Analysis of Tp53 Codon 72 Polymorphisms, Tp53 Mutations, and HPV Infection in Cutaneous Squamous Cell Carcinomas

Non-melanoma skin cancers are one of the most common human malignancies accounting for 2-3% of tumors in the US and represent a significant health burden. Epidemiology studies have implicated Tp53 mutations triggered by UV exposure, and human papilloma virus (HPV) infection to be significant causes of non-melanoma skin cancer. However, the relationship between Tp53 and cutaneous HPV infection is not well understood in skin cancers. In this study we assessed the association of HPV infection and Tp53 polymorphisms and mutations in lesional specimens with squamous cell carcinomas.We studied 55 cases of histologically confirmed cutaneous squamous cell carcinoma and 41 controls for the presence of HPV infection and Tp53 genotype (mutations and polymorphism).We found an increased number of Tp53 mutations in the squamous cell carcinoma samples compared with perilesional or control samples. There was increased frequency of homozygous Tp53-72R polymorphism in cases with squamous cell carcinomas, while the Tp53-72P allele (Tp53-72R/P and Tp53-72P/P) was more frequent in normal control samples. Carcinoma samples positive for HPV showed a decreased frequency of Tp53 mutations compared to those without HPV infection. In addition, carcinoma samples with a Tp53-72P allele showed an increased incidence of Tp53 mutations in comparison carcinomas samples homozygous for Tp53-72R.These studies suggest there are two separate pathways (HPV infection and Tp53 mutation) leading to cutaneous squamous cell carcinomas stratified by the Tp53 codon-72 polymorphism. The presence of a Tp53-72P allele is protective against cutaneous squamous cell carcinoma, and carcinoma specimens with Tp53-72P are more likely to have Tp53 mutations. In contrast Tp53-72R is a significant risk factor for cutaneous squamous cell carcinoma and is frequently associated with HPV infection instead of Tp53 mutations. Heterozygosity for Tp53-72R/P is protective against squamous cell carcinomas, possibly reflecting a requirement for both HPV infection and Tp53 mutations

Caracterization of a new role for glycolysis : control of the glucose sensor and the glucose signaling pathway in the yeast Kluyveromyces lactis

Chez les levures, organismes eucaryotes unicellulaires, le glucose est la source d'énergie préférée. La levure modèle Kluyveromyces lactis possède deux perméases au glucose. L'expression d'une de ces deux perméases, codée par le gène RAG1, est induite par la présence de glucose extracellulaire et cette régulation transcriptionnelle dépend de la détection du glucose par un senseur membranaire spécifique, Rag4. Cependant, la régulation de l'expression de RAG1 dépend également de la capacité des cellules à métaboliser le glucose via la glycolyse. En effet, l'expression de RAG1 est fortement affectée dans des mutants glycolytiques malgré la présence de glucose extracellulaire. Au cours de cette thèse, nous nous sommes attachés à déterminer les mécanismes via lesquels la glycolyse contrôle l'expression de RAG1. Grâce à l'utilisation de mutants glycolytiques ou d'inhibiteurs chimiques de la glycolyse chez K. lactis, nous avons démontré que la glycolyse régule la stabilité du senseur Rag4 à la membrane plasmique et contrôle ainsi la voie de signalisation du glucose et l'expression de RAG1. De plus, ce mécanisme de contrôle est conservé chez la levure modèle Saccharomyces cerevisiae. L'étude plus approfondie de Rag4 nous a permis de déterminer que la transmission du signal glucose requiert la queue C-terminale cytoplasmique de Rag4, qui sert de plateforme d'interaction protéique. La caractérisation fonctionnelle de Rag4 nous a permis de mettre en évidence que la protéine contient plusieurs domaines impliqués dans le contrôle de sa stabilité en fonction du type de signal induisant la déstabilisation: signal glycolytique ou changement de source de carbone. Enfin, la nature du signal issu de la glycolyse qui cible le senseur membranaire Rag4 a été étudiée en testant deux hypothèses : le signal est protéique (enzyme de la glycolyse) ou métabolique (métabolite intermédiaire de la glycolyse). Ces travaux de thèse ont permis de mettre en évidence un rôle inédit de la glycolyse dans le contrôle de la stabilité des senseurs membranaires du glucose chez les levures K. lactis et S. cerevisiaeYeasts are unicellular eukaryotic organisms which prefer glucose as energy source. The yeast model Kluyveromyces lactis has two glucose permeases. The expression of one of its permeases, RAG1, is induced by extracellular glucose. The glucose signaling pathway responsible for RAG1 expression regulation is dependent upon glucose sensing through a specific membrane glucose sensor, Rag4. However, RAG1 expression is also dependent upon glucose metabolism by glycolysis. Indeed, in glycolytic mutants RAG1 expression is strongly affected even when glucose is present. During these doctoral studies, we characterized mechanisms involved in glycolytic control on glucose signaling. Using glycolytic mutant or glycolysis chemical inhibitors, we have demonstrated that, in K. lactis, glycolysis targets the stability of the glucose sensor Rag4, controlling glucose signaling and RAG1 expression. This glycolytic control appears to be conserved in the yeast model Saccharomyces cerevisiae. We have shown that the C-terminal cytoplasmic tail of glucose sensor Rag4 is necessary for glucose signaling and forms a protein interaction platform. Rag4 protein contains several domains controlling Rag4 stability in response to different destabilization signals: glycolytic signal or carbon source signal. Finally, the nature of the glycolytic signal was studied considering two hypotheses: protein nature (e.g. glycolytic enzyme) or metabolic nature (e.g. glycolysis metabolic intermediate). This doctoral thesis underlines a new role of glycolysis in controlling membrane glucose sensor stability in K. lactis and S. cerevisia

Caractérisation d’un rôle inédit de la glycolyse : contrôle du senseur du glucose et de la voie de la signalisation du glucose chez la levure Kluyveromyces lactis

Yeasts are unicellular eukaryotic organisms which prefer glucose as energy source. The yeast model Kluyveromyces lactis has two glucose permeases. The expression of one of its permeases, RAG1, is induced by extracellular glucose. The glucose signaling pathway responsible for RAG1 expression regulation is dependent upon glucose sensing through a specific membrane glucose sensor, Rag4. However, RAG1 expression is also dependent upon glucose metabolism by glycolysis. Indeed, in glycolytic mutants RAG1 expression is strongly affected even when glucose is present. During these doctoral studies, we characterized mechanisms involved in glycolytic control on glucose signaling. Using glycolytic mutant or glycolysis chemical inhibitors, we have demonstrated that, in K. lactis, glycolysis targets the stability of the glucose sensor Rag4, controlling glucose signaling and RAG1 expression. This glycolytic control appears to be conserved in the yeast model Saccharomyces cerevisiae. We have shown that the C-terminal cytoplasmic tail of glucose sensor Rag4 is necessary for glucose signaling and forms a protein interaction platform. Rag4 protein contains several domains controlling Rag4 stability in response to different destabilization signals: glycolytic signal or carbon source signal. Finally, the nature of the glycolytic signal was studied considering two hypotheses: protein nature (e.g. glycolytic enzyme) or metabolic nature (e.g. glycolysis metabolic intermediate). This doctoral thesis underlines a new role of glycolysis in controlling membrane glucose sensor stability in K. lactis and S. cerevisiaeChez les levures, organismes eucaryotes unicellulaires, le glucose est la source d'énergie préférée. La levure modèle Kluyveromyces lactis possède deux perméases au glucose. L'expression d'une de ces deux perméases, codée par le gène RAG1, est induite par la présence de glucose extracellulaire et cette régulation transcriptionnelle dépend de la détection du glucose par un senseur membranaire spécifique, Rag4. Cependant, la régulation de l'expression de RAG1 dépend également de la capacité des cellules à métaboliser le glucose via la glycolyse. En effet, l'expression de RAG1 est fortement affectée dans des mutants glycolytiques malgré la présence de glucose extracellulaire. Au cours de cette thèse, nous nous sommes attachés à déterminer les mécanismes via lesquels la glycolyse contrôle l'expression de RAG1. Grâce à l'utilisation de mutants glycolytiques ou d'inhibiteurs chimiques de la glycolyse chez K. lactis, nous avons démontré que la glycolyse régule la stabilité du senseur Rag4 à la membrane plasmique et contrôle ainsi la voie de signalisation du glucose et l'expression de RAG1. De plus, ce mécanisme de contrôle est conservé chez la levure modèle Saccharomyces cerevisiae. L'étude plus approfondie de Rag4 nous a permis de déterminer que la transmission du signal glucose requiert la queue C-terminale cytoplasmique de Rag4, qui sert de plateforme d'interaction protéique. La caractérisation fonctionnelle de Rag4 nous a permis de mettre en évidence que la protéine contient plusieurs domaines impliqués dans le contrôle de sa stabilité en fonction du type de signal induisant la déstabilisation: signal glycolytique ou changement de source de carbone. Enfin, la nature du signal issu de la glycolyse qui cible le senseur membranaire Rag4 a été étudiée en testant deux hypothèses : le signal est protéique (enzyme de la glycolyse) ou métabolique (métabolite intermédiaire de la glycolyse). Ces travaux de thèse ont permis de mettre en évidence un rôle inédit de la glycolyse dans le contrôle de la stabilité des senseurs membranaires du glucose chez les levures K. lactis et S. cerevisia

Étude évaluant l'efficacité et la tolérance de la greffe de membrane amniotique sur les ulcères de jambe

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Les facteurs favorisant et freinant le montage des maisons de santé pluriprofessionnelles en Franche-Comté

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Glycolysis Controls Plasma Membrane Glucose Sensors To Promote Glucose Signaling in Yeasts

International audienceSensing of extracellular glucose is necessary for cells to adapt to glucose variation in their environment. In the respiratory yeast Kluyveromyces lactis, extracellular glucose controls the expression of major glucose permease gene RAG1 through a cascade similar to the Saccharomyces cerevisiae Snf3/Rgt2/Rgt1 glucose signaling pathway. This regulation depends also on intracellular glucose metabolism since we previously showed that glucose induction of the RAG1 gene is abolished in glycolytic mutants. Here we show that glycolysis regulates RAG1 expression through the K. lactis Rgt1 (KlRgt1) glucose signaling pathway by targeting the localization and probably the stability of Rag4, the single Snf3/Rgt2-type glucose sensor of K. lactis. Additionally, the control exerted by glycolysis on glucose signaling seems to be conserved in S. cerevisiae. This retrocontrol might prevent yeasts from unnecessary glucose transport and intracellular glucose accumulation