochondrial genome present in four different structural types. Furthermore, Whole Genome mapping allowed resolution of the chromosomal ends, identification of areas of misassembly in the R1 genome, and genomic differences between the R1 and Gray strains, which occur primarily in the telomeric regions. These studies set the stage for a better understanding of the evolution and diversity of this important human pathogen