Aspectos morfológicos do germe dentário de animais provenientes de ratas submetidas a ingestão de etanol

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Efeitos na odontogênese devida à ingestão de etanol durante a gestação e lactação : estudo em ratos

O consumo de etanol durante a gestação pode ocasionar anormalidades crânio-faciais, entre elas, alterações dentárias. Portanto, o objetivo desse trabalho foi verificar os efeitos do consumo de etanol durante a gestação e lactação na odontogênese através de um modelo animal. Ratas Wistar foram divididas em dois grupos: Grupo Teste (GT), cujas ratas ingeriram Etanol a 25% ad libitum e Grupo Controle (GC), cujas ratas ingeriram água ad libitum. Após 6 semanas, as ratas foram acasaladas com machos não-tratados. A partir dessa etapa, dois estudos foram conduzidos. No primeiro, realizou-se a análise da morfologia e da expressão da Laminina dos germes dentários dos filhotes do GT e do GC. Verificou-se, por meio de análise observacional, no GT, alterações epiteliais nos estágios de lamina e broto, mas não nos de casquete e campânula precoce. Em campânula tardia, observou-se atraso no desenvolvimento e diminuição dos germes. Quanto à expressão da Laminina, realizou-se a técnica imunoistoquímica enzimática nos animais de 19 dias de vida intra-uterina e recém-nascidos e, por meio de análise quantitativa, observou-se uma menor área imunomarcada nos animais do GT. O segundo trabalho objetivou verificar diferenças morfométricas entre os molares dos filhotes do GT e do GC. Para isso, foram aferidos os diâmetros mésio-distal (MD) e vestíbulo-lingual (VL) de cada dente molar do GT e GC no 40º dia pós-natal. As médias dos diâmetros do GT foram menores que as do GC. O mesmo ocorreu quando se considerou a soma dos diâmetros por hemiarco. Estas diferenças foram estatisticamente significativas, com exceção do diâmetro MD e VL do primeiro molar inferior e MD do primeiro molar superior e da soma do diâmetro VL dos molares inferiores. Em vista dos resultados obtidos, concluiu-se que a ingestão de etanol durante a gestação e lactação em ratos pode causar alterações morfológicas durante o desenvolvimento dentário. Sugere-se que a diminuição na expressão da Laminina possa estar envolvida nos mecanismos dessas alterações. Além disso, verificou-se que tais anormalidades podem permanecer na vida adulta do animal, na forma de alterações morfométricas dos dentes molares.Ethanol intake during gestation can provoke cranial-facial malformations, and dental anomalies are among them. Hence, the purpose of this study was to verify the effects of ethanol intake during pregnancy and lactation on odontogenesis using an animal model. Wistar female rats were divided in two groups: Test Group (TG), whose animals consume a 25% ethanol solution ad libitum and Control Group (CG), whose animals consume water ad libitum. After 6 weeks, the females were matted with non-treated males. Since this stage, two studies were conducted. The first one analyzed the tooth germs morphology and Laminin (Laminina) expression of TG and CG offspring. The TG showed, through a qualitative analysis, epithelial alterations in dental lamina and bud stage but not in cap and early bell stage. During late bell stage, a development delay and a reduced tooth germ size were observed. As regards the Laminina expression, the enzymatic imunoistochemistry technique was performed on 19 days gestation animals and newborns and a smaller imunostained area on TG animals was observed by a quantitative analysis. The purpose of the second study was to verify morphometric differences between molar teeth of TG and CG offspring. The mesio-distal (MD) and buccal-lingual (BL) diameters of all pup’s molar teeth were measured on the 40o day of life. The TG molars diameters means were smaller than the CG means, and the same was found when the 3 molars diameters were added. These differences were statistically significant except for the MD and VL inferior’s first molar diameter, the MD superior first molar diameter and the VL diameter when the 3 inferiors molars were considered together. Considering the results, it was concluded that ethanol ingestion in rats during gestation and lactation can cause dental morphologic alterations during dental development. The decrease of Laminina expression can be involved in the alterations mechanisms. Furthermore, it was verified that these abnormalities can continue at animal’s adult life as morphometric alteration of molars tooth

Mecanismos moleculares envolvidos na diferenciação das SHED (Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth) em células endoteliais

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais.Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells

Mecanismos moleculares envolvidos na diferenciação das SHED (Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth) em células endoteliais

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais.Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells

Aspectos morfológicos do germe dentário de animais provenientes de ratas submetidas a ingestão de etanol

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Estudo Comparativo da Morfologia da Polpa Dentária de Dentes Humanos Submetidos à Técnica de Clivagem e a Técnicas de Descalcificação Química

Os rápidos avanços do conhecimento acerca do reparo e regeneração tecidual, têm despertado o interesse pela biologia pulpar. Entretanto, para avaliar microscopicamente a dinâmica do tecido pulpar, é necessário, inicialmente, que o dente seja submetido aos processamentos histológicos de fixação e descalcificação. A descalcificação pode afetar o grau de coloração e pode causar desnaturação de proteínas. Além disso, é um processo demorado, visto que o dente requer um longo período de desmineralização. Assim, a proposta deste trabalho foi de avaliar qualitativamente a matriz extracelular e as células da polpa dentária, comparando três grupos: dois em que o tecido dentário foi descalcificado e um em que a polpa foi removida dos tecidos duros, não necessitando do processo de descalcificação. Dez pré-molares foram fixados em formalina tamponada a 10% por 24 horas. Após, estes dentes foram divididos em três grupos: 4 dentes foram submetidos a processo de descalcificação por meio de solução de Morse, 3 por meio de solução de EDTA a 10% e; os 3 dentes restantes tiveram sua polpa separada dos tecidos duros dentários por meio da técnica de clivagem. Na seqüência, os três grupos foram processados por meio da técnica histológica de rotina e foram corados com H/E. Os resultados desta análise demonstraram que houve uma melhor conservação tanto da matriz extracelular, quanto das estruturas celulares no grupo da clivagem, seguido do grupo Morse e por fim, com a menor conservação das estruturas pelo grupo EDT