Leptospirosis: toma de muestras y diagnóstico

La leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa provocada por una bacteria del género Leptospira que afecta a los animales domésticos y silvestres siendo estos una fuente de infección para el hombre. Podemos definir a la leptospirosis como una zoonosis de diagnóstico complejo que provoca pérdidas económicas difíciles de cuantificar. El diagnóstico de la leptospirosis comprende el diagnóstico clínico, bacteriológico, molecular y serológico.Mesa: Leptospirosis.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis: toma de muestras y diagnóstico

La leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa provocada por una bacteria del género Leptospira que afecta a los animales domésticos y silvestres siendo estos una fuente de infección para el hombre. Podemos definir a la leptospirosis como una zoonosis de diagnóstico complejo que provoca pérdidas económicas difíciles de cuantificar. El diagnóstico de la leptospirosis comprende el diagnóstico clínico, bacteriológico, molecular y serológico.Mesa: Leptospirosis.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis: toma de muestras y diagnóstico

La leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa provocada por una bacteria del género Leptospira que afecta a los animales domésticos y silvestres siendo estos una fuente de infección para el hombre. Podemos definir a la leptospirosis como una zoonosis de diagnóstico complejo que provoca pérdidas económicas difíciles de cuantificar. El diagnóstico de la leptospirosis comprende el diagnóstico clínico, bacteriológico, molecular y serológico.Mesa: Leptospirosis.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis: técnicas diagnósticas

La Leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa, causada por una bacteria del género Leptospira que afecta sobre todo a los animales salvajes y domésticos, que sirven como fuente de infección para el hombre. Presenta una epidemiología compleja y distribución cosmopolita, en la que varias especies, principalmente los roedores actúan como hospedadores de mantenimiento de muchas serovariedades en todo el mundo, siendo el hombre y los animales de explotación hospedadores accidentales. Según la clasificación serológica o fenotípica hay más de 225 serovares. Las especies del género Leptospira han sido reclasificadas tomando como base los estudios de ADN. Es por esto que la clasificación fenotípica de leptospiras está siendo reemplazada por la genotípica, en la cual un número de genomoespecies incluyen todas las serovariedades de ambas, L interrogans y L biflexa, habiéndose demostrado heterogeneidad genética.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis: técnicas diagnósticas

La Leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa, causada por una bacteria del género Leptospira que afecta sobre todo a los animales salvajes y domésticos, que sirven como fuente de infección para el hombre. Presenta una epidemiología compleja y distribución cosmopolita, en la que varias especies, principalmente los roedores actúan como hospedadores de mantenimiento de muchas serovariedades en todo el mundo, siendo el hombre y los animales de explotación hospedadores accidentales. Según la clasificación serológica o fenotípica hay más de 225 serovares. Las especies del género Leptospira han sido reclasificadas tomando como base los estudios de ADN. Es por esto que la clasificación fenotípica de leptospiras está siendo reemplazada por la genotípica, en la cual un número de genomoespecies incluyen todas las serovariedades de ambas, L interrogans y L biflexa, habiéndose demostrado heterogeneidad genética.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis, metodologías diagnósticas : Rol de los animales silvestres

Las infecciones adquiridas por el hombre a través de los animales son conocidas como zoonosis y constituyen un riesgo importante para la salud pública; muchas de ellas son enfermedades emergentes. La leptospirosis es una enfermedad de distribución mundial que se puede controlar, pero no erradicar.Trabajo publicado en Cagliada, Maria del Pilar Lilia y Galosi, Cecilia Mónica (comps.). I Congreso de Microbiología Veterinaria. Libro de resúmenes. La Plata: Facultad de Ciencias Veterinarias, 2021.Facultad de Ciencias Veterinaria

Leptospirosis en producciones de subsistencia de pequeños rumiantes

Fil: Brihuega, Bibiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Martinez, Mara Leila. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Romero, Graciela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Grune Loffler, Sylvia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

PCR para detectar leptospiras patógenas en muestras clinicas animales

El Grupo de Investigación del Laboratorio de Leptospirosis (Centro de Referencia OIE) perteneciente al Instituto de Patobiología ubicado en el INTA de Castelar, trabajó en el marco del Proyecto Nacional de Sanidad Animal 1115052, Módulo Zoonosis reemergentes de impacto socio económico, en una PCR de tiempo final para la detección de ADN de leptospiras patógenas a partir de muestras clínicas de animales de producción.Esta PCR utilizó los cebadores modificados (primers): G1 (5'- CTG AATCGCTGTATAAAAGT) y G2 (5'-GGAAAACAAATGGTCGGAAG), éstos amplificaron una banda de 246-285pb a partir del ADN de todas las especies patógenas de Leptospira spp., exceptuando L. kirschneri. Los cebadores B64I (5'-CTGAATTCTCATCTCAACTC) y B64II (5'GCAGAAATCAGATGGACGAT) amplificaron un producto de 542-563 pb a partir de ADN de L. kirschneri. La mix para la reacciones de PCR, de volumen final de 50 μl estaba compuesta de la siguiente manera: 10X buffer: 500mM-KCL, 20mM MgCl2, 100mM-Tris/HCL, pH 9.0, 0.5 μl de una solución de 50μmol de cada primer, 0.5 μl de una mix conteniendo 10mM de cada desoxinucleico dATP, dTTP, dCTP,y dGTP, Taq polimerasa (0.5U) y agua destilada libre de nucleasas. De templado (molde) de ADN se utilizaron entre 2 μl. El programa de ciclado fue de 94ºC durante 5 minutos (desnaturalización), 34 ciclos de 94°C por 1,5 minutos, 55°C durante 1 minuto y 72°C durante 2 minutos, la extensión final fue de 72°C durante 7 minutos.Los productos de amplificación se analizaron por electroforesis en un gel de agarosa 2% teñido con bromuro de etidio y se utilizó un transiluminador de luz UV (Uvi Tec transiluminator BTS-20.M). Los tamaños de las bandas se determinaron con un marcador molecular de 100bp (Embiotech). Se incluyeron controles negativos para asegurar que no haya contaminación ambiental y un control positivo. Se probó esta PCR con muestras de órganos, suero y orina con resultados favorables. Esta herramienta diagnóstica permite discriminar si la leptospira es patógena o no.Fil: Grune Loffler, Sylvia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Brihuega, Bibiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentin

Detección de leptospiras patógenas en bovinos mediante amplificación isotérmica mediada por la formación de loops (LAMP)

Leptospirosis is an infectious disease of global distribution caused by a spirochete of the genus Leptospira spp. Endemic in our country, and of difficult diagnosis by its polymorphic presentation. The gold standard technique for diagnosing leptospirosis is the microagglutination test (MAT). The objective of this investigation was to test if there is a correlation between the serological diagnosis by MAT and the presence of DNA in serum using the LAMP technique to diagnose leptospira in domestic animals. Eighty canine sera from the province of Buenos Aires were used to test anti-leptospira antibodies with microscopic agglutination (MAT) using 10 strains of Leptospira spp. (Leptospira interrogans, serovar Canicola, serovar Hardjo, serovar Icterohaemorrhagiae, serovar Pomona, serovar Pyrogenes, serpovar Wolffi, Leptospira borgpetersenii, serovar Castelloni, serovar Tarassovi, Leptospira kirshneri serovar Grippothyphosa). Leptospiral DNA was extracted from the samples using Chelex 100 resin, to be used as annealed for leptospira-specific PCR and loop-mediated isothermal amplification (LAMP). A PCR was used to amplify the features of DNA sequences using specific primers (modified Gravekamp et al technique) and for the reaction of LAMP we used the technique described by Koizumi et al., 2012. The product obtained was incubated by using a colour called malachite green. Optimal results were obtained. Of the 80 canine sera analyzed, 48 were positive for MAT. Twelve of them were positive for PCR and LAMP. Those MAT positive and PCR and LAMP negative sera samples had very low titers to MAT (1/200). MAT negative sera samples were also negative for PCR and LAMP. PCR and LAMP showed the same sensitivity in detecting the leptospiral DNA. These results demonstrate that it is possible to use LAMP for the detection of leptospirosis in canines and that MAT has a higher sensitivity than the PCR and LAMP currently available. Following these satisfactory tests, bovines remain under investigation.La leptospirosis es una enfermedad infecciosa de distribución mundial causada por una espiroqueta del género Leptospira spp., endémica en nuestro país y de difícil diagnóstico por su presentación polimórfica. La técnica gold standart para diagnosticar leptospirosis es el test de microaglutinación (MAT). El objetivo de esta investigación fue probar si hay correlación entre el diagnóstico serológico por MAT y la presencia de ADN en suero usando la técnica LAMP para diagnosticar leptospiras en animales domésticos. Fueron utilizados 80 sueros caninos de la provincia de Buenos Aires para testear anticuerpos antileptospiras con Aglutinación microscópica (MAT), usando 10 cepas de Leptospira spp. (Leptospira interrogans serovar Canicola, serovar Hardjo, serovar Hebdomadis, serovar Icterohaemorrhagiae, serovar Pomona, serovar Pyrogenes, serovar Wolffi, Leptospira borgpeterseni serovar Castellonis, serovar Tarassovi, y Leptospira kirshneri serovar Grippothyphosa). Se extrajo ADN leptospiral de las muestras usando resina Chelex 100 para ser usado como templado para PCR (reacción en cadena de la polimerasa) específico de leptospira y loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Se usó un PCR para amplificar secuencias características del ADN utilizando primers específicos (técnica Gravekamp et al modificada) y para la reacción de LAMP se utilizó la técnica descripta por Koizumi et al., 2012. El producto obtenido fue incubado usando una coloración denominada verde de malaquita. Se obtuvieron óptimos resultados. De los 80 sueros caninos analizados, 48 fueron positivos a MAT. Doce de ellos positivos por PCR y LAMP. Aquellos sueros positivos a MAT y negativos a PCR y LAMP, presentaron títulos muy bajos a MAT (1/200). Los sueros negativos a MAT, lo fueron también a PCR y LAMP. PCR y LAMP mostraron la misma sensibilidad detectando el ADN leptospiral. Estos resultados demuestran que es posible usar LAMP para la detección de leptospirosis en caninos y que la MAT tiene una mayor sensibilidad que la PCR y LAMP actualmente disponibles. Tras estas pruebas satisfactorias, se sigue investigando en bovino

Estudio Epidemiológico molecular de agentes bacterianos zoonóticos

La leptospirosis es una enfermedad zoonótica re-emergente de distribución mundial que se presenta en zonas rurales y urbanas. Puede causar importantes pérdidas económicas por fallas reproductivas en bovinos y porcinos, ocasionando abortos, mortalidad fetal o nacimiento de animales débiles. El objetivo del proyecto fue determinar las serovariedades de leptospiras circulantes en animales de produccióny compañía, y evaluar la correlación entre la técnica de aglutinación macroscópica desarrollada como procedimiento rápido de cribado, y la técnica de microaglutinación (—MAT—) de referencia.Se analizó un total de 652 sueros, 420 bovinos, 180 porcinos y 52 caninos mediante la técnica de aglutinación macroscópica género-específica desarrollada con tres antígenos, Canicola, Icterohaemorrhagiaey Pomona, y la MAT. Se correlacionaron ambas técnicas. Se procesaron también 88 muestras de riñón, hígado o bazo pertenecientes a una parte de los animales analizados para el aislamiento de Leptospira interrogans y se determinó el perfil genético de las cepas mediante la técnica multiple-locus variable-number tandem repeat analysis (MLVA).El 20% de los sueros caninos resultó seroreactivo a los serovares Canicola, Icterohaemorrhagiae y Ballum. El 35 % de los bovinos fue positivo a Pomona, Hardjo, Wolfii y Ballum y el 27 % de los porcinos a Pomona, mediante la técnica MAT. La técnica de aglutinación macroscópica mostró una correlación del 95 % frente a MAT. Sólo en una de las muestras de origen bovino se logró aislar una cepa de Leptospira interrogans, genotipo Pomona.La seroprevalencia de Leptospira interrogans fue elevada frente a estudios anteriores. Los serovarespredominantes en caninos fueron Canicola e Icterohaemorrhagiae mientras que en bovinos y porcinos fue Pomona.La técnica de aglutinación macroscópica resultó ser rápida, específica y efectiva para detectar animales positivos y de utilidad en laboratorios de baja complejidad y en campo