Rol de las galectinas y sus glicanos en la fisiopatología de la célula cardíaca infectada con Trypanosoma cruzi : implicancias en la cardiomiopatía chagásica crónica

Fil: Benatar, Alejandro Francisco. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaLa cardiomiopatía chagásica crónica (CCC) es una de las manifestaciones más graves de etapa crónica de la Enfermedad de Chagas-Mazza. Actualmente, se postulan dos hipótesis para explicar la patología cardíaca: la persistencia del parásito en el tejido cardíaco, y la respuesta inmune desarrollada especialmente contra antígenos propios. Si bien la patología de la CCC es multifactorial, está claro que la presencia de diferentes linajes del parásito, así como los componentes del sistema inmune del hospedador, determina el progreso de la forma asintomática de la enfermedad a la CCC.\nMediante su interacción con los glicanos presentes en distintas glicoproteínas, Galectina-1 (Gal-1) participa en la regulación de diversos fenómenos inmunológicos, y además modula la actividad microbicida y la supervivencia de macrófagos infectados por T. cruzi.\nEn este marco, el objetivo general de este trabajo de Tesis fue evaluar los cambios que se producen en los cardiomiocitos a nivel de galectinas, y de los glicanos presentes en la superficie celular ante la infección por T. cruzi con el propósito de profundizar en la implicancia de estos factores en la aparición de la patología cardíaca desarrollada en los pacientes con CCC.\nLos resultados presentados en esta Tesis, indican que Gal-1 posee efectos protectores sobre cultivos de células cardíacas de la línea HL-1, infectadas con dos cepas de T. cruzi, pertenecientes a dos Unidades Discretas de Tipificación (UDT) diferentes, Tulahuén (UDT VI) y Brazil (UDT I). Estos efectos fueron independientes de la unión de Gal-1 a la superficie de tripomastigotes, y resultaron en un porcentaje menor de células infectadas con T. cruzi, así como también en una disminución del grado de apoptosis generado por el parásito.\nEn ratones deficientes para el gen de Gal-1 (Lgals1-/-), se observaron mayores niveles de parasitemias para ambas cepas de T. cruzi respecto de animales C57Bl/6 wild-type durante el primer mes de infección. Estos animales transgénicos también presentaron mayor parasitismo en músculo cardíaco, y en el caso de las hembras, una menor respuesta inflamatoria en corazón y una mayor susceptibilidad a la infección con la cepa Tulahuén.\nLos ratones infectados con la cepa Brazil no presentaron nidos de amastigotes, y muy pocos infiltrados inflamatorios en los preparados histológicos, y las alteraciones en sus\nelectrocardiogramas a los 35 y a los 95 días post infección, no presentaron un patrón diferencial entre ratones transgénicos y wild-type.\nPor otra parte, ambas cepas de T. cruzi evaluadas, lograron modificar el patrón de glicanos de superficie de la célula HL-1. Mientras que la infección de las células con tripomastigotes de la cepa Tulahuén, indujo la aparición de un glicofenotipo menos permisivo para la unión de Gal-1, el cambio en el patrón de glicoconjugados fue muchos más leve al infectar con la cepa Brazil. La infección no indujo cambios en la expresión de Gal-1 en células HL-1, aunque sí se generó un incremento de su concentración en sobrenadantes de cultivo. Al ser un marcador de daño cardíaco, también se analizó la expresión de Gal-3 en células HL-1, la cual reveló un incremento en células infectadas con la cepa Brazil.\nEstos datos sugieren que Gal-1 tendría un rol protector en las primeras etapas de la infección por T. cruzi, y que la capacidad del parásito para modificar el glicofenotipo de la célula cardíaca hospedadora, modularía estos efectos, disminuyendo el efecto de esta lectina en la Enfermedad de Chagas-Mazza

Galectins in Chagas disease: A missing link between Trypanosoma cruzi infection, inflammation, and tissue damage

Trypanosoma cruzi, the protozoan parasite causative agent of Chagas disease, affects about seven million people worldwide, representing a major global public health concern with relevant socioeconomic consequences, particularly in developing countries. In this review, we discuss the multiple roles of galectins, a family of β-galactoside-binding proteins, in modulating both T. cruzi infection and immunoregulation. Specifically, we focus on galectin-driven circuits that link parasite invasion and inflammation and reprogram innate and adaptive immune responses. Understanding the dynamics of galectins and their β-galactoside-specific ligands during the pathogenesis of T. cruzi infection and elucidating their roles in immunoregulation, inflammation, and tissue damage offer new rational opportunities for treating this devastating neglected disease.Fil: Poncini, Carolina Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Rabinovich, Gabriel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Analytical sensitivity and specificity of a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) kit prototype for detection of Trypanosoma cruzi DNA in human blood samples

This study aimed to assess analytical parameters of a prototype LAMP kit that was designed for detection of Trypanosoma cruzi DNA in human blood. The prototype is based on the amplification of the highly repetitive satellite sequence of T.cruzi in microtubes containing dried reagents on the inside of the caps. The reaction is carried out at 65°C during 40 minutes. Calcein allows direct detection of amplified products with the naked eye. Inclusivity and selectivity were tested in purified DNA from Trypanosoma cruzi stocks belonging to the six discrete typing units (DTUs), in DNA from other protozoan parasites and in human DNA. Analytical sensitivity was estimated in serial dilutions of DNA samples from Sylvio X10 (Tc I) and CL Brener (Tc VI) stocks, as well as from EDTA-treated or heparinized blood samples spiked with known amounts of cultured epimastigotes (CL Brener). LAMP sensitivity was compared after DNA extraction using commercial fiberglass columns or after ?Boil & Spin? rapid preparation. Moreover, the same DNA and EDTA-blood spiked samples were subjected to standardized qPCR based on the satellite DNA sequence for comparative purposes. A panel of peripheral blood specimens belonging to Chagas disease patients, including acute, congenital, chronic and reactivated cases (N = 23), and as well as seronegative controls (N = 10) were evaluated by LAMP in comparison to qPCR. LAMP was able to amplify DNAs from T. cruzi stocks representative of the six DTUs, whereas it did not amplify DNAs from Leishmania sp, T. brucei sp, T. rangeli KPN+ and KPN-, P. falciparum and non-infected human DNA. Analytical sensitivity was 1x10-2fg/μL of both CL Brener and Sylvio X10 DNAs, whereas qPCR detected up to 1x 10−1fg/μL of CL Brener DNA and 1 fg/μl of Sylvio X10 DNA. LAMP detected 1x10-2parasite equivalents/mL in spiked EDTA blood and 1x10-1par.eq/mL in spiked heparinized blood using fiberglass columns for DNA extraction, whereas qPCR detected 1x10-2par.eq./mL in EDTA blood. Boil & Spin extraction allowed detection of 1x10-2par.eq /mL in spiked EDTA blood and 1 par.eq/ml in heparinized blood. LAMP was able to detect T.cruzi infection in peripheral blood samples collected from well-characterised seropositive patients, including acute, congenital, chronic and reactivated Chagas disease. To our knowledge, this is the first report of a prototype LAMP kit with appropriate analytical sensitivity for diagnosis of Chagas disease patients, and potentially useful for monitoring treatment response.Fil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Llano Murcia, Mónica. Pontificia Universidad Javeriana; ColombiaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Monnerat, Severine. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Cruz, Israel. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Picado, Albert. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Curto, Maria de Los Angeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Kubota, Yutaka. Eiken Chemical Company; JapónFil: Wehrendt, Diana Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Pavia, Paula. Pontificia Universidad Javeriana; ColombiaFil: Mori, Yasuyoshi. Eiken Chemical Company; JapónFil: Puerta, Concepción. Pontificia Universidad Javeriana; ColombiaFil: Ndung'u, Joseph M.. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

Trypanosoma cruzi loop-mediated isothermal amplification (Trypanosoma cruzi loopamp) kit for detection of congenital, acute and chagas disease reactivation

A Trypanosoma cruzi Loopamp kit was recently developed as a ready-to-use diagnostic method requiring minimal laboratory facilities. We evaluated its diagnostic accuracy for detection of acute Chagas disease (CD) in different epidemiological and clinical scenarios. In this retrospective study, a convenience series of clinical samples (venous blood treated with EDTA or different stabilizer agents, heel-prick blood in filter paper or cerebrospinal fluid samples (CSF)) from 30 infants born to seropositive mothers (13 with congenital CD and 17 noninfected), four recipients of organs from CD donors, six orally–infected cases after consumption of contaminated guava juice and six CD patients coinfected with HIV at risk of CD reactivation (N = 46 patients, 46 blood samples and 1 CSF sample) were tested by T. cruzi Loopamp kit (Tc LAMP) and standardized quantitative real-time PCR (qPCR). T. cruzi Loopamp accuracy was estimated using the case definition in the different groups as a reference. Cohen’s kappa coefficient (κ) was applied to measure the agreement between Tc LAMP (index test) and qPCR (reference test). Sensitivity and specificity of T. cruzi Loopamp kit in blood samples from the pooled clinical groups was 93% (95% CI: 77–99) and 100% (95% CI: 80–100) respectively. The agreement between Tc LAMP and qPCR was almost perfect (κ = 0.92, 95% CI: 0.62–1.00). The T. cruzi Loopamp kit was sensitive and specific for detection of T. cruzi infection. It was carried out from DNA extracted from peripheral blood samples (via frozen EDTA blood, guanidine hydrochloride-EDTA blood, DNAgard blood and dried blood spots), as well as in CSF specimens infected with TcI or TcII/V/VI parasite.Fil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Picado, Albert. Foundation For Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Wehrendt, Diana Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Fernández, Marisa. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Irurtia, Cecilia. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Cruz Mata, Israel. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Ndungu, Joseph M.. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Cafferata, María L.. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria; ArgentinaFil: Montenegro, Graciela. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Sosa-Estani, Sergio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones en Epidemiología y Salud Pública. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria. Centro de Investigaciones en Epidemiología y Salud Pública; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Lucero, Raúl H.. Universidad Nacional del Nordeste. Instituto de Medicina Regional; ArgentinaFil: Alarcón de Noya, Belkisyole. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

Prospective multicenter evaluation of real time PCR Kit prototype for early diagnosis of congenital Chagas disease

Background: Current algorithm for Congenital Chagas Disease (cCD) diagnosis is unsatisfactory due to low sensitivity of the parasitological methods. Moreover, loss to follow-up precludes final serodiagnosis after nine months of life in many cases. A duplex TaqMan qPCR kit for Trypanosoma cruzi DNA amplification was prospectively evaluated in umbilical cord (UCB) and peripheral venous blood (PVB) of infants born to CD mothers at endemic and non-endemic sites of Argentina. Methods: We enrolled and followed-up 370 infants; qPCR was compared to gold-standard cCD diagnosis following studies of diagnostic accuracy guidelines. Findings: Fourteen infants (3·78%) had cCD. The qPCR sensitivity and specificity were higher in PVB (72·73%, 99·15% respectively) than in UCB (66·67%, 96·3%). Positive and negative predictive values were 80 and 98·73% and 50 and 98·11% for PVB and UCB, respectively. The Areas under the Curve (AUC) of ROC analysis for qPCR and micromethod (MM) were 0·81 and 0·67 in UCB and 0·86 and 0·68 in PVB, respectively. Parasitic loads ranged from 37·5 to 23,709 parasite equivalents/mL. Discrete typing Unit Tc V was identified in five cCD patients and in six other cCD cases no distinction among Tc II, Tc V or Tc VI was achieved. Interpretation: This first prospective field study demonstrated that qPCR was more sensitive than MM for early cCD detection and more accurate in PVB than in UCB. Its use, as an auxiliary diagnostic tool to MM will provide more accurate records on cCD incidence. Funding: FITS SALUD 001-CHAGAS (FONARSEC, MINCyT, Argentina) to the Public-Private Consortium (INGEBI-CONICET, INP-ANLIS MALBRAN and Wiener Laboratories); ERANET-LAC-HD 328 to AGS and PICT 2015-0074 (FONCYT, MinCyT) to AGS and FA.Fil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Danesi, Emmaría. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; ArgentinaFil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Bortolotti, Santiago. Wiener Laboratorios SAIC; ArgentinaFil: Cafferata, María Luisa. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria; ArgentinaFil: Ramirez Gomez, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Lopez Albizu, Maria Constanza. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Scollo, Karenina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Baleani, María. Wiener Laboratorios SAIC; ArgentinaFil: Lara, Laura. Instituto de Maternidad y Ginecología ''Nuestra Señora de las Mercedes''; ArgentinaFil: Agolti, Gustavo. Gobierno de la Provincia de Chaco. Hospital Julio César Perrando; ArgentinaFil: Seu, Sandra. Gobierno de la Provincia de Santiago del Estero. Hospital Regional Dr. Ramón Carrillo; ArgentinaFil: Adamo, Elsa. Provincia de Santiago del Estero. Centro Integral de Salud La Banda; ArgentinaFil: Lucero, Raul Horacio. Universidad Nacional del Nordeste. Instituto de Medicina Regional; ArgentinaFil: Irazu, Lucía. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; ArgentinaFil: Rodriguez, Marcelo. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; ArgentinaFil: Poeylaut Palena, Andrés Alberto. Wiener Laboratorios SAIC; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Esteva, Mónica Inés. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Althabe, Fernando. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rojkin, Federico. Wiener Laboratorios SAIC; ArgentinaFil: Bua, Jacqueline Elena. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sosa-Estani, Sergio Alejandro. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Congenital Chagas Disease Study Group. No especifíca

Post-intervention Status in Patients With Refractory Myasthenia Gravis Treated With Eculizumab During REGAIN and Its Open-Label Extension

OBJECTIVE: To evaluate whether eculizumab helps patients with anti-acetylcholine receptor-positive (AChR+) refractory generalized myasthenia gravis (gMG) achieve the Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA) post-intervention status of minimal manifestations (MM), we assessed patients' status throughout REGAIN (Safety and Efficacy of Eculizumab in AChR+ Refractory Generalized Myasthenia Gravis) and its open-label extension. METHODS: Patients who completed the REGAIN randomized controlled trial and continued into the open-label extension were included in this tertiary endpoint analysis. Patients were assessed for the MGFA post-intervention status of improved, unchanged, worse, MM, and pharmacologic remission at defined time points during REGAIN and through week 130 of the open-label study. RESULTS: A total of 117 patients completed REGAIN and continued into the open-label study (eculizumab/eculizumab: 56; placebo/eculizumab: 61). At week 26 of REGAIN, more eculizumab-treated patients than placebo-treated patients achieved a status of improved (60.7% vs 41.7%) or MM (25.0% vs 13.3%; common OR: 2.3; 95% CI: 1.1-4.5). After 130 weeks of eculizumab treatment, 88.0% of patients achieved improved status and 57.3% of patients achieved MM status. The safety profile of eculizumab was consistent with its known profile and no new safety signals were detected. CONCLUSION: Eculizumab led to rapid and sustained achievement of MM in patients with AChR+ refractory gMG. These findings support the use of eculizumab in this previously difficult-to-treat patient population. CLINICALTRIALSGOV IDENTIFIER: REGAIN, NCT01997229; REGAIN open-label extension, NCT02301624. CLASSIFICATION OF EVIDENCE: This study provides Class II evidence that, after 26 weeks of eculizumab treatment, 25.0% of adults with AChR+ refractory gMG achieved MM, compared with 13.3% who received placebo

Minimal Symptom Expression' in Patients With Acetylcholine Receptor Antibody-Positive Refractory Generalized Myasthenia Gravis Treated With Eculizumab

The efficacy and tolerability of eculizumab were assessed in REGAIN, a 26-week, phase 3, randomized, double-blind, placebo-controlled study in anti-acetylcholine receptor antibody-positive (AChR+) refractory generalized myasthenia gravis (gMG), and its open-label extension

Rol de Galectina-1 en la infeccion por Trypanosoma cruzi: Un estudio focalizado en la célula cardíaca, blanco principal del parásito durante la fase crónica de la enfermedad

La Enfermedad de Chagas-Mazza es una de las 17 enfermedades desatendidas según la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se definen como aquellas enfermedades infecciosas que proliferan en entornos empobrecidos, especialmente en los ambientes calurosos y húmedos de los climas tropicales. Sin embargo, deberíamos hacer mas amplio este concepto, porque desatendidas u olvidadas son esas personas, adultos y niños, quienes viven en condiciones precarias de vivienda, alimentación y salud. Padecer esta enfermedad es una triste consecuencia mas de sus carencias socioeconómicas, que refleja la falta de conciencia de nuestra sociedad en general y de nuestros gobiernos, en particular.Fil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Rabinovich, Gabriel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

A loop-mediated is othermal amplification (LAMP) kit for molecular detection of Trypanosoma cruzi dna: A feasibility study

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) tests have been developedas molecular tests for neglected parasitic diseases such as leishmaniasisor sleeping sickness. A LAMP test for Trypanosoma cruzi, the etiologicalagent of Chagas Disease (ChD), would allow a rapid and reliable diagnosis,in particular in cases of acute and congenital ChD (CChD). We evaluatedthe performance a Trypanosoma cruzi LAMP kit using purified DNA, spikedblood and clinical specimens. Quantitative PCR (qPCR) was used as areference. Different extraction methods for LAMP were also evaluated. TheLAMP reaction was performed at 62.5°C for 45 min. Analytical sensitivitywas measured in ten-fold dilutions of CL Brener (TcVI) and Silvio X10(TcI) DNA. Analytical specificity was measured using ten-fold dilutions ofdifferent Leishmania species and Trypanosoma rangeli DNAs as well asnon-infected human DNA. Seronegative blood in EDTA (EB) or heparin (HB)was spiked with ten-fold dilutions of CL Brener. EB spiked blood was alsoused as dried blood spot (DBS). Stored DNA from EB clinical samples wastested, including 4 Congenital ChD cases, 5 Chronic ChD cases with lowparasite loads, 10 immunosuppressed ChD patients and 5 seronegativecontrols. DNA extraction was done with a commercial kit (EB, HB and DBSsamples) and using the boil & spin (B&S) method (HB samples only). TheT. cruzi LAMP kit showed better analytical sensitivity than qPCR in purifiedDNA specimens, especially for TcI DNA. Analytical sensitivity was 10-2 and10-1 par.eq/mL from spiked EB and HB extracted by columns, respectively,and 10-2 par.eq/mL from HB using B&S. The analytical sensitivity in DBSsamples was 10-2 par.eq/mL. T. cruzi LAMP was positive in congenital andimmunosuppressed ChD samples spanning from 4.8 to 3,684 par.eq/ml,in agreement with qPCR. Chronic ChD samples were only detectable byqPCR, with Ct values below the limit of quantification. The kit was specificfor T. cruzi DNA and samples from seropositive patients.Fil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Llano Murcia, Mónica. Pontificia Universidad Javeriana; ColombiaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Curto, Maria de Los Angeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Cruz, Israel. Foundation For Innovative Diagnostics; SuizaFil: Monnerat, Séverine. Foundation For Innovative Diagnostics; SuizaFil: Picado, Albert. Foundation For Innovative Diagnostics; SuizaFil: Puerta, Concepción. Pontificia Universidad Javeriana; ColombiaFil: Ndungu, Joseph. Foundation For Innovative Diagnostics; SuizaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaThe 65th American Society of Tropical Medicine and Hygiene Annual MeetingAtlantaEstados UnidosAmerican Society of Tropical Medicine and Hygien

Different genotypes of Trypanosoma cruzi produce distinctive placental environment genetic response in chronic experimental infection

Congenital infection of Trypanosoma cruzi allows transmission of this parasite through generations. Despite the problematic that this entails, little is known about the placenta environment genetic response produced against infection. We performed functional genomics by microarray analysis in C57Bl/6J mice comparing placentas from uninfected animals and from animals infected with two different T. cruzi strains: K98, a clone of the non-lethal myotropic CA-I strain (TcI), and VD (TcVI), isolated from a human case of congenital infection. Analysis of networks by GeneMANIA of differentially expressed genes showed that “Secretory Granule” was a pathway down-regulated in both infected groups, whereas “Innate Immune Response” and “Response to Interferon-gamma” were pathways up-regulated in VD infection but not in K98. Applying another approach, the GSEA algorithm that detects small changes in predetermined gene sets, we found that metabolic processes, transcription and macromolecular transport were down-regulated in infected placentas environment and some pathways related to cascade signaling had opposite regulation: over-represented in VD and down-regulated in K98 group. We also have found a stronger tropism to the placental organ by VD strain, by detection of parasite DNA and RNA, suggesting living parasites. Our study is the first one to describe in a murine model the genetic response of placental environment to T. cruzi infection and suggests the development of a strong immune response, parasite genotype-dependent, to the detriment of cellular metabolism, which may contribute to control infection preventing the risk of congenital transmission.Fil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Solana, Maria Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Acevedo, Gonzalo Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Ramirez Gomez, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Almeida da Costa, Priscilla. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Macedo, Andrea Mara. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin