Monitoring of Candidatus Liberibacter asiaticus in Citrus Seedlings at Greenhouse Conditions and Commercial Orchards of Sweet Orange and Tahiti Lime in the Northwest of Parana State, Brazil

This study aimed to monitor the behavior of Ca. Liberibacter asiaticus in grafted seedlings in the greenhouse and in commercial orchards of sweet orange and Tahiti lime. Plants of sweet orange and Tahiti lime naturally infected with HLB were protected with screens aphid-proof to prevent the spread of disease. In greenhouse we used 17 Pêra variety seedlings that were inoculated in 2008 with infected budwood. The detection of HLB in the plants was carried out using conventional PCR. Ten leaves of each plant were collected for DNA extraction and for their full monitoring of the bacterial population by quantitative PCR for a period of 19 months. We observed erratic behavior of the bacterium. Even after the bacterium detection in the plant it was not possible to verify the presence of the etiologic agent in the same place after a few months. In the seedlings the bacterium was not detected in 82.3% of the plants in certain months, coinciding with the warmer months of the year in Brazil, despite its presence has being detected at earlier dates. For the plants in commercials orchards,  the detected Ct values were between 18 and 33. The pathogen was even found when the expression of symptoms was small. The study of the population behavior of this agent contributes to the understanding of the epidemiology of this disease

Stability of Citrus tristeza virus protective isolates in field conditions Estabilidade de isolados protetores contra Citrus tristeza virus em condições de campo

The objective of this work was to monitor the maintenance of Citrus tristeza virus (CTV) protective isolates stability in selected clones of 'Pêra' sweet orange (Citrus sinensis), preimmunized or naturally infected by the virus, after successive clonal propagations. The work was carried out in field conditions in the north of Paraná State, Brazil. Coat protein gene (CPG) analysis of 33 isolates collected from 16 clones of 'Pêra' sweet orange was performed using single strand conformational polymorphism (SSCP). Initially, the isolates were characterized by symptoms of stem pitting observed in clones. Then viral genome was extracted and used as template for the amplification of CPG by reverse transcription polimerase chain reaction (RTPCR). RTPCR products electrophoretic profiles were analyzed using the Jaccard coefficient and the UPGMA method. The majority of the clones had weak to moderate stem pitting symptoms and its CTV isolates showed alterations in the SSCP profiles. However, the stability of the protective complex has been maintained, except for isolates from two analised clones. Low genetic variability was observed within the isolates during the studied years.<br>O objetivo deste trabalho foi monitorar a manutenção da estabilidade de isolados protetores contra Citrus tristeza virus (CTV) em clones selecionados de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis) pré-imunizados ou infectados naturalmente pelo vírus, após sucessivas propagações clonais. O trabalho foi realizado em condições de campo, no norte do Estado do Paraná. A análise do gene da capa protéica (GPC) de 33 isolados, coletados de 16 clones de laranjeira 'Pêra', foi realizada com o uso da técnica polimorfismo conformacional da fita simples (SSCP). Inicialmente, os isolados foram caracterizados por meio de sintomas de caneluras observados nos clones. Em seguida, o genoma viral foi extraído e utilizado como molde para a amplificação do GCP com uso da transcrição reversa da reação em cadeia da polimerase (RTPCR). Os perfis eletroforéticos dos produtos da RTPCR foram analisados com emprego do coeficiente de Jaccard e do método UPGMA. A maioria dos clones apresentou sintomas fracos a moderados de caneluras, bem como alterações nos perfis dos isolados de CTV. Contudo, a estabilidade dos complexos protetores foi mantida, com exceção dos isolados presentes em dois dos clones analisados. Foi observada baixa variabilidade genética nos isolados durante os anos avaliados

Avaliação do processamento auditivo em idosos que relatam ouvir bem Auditory processing assessment in older people with no report of hearing disability

Em idosos, os resultados da avaliação comportamental das vias auditivas centrais são considerados de difícil interpretação devido à possível interferência do comprometimento das vias auditivas periféricas. OBJETIVO: Avaliar a eficiência das funções auditivas centrais de idosos que relatam ouvir bem. MATERIAL E MÉTODO: Estudo de casos que incluiu 40 indivíduos na faixa etária de 60 a 75 anos. Os pacientes foram submetidos à avaliação do processamento auditivo que constou de anamnese, exame otorrinolaringológico, audiometria tonal liminar, limiar de reconhecimento de fala, índice de reconhecimento de fala, imitanciometria, pesquisa de reflexos estapedianos, teste de identificação de sentenças sintéticas com mensagem competitiva ipsilateral, teste de padrões de freqüência e teste de dissílabos alternados por meio de tarefa dicótica. RESULTADOS: Gênero, faixa etária e perda auditiva não influenciaram os resultados dos testes de padrões de freqüência e dissílabos alternados por meio de tarefa dicótica; faixa etária e perda auditiva influenciaram os resultados do teste de identificação de sentenças com mensagem competitiva ipsilateral. Porcentagens de acertos abaixo dos padrões da normalidade de adultos foram observadas nos três testes que acessam as funções auditivas centrais. CONCLUSÃO: Indivíduos idosos que relatam ouvir bem apresentam prevalência relevante de sinais de ineficiência das funções auditivas centrais.<br>In the elderly, the results of central auditory pathways behavioral assessments are considered to be difficult to read because of the possible interference of peripheral auditory pathway involvement. AIM: Assess the efficacy of the central auditory function in elderly patients who do not complain of hearing. MATERIALS AND METHODS: Case study involving 40 individuals within the age range of 60 to 75 years. The patients underwent auditory processing evaluation based on anamnesis, otorhinolaryngological exam, threshold tonal audiometry, speech recognition threshold, speech recognition index, immittance measures, stapes reflex study, synthetic phrases identification test with ipsilateral competitive message, frequency pattern test and alternate twin-syllable test through dichotic task; age range and hearing loss influenced results from the phrases identification with ipsilateral competitive message. Percentages of right answers below normal standards were seen in the three tests that assessed the central auditory functions. CONCLUSION: Elderly individuals who did not complain of hearing presented relevant prevalence of signs of central auditory function inefficiencies

Characterization of Citrus tristeza virus isolates from grapefruit (Citrus paradisi Macf.) accessions of Citrus Active Germplasm Bank Caracterização de isolados do vírus da tristeza dos citros de acessos de pomelos (Citrus paradisi Macf.) do Banco Ativo de Germoplasma de Citros

Citrus tristeza virus (CTV) isolates from 35 grapefruit accessions belonging to Citrus Active Germplasm Bank of the "Instituto Agronômico de Campinas" located at the "Centro APTA Citros Sylvio Moreira", Cordeirópolis, São Paulo state, Brazil, were characterized and evaluated through symptoms in the trees, biological indexing, immunological diagnosis with different monoclonal antibodies and SSCP analysis (single-strand conformation polymorphism) of the coat protein gene. Symptomatology indicated that, in general, the group of plants with smaller canopy volume and severe stem pitting differed significantly from the group that presented greater vegetative development and mild to moderate stem pitting. However, the isolates from most of the accessions induced mild reaction on Mexican lime. The serological evaluation through the DAS-ELISA using monoclonal antibodies did not reveal any association between virus titer in the plant tissue and symptoms. The reaction with different monoclonal antibodies and the distinct electrophoresis patterns obtained through SSCP showed that there is a high degree of diversity among the isolates that infect these grapefruit accessions. High complexity within the same isolate was also observed in the SSCP profiles. This finding indicates that the CTV isolates from these plants are a complex mixture of CTV haplotypes. Similar SSCP banding patterns were observed among some plants with strong stem pitting symptoms, and among some plants with weak or moderate stem pitting symptoms.<br>Isolados do vírus da tristeza dos citros (CTV) de 35 acessos de pomelos que fazem parte do Banco Ativo de Germoplasma de Citros, localizado no Centro APTA Citros Sylvio Moreira, Cordeirópolis, São Paulo, Brasil, pertencente ao Instituto Agronômico de Campinas (IAC), foram caracterizados através dos sintomas observados nas árvores, indexação biológica, diagnóstico imunológico e análise SSCP (polimorfismo de conformação de fita simples) do gene da proteína do capsídeo. O grupo de plantas que, em geral, apresentou menor volume de copa e severo sintoma de canelura diferenciou-se significativamente do grupo com maior desenvolvimento vegetativo e fraco a moderado sintoma de canelura. No entanto, a maioria dos isolados de CTV das plantas de ambos os grupos induziu fraca reação em limão galego e nenhuma relação entre títulos do vírus nos tecidos e sintomatologia foi observada na avaliação sorológica conduzida por DAS-ELISA. A reação com diferentes anticorpos monoclonais e os distintos padrões eletroforéticos obtidos por SSCP demonstraram que há uma grande diversidade entre os isolados de CTV que infectam os acessos de pomelos. Alta complexidade de bandas dentro de um mesmo isolado foi também observada nos perfis SSCP, demonstrando que cada isolado é constituído por uma mistura de diferentes haplótipos de CTV. Padrões SSCP semelhantes foram observados entre algumas plantas com fortes sintomas de caneluras e entre algumas plantas com sintomas fracos ou moderados de caneluras