Facteurs influençant la toxicomanie en milieu carcéral (étude qualitative chez d anciens détenus recrutés en Centres de Soins pour Toxicomanes)

Objectif : La consommation de substances psycho-actives concerne près d un détenu sur trois, pourtant cette population reste mal étudiée. L objectif de cette étude est de définir à partir de témoignages d anciens détenus toxicomanes les facteurs influençant la toxicomanie en milieu carcéral. Méthodes : Etude qualitative par entretiens semi-dirigés réalisée auprès d anciens détenus toxicomanes recrutés dans les centres de soins pour toxicomanes du bassin chambérien. Le recueil et l analyse des résultats ont été effectués par deux enquêteurs. Résultats : 8 anciens détenus toxicomanes recrutés au sein de 2 centres de soins ont participé à la réalisation de cette étude. La synthèse de ces entretiens révèle que la circulation de produits stupéfiants et de traitements psychotropes provenant du trafic ou d une prescription médicale est importante en prison. La facilité d accès aux produits associée à un climat de solitude, de pressions et de violences, sont des éléments qui contribuent au développement d un sentiment d insécurité. La consommation de produits psycho-actifs apparaît dans ce contexte comme un moyen de se soustraire aux difficultés du quotidien. A l inverse, les facteurs tendant à structurer le quotidien des détenus, à créer des repères et favoriser un sentiment de confiance semblent limiter la consommation de produits stupéfiants et orienter le toxicomane vers le soin. Conclusion La modification des comportements addictifs en milieu carcéral requiert une réévaluation des conditions de détention et de prise en charge.Aim: Even though one prisoner out of three is using psychoactive substances, there are few studies on this population. The aim of this study is to define the factors influencing addiction in a prison environment, thanks to the testimonies of former drug using prisoners. Methods: Qualitative survey via semi-conducted interviews of former substance abusing prisoners recruited in two care centres for drug addicts from Chambéry and its surrounding area. The interviews and the results analysis were conducted by two researchers. Results: 8 former prisoners, who used drugs in prison, recruited in 2 care centres for drug addicts, participated in this study. The overview of these interviews shows that the circulation of illegal substances and psychoactive drugs, coming from either traffic or medical prescription, is significant in prison. Ease of access combined with an environment of solitude, pressure and violence are elements contributing to a feeling of insecurity. The consumption of psychoactive drugs appears in that environment as a way to escape the everyday difficulties. Conversely, elements helping to structure the prisoners' daily routine, creating points of reference and promoting trust seem to limit the consumption of illegal substances, and lead drugs users to treatment. Conclusion: In order to modify addictive behaviours in prison, it is necessary to re-evaluate the conditions of detention and the care of drug users.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF

Fonction du variant d’histone H3.3 et de sa chaperonne DAXX sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules pluripotentes

Les génomes des mammifères sont largement composés de séquences ADN répétées. Les régions d’hétérochromatine péricentromérique (PCH) sont formées de nombreuses répétitions de satellites majeurs. Les régions d’ADN répétés sont souvent réprimées par des mécanismes similaires comme la méthylation de l’ADN, la modification H3K9me3 et HP1. Des défauts de l’hétérochromatine sont observés dans différents cancers et contribuent à l’instabilité génomique. Les PCH des différents chromosomes se rassemblent et forment de larges chromocentres. La formation des chromocentres a lieu au cours de l’embryogénèse précoce, un moment où le niveau de méthylation de l’ADN est faible. Cette réorganisation est essentielle pour la poursuite du développement, et pourtant les mécanismes moléculaires la régulant dans les cellules pluripotentes précoces restent inconnus. Ce travail se concentre sur le rôle du variant d’histone H3.3, et de sa chaperonne DAXX, sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules souches embryonnaires (ESC). Premièrement, nous avons observé que la perte de Daxx altérait l’organisation des chromocentres dans les cellules pluripotentes. Les ESC peuvent être converti ver un état naïf de pluripotence, qui présentent une très forte diminution de leur niveau de méthylation de l’ADN. Nous avons découvert que DAXX était essentiel pour la survie des ESC lors de la conversion vers l’état naïf de pluripotence. De plus, nous avons observé que la perte active de la méthylation de l’ADN pouvait générer des dommages à l’ADN aux PCH, ce qui induit une forte accumulation de DAXX. En disséquant le rôle de DAXX, nous avons découvert que l’interaction DAXX-H3.3 était impliquée dans le recrutement de SETDB1 aux chromocentres pour reformer l’hétérochromatine. Enfin, nous avons montré que le rôle de DAXX s’étendait à d’autres régions de l’hétérochromatine tels que les domaines associés à la lamina. Dans l’ensemble, ce travail met en évidence un nouveau rôle DAXX dans le maintien de l’hétérochromatine des cellules pluripotentes.Most of mammalian genomes are composed of DNA repeated elements. Pericentromeric heterochromatin (PCH) regions are formed of large arrays of major satellite repeats. DNA repeats are often silenced via similar mechanisms such as DNA methylation, H3K9me3 modification and HP1. Loss of heterochromatin silencing is commonly observed in different cancers and can lead to genomic instability. PCH of different chromosome can assemble into large DAPI-dense foci called chromocenters. Formation of chromocenter arise during the early embryogenesis when the level of DNA methylation is low. Such reorganization is essential for further development of the embryo, yet, the molecular mechanisms regulating its maintenance in the early pluripotent cells remain unknown. This work focuses on the role of the histone variant H3.3 and its chaperone DAXX in heterochromatin organization in embryonic stem cells (ESCs). Firstly, I observed that the loss of Daxx alters the organization of chromocenters in pluripotent cells. ESCs can be converted toward the ground-state of pluripotency which displays a dramatic loss of DNA methylation. I uncovered that DAXX is essential for proper growth of ESC upon ground-state conversion. Furthermore, I observed that active loss of DNA demethylation can generate DNA damages at PCH, which induces a strong accumulation of DAXX. Dissecting the function of DAXX, I discovered that the DAXX-H3.3 interaction was implicated in the recruitment of SETDB1 at chromocenters to reform the heterochromatin state. Finally, I noticed that the function of DAXX extend beyond pericentromeric heterochromatin. Indeed, the absence of Daxx impairs the proper silencing of different heterochromatin regions including the lamina-associated domains. Altogether, this work provides evidence that DAXX is a regulator of heterochromatin maintenance in pluripotent cells

Fonction du variant d’histone H3.3 et de sa chaperonne DAXX sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules pluripotentes

Most of mammalian genomes are composed of DNA repeated elements. Pericentromeric heterochromatin (PCH) regions are formed of large arrays of major satellite repeats. DNA repeats are often silenced via similar mechanisms such as DNA methylation, H3K9me3 modification and HP1. Loss of heterochromatin silencing is commonly observed in different cancers and can lead to genomic instability. PCH of different chromosome can assemble into large DAPI-dense foci called chromocenters. Formation of chromocenter arise during the early embryogenesis when the level of DNA methylation is low. Such reorganization is essential for further development of the embryo, yet, the molecular mechanisms regulating its maintenance in the early pluripotent cells remain unknown. This work focuses on the role of the histone variant H3.3 and its chaperone DAXX in heterochromatin organization in embryonic stem cells (ESCs). Firstly, I observed that the loss of Daxx alters the organization of chromocenters in pluripotent cells. ESCs can be converted toward the ground-state of pluripotency which displays a dramatic loss of DNA methylation. I uncovered that DAXX is essential for proper growth of ESC upon ground-state conversion. Furthermore, I observed that active loss of DNA demethylation can generate DNA damages at PCH, which induces a strong accumulation of DAXX. Dissecting the function of DAXX, I discovered that the DAXX-H3.3 interaction was implicated in the recruitment of SETDB1 at chromocenters to reform the heterochromatin state. Finally, I noticed that the function of DAXX extend beyond pericentromeric heterochromatin. Indeed, the absence of Daxx impairs the proper silencing of different heterochromatin regions including the lamina-associated domains. Altogether, this work provides evidence that DAXX is a regulator of heterochromatin maintenance in pluripotent cells.Les génomes des mammifères sont largement composés de séquences ADN répétées. Les régions d’hétérochromatine péricentromérique (PCH) sont formées de nombreuses répétitions de satellites majeurs. Les régions d’ADN répétés sont souvent réprimées par des mécanismes similaires comme la méthylation de l’ADN, la modification H3K9me3 et HP1. Des défauts de l’hétérochromatine sont observés dans différents cancers et contribuent à l’instabilité génomique. Les PCH des différents chromosomes se rassemblent et forment de larges chromocentres. La formation des chromocentres a lieu au cours de l’embryogénèse précoce, un moment où le niveau de méthylation de l’ADN est faible. Cette réorganisation est essentielle pour la poursuite du développement, et pourtant les mécanismes moléculaires la régulant dans les cellules pluripotentes précoces restent inconnus. Ce travail se concentre sur le rôle du variant d’histone H3.3, et de sa chaperonne DAXX, sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules souches embryonnaires (ESC). Premièrement, nous avons observé que la perte de Daxx altérait l’organisation des chromocentres dans les cellules pluripotentes. Les ESC peuvent être converti ver un état naïf de pluripotence, qui présentent une très forte diminution de leur niveau de méthylation de l’ADN. Nous avons découvert que DAXX était essentiel pour la survie des ESC lors de la conversion vers l’état naïf de pluripotence. De plus, nous avons observé que la perte active de la méthylation de l’ADN pouvait générer des dommages à l’ADN aux PCH, ce qui induit une forte accumulation de DAXX. En disséquant le rôle de DAXX, nous avons découvert que l’interaction DAXX-H3.3 était impliquée dans le recrutement de SETDB1 aux chromocentres pour reformer l’hétérochromatine. Enfin, nous avons montré que le rôle de DAXX s’étendait à d’autres régions de l’hétérochromatine tels que les domaines associés à la lamina. Dans l’ensemble, ce travail met en évidence un nouveau rôle DAXX dans le maintien de l’hétérochromatine des cellules pluripotentes

Fonction du variant d’histone H3.3 et de sa chaperonne DAXX sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules pluripotentes

Most of mammalian genomes are composed of DNA repeated elements. Pericentromeric heterochromatin (PCH) regions are formed of large arrays of major satellite repeats. DNA repeats are often silenced via similar mechanisms such as DNA methylation, H3K9me3 modification and HP1. Loss of heterochromatin silencing is commonly observed in different cancers and can lead to genomic instability. PCH of different chromosome can assemble into large DAPI-dense foci called chromocenters. Formation of chromocenter arise during the early embryogenesis when the level of DNA methylation is low. Such reorganization is essential for further development of the embryo, yet, the molecular mechanisms regulating its maintenance in the early pluripotent cells remain unknown. This work focuses on the role of the histone variant H3.3 and its chaperone DAXX in heterochromatin organization in embryonic stem cells (ESCs). Firstly, I observed that the loss of Daxx alters the organization of chromocenters in pluripotent cells. ESCs can be converted toward the ground-state of pluripotency which displays a dramatic loss of DNA methylation. I uncovered that DAXX is essential for proper growth of ESC upon ground-state conversion. Furthermore, I observed that active loss of DNA demethylation can generate DNA damages at PCH, which induces a strong accumulation of DAXX. Dissecting the function of DAXX, I discovered that the DAXX-H3.3 interaction was implicated in the recruitment of SETDB1 at chromocenters to reform the heterochromatin state. Finally, I noticed that the function of DAXX extend beyond pericentromeric heterochromatin. Indeed, the absence of Daxx impairs the proper silencing of different heterochromatin regions including the lamina-associated domains. Altogether, this work provides evidence that DAXX is a regulator of heterochromatin maintenance in pluripotent cells.Les génomes des mammifères sont largement composés de séquences ADN répétées. Les régions d’hétérochromatine péricentromérique (PCH) sont formées de nombreuses répétitions de satellites majeurs. Les régions d’ADN répétés sont souvent réprimées par des mécanismes similaires comme la méthylation de l’ADN, la modification H3K9me3 et HP1. Des défauts de l’hétérochromatine sont observés dans différents cancers et contribuent à l’instabilité génomique. Les PCH des différents chromosomes se rassemblent et forment de larges chromocentres. La formation des chromocentres a lieu au cours de l’embryogénèse précoce, un moment où le niveau de méthylation de l’ADN est faible. Cette réorganisation est essentielle pour la poursuite du développement, et pourtant les mécanismes moléculaires la régulant dans les cellules pluripotentes précoces restent inconnus. Ce travail se concentre sur le rôle du variant d’histone H3.3, et de sa chaperonne DAXX, sur l’organisation de l’hétérochromatine dans les cellules souches embryonnaires (ESC). Premièrement, nous avons observé que la perte de Daxx altérait l’organisation des chromocentres dans les cellules pluripotentes. Les ESC peuvent être converti ver un état naïf de pluripotence, qui présentent une très forte diminution de leur niveau de méthylation de l’ADN. Nous avons découvert que DAXX était essentiel pour la survie des ESC lors de la conversion vers l’état naïf de pluripotence. De plus, nous avons observé que la perte active de la méthylation de l’ADN pouvait générer des dommages à l’ADN aux PCH, ce qui induit une forte accumulation de DAXX. En disséquant le rôle de DAXX, nous avons découvert que l’interaction DAXX-H3.3 était impliquée dans le recrutement de SETDB1 aux chromocentres pour reformer l’hétérochromatine. Enfin, nous avons montré que le rôle de DAXX s’étendait à d’autres régions de l’hétérochromatine tels que les domaines associés à la lamina. Dans l’ensemble, ce travail met en évidence un nouveau rôle DAXX dans le maintien de l’hétérochromatine des cellules pluripotentes

DAXX safeguards pericentromeric heterochromatin formation in embryonic stem cells

Abstract DNA methylation is essential for heterochromatin formation and repression of DNA repeat transcription, both of which are essential for genome integrity. Loss of DNA methylation is associated with disease, including cancer, but is also required for development. Alternative pathways to maintain heterochromatin are thus needed to limit DNA damage accumulation. Here, we find that DAXX, an H3.3 chaperone, protects pericentromeric heterochromatin and is essential for embryonic stem cells (ESCs) maintenance in the ground-state of pluripotency. Upon DNA demethylation-mediated damage, DAXX relocalizes to pericentromeric regions, and recruits PML and SETDB1, thereby promoting heterochromatin formation. In the absence of DAXX, the 3D-architecture and physical properties of pericentric heterochromatin are disrupted, resulting in derepression of major satellite DNA. Using epigenome editing tools, we demonstrate that H3.3, and specifically H3.3K9 modification, directly contribute to maintaining pericentromeric chromatin conformation. Altogether, our data reveal that DAXX and H3.3 unite DNA damage response and heterochromatin maintenance in ESCs

DAXX safeguards heterochromatin formation in embryonic stem cells

International audienceGenomes comprise a large fraction of repetitive sequences folded into constitutive heterochromatin to protect genome integrity and cell identity. De novo formation of heterochromatin during preimplantation development is an essential step for preserving the ground-state of pluripotency and the self-renewal capacity of embryonic stem cells (ESCs). Yet, the molecular mechanisms responsible for the remodeling of constitutive heterochromatin are largely unknown. Here, we identify that DAXX, an H3.3 chaperone essential for the maintenance of ESCs in the ground state, accumulates in pericentromeric regions independently of DNA methylation. DAXX recruits PML and SETDB1 to promote the formation of heterochromatin, forming foci that are hallmarks of ground-state ESCs. In the absence of DAXX or PML, the 3D-architecture and physical properties of pericentric and peripheral heterochromatin are disrupted, resulting in derepression of major satellite DNA, transposable elements and genes associated with the nuclear lamina. Using epigenome editing tools, we observe that H3.3, and specifically H3.3K9 modification, directly contribute to maintaining pericentromeric chromatin conformation. Altogether, our data reveal that DAXX is crucial for the maintenance and 3D-organization of the heterochromatin compartment and protects ESC viability

Unbiased in vivo exploration of nuclear bodies-enhanced sumoylation reveals that PML orchestrates embryonic stem cell fate

Summary Membrane-less organelles are condensates formed by phase separation whose functions often remain enigmatic. Upon oxidative stress, PML scaffolds Nuclear Bodies (NBs) to regulate senescence or metabolic adaptation, but their role in pluripotency remains elusive. Here we establish that PML is required for basal SUMO2/3 conjugation in mESCs and oxidative stress-driven sumoylation in mESCs or in vivo . PML NBs create an oxidation-protective environment for UBC9-driven SUMO2/3 conjugation of PML partners, often followed by their poly-ubiquitination and degradation. Differential in vivo proteomics identified several members of the KAP1 complex as PML NB-dependent SUMO2-targets. The latter drives functional activation of this key epigenetic repressor. Accordingly, Pml −/− mESCs re-express transposable elements and display features of totipotent-like cells, a process further enforced by PML-controlled SUMO2-conjugation of DPPA2. Finally, PML is required for adaptive stress responses in mESCs. Collectively, PML orchestrates mESC fate through SUMO2-conjugation of key transcriptional or epigenetic regulators, raising new mechanistic hypotheses about PML roles in normal or cancer stem cells

Author Correction: Exploration of nuclear body-enhanced sumoylation reveals that PML represses 2-cell features of embryonic stem cells

Cancer Signaling networks and Molecular Therapeutic