Ezrin interacts with the SARS coronavirus spike protein and restrains infection at the entry stage

© 2012 Millet et al. This is an open-access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited.Background: Entry of Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus (SARS-CoV) and its envelope fusion with host cell membrane are controlled by a series of complex molecular mechanisms, largely dependent on the viral envelope glycoprotein Spike (S). There are still many unknowns on the implication of cellular factors that regulate the entry process. Methodology/Principal Findings: We performed a yeast two-hybrid screen using as bait the carboxy-terminal endodomain of S, which faces the cytosol during and after opening of the fusion pore at early stages of the virus life cycle. Here we show that the ezrin membrane-actin linker interacts with S endodomain through the F1 lobe of its FERM domain and that both the eight carboxy-terminal amino-acids and a membrane-proximal cysteine cluster of S endodomain are important for this interaction in vitro. Interestingly, we found that ezrin is present at the site of entry of S-pseudotyped lentiviral particles in Vero E6 cells. Targeting ezrin function by small interfering RNA increased S-mediated entry of pseudotyped particles in epithelial cells. Furthermore, deletion of the eight carboxy-terminal amino acids of S enhanced S-pseudotyped particles infection. Expression of the ezrin dominant negative FERM domain enhanced cell susceptibility to infection by SARS-CoV and S pseudotyped particles and potentiated S-dependent membrane fusion. Conclusions/Significance: Ezrin interacts with SARS-CoV S endodomain and limits virus entry and fusion. Our data present a novel mechanism involving a cellular factor in the regulation of S-dependent early events of infection.This work was supported by the Research Grant Council of Hong Kong (RGC#760208)and the RESPARI project of the International Network of Pasteur Institutes

The HIV Envelope but Not VSV Glycoprotein Is Capable of Mediating HIV Latent Infection of Resting CD4 T Cells

HIV fusion and entry into CD4 T cells are mediated by two receptors, CD4 and CXCR4. This receptor requirement can be abrogated by pseudotyping the virion with the vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSV-G) that mediates viral entry through endocytosis. The VSV-G-pseudotyped HIV is highly infectious for transformed cells, although the virus circumvents the viral receptors and the actin cortex. In HIV infection, gp120 binding to the receptors also transduces signals. Recently, we demonstrated a unique requirement for CXCR4 signaling in HIV latent infection of blood resting CD4 T cells. Thus, we performed parallel studies in which the VSV-G-pseudotyped HIV was used to infect both transformed and resting T cells in the absence of coreceptor signaling. Our results indicate that in transformed T cells, the VSV-G-pseudotyping results in lower viral DNA synthesis but a higher rate of nuclear migration. However, in resting CD4 T cells, only the HIV envelope-mediated entry, but not the VSV-G-mediated endocytosis, can lead to viral DNA synthesis and nuclear migration. The viral particles entering through the endocytotic pathway were destroyed within 1–2 days. These results indicate that the VSV-G-mediated endocytotic pathway, although active in transformed cells, is defective and is not a pathway that can establish HIV latent infection of primary resting T cells. Our results highlight the importance of the genuine HIV envelope and its signaling capacity in the latent infection of blood resting T cells. These results also call for caution on the endocytotic entry model of HIV-1, and on data interpretation where the VSV-G-pseudotyped HIV was used for identifying HIV restriction factors in resting T cells

Quantitative Phosphoproteomics of CXCL12 (SDF-1) Signaling

CXCL12 (SDF-1) is a chemokine that binds to and signals through the seven transmembrane receptor CXCR4. The CXCL12/CXCR4 signaling axis has been implicated in both cancer metastases and human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection and a more complete understanding of CXCL12/CXCR4 signaling pathways may support efforts to develop therapeutics for these diseases. Mass spectrometry-based phosphoproteomics has emerged as an important tool in studying signaling networks in an unbiased fashion. We employed stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC) quantitative phosphoproteomics to examine the CXCL12/CXCR4 signaling axis in the human lymphoblastic CEM cell line. We quantified 4,074 unique SILAC pairs from 1,673 proteins and 89 phosphopeptides were deemed CXCL12-responsive in biological replicates. Several well established CXCL12-responsive phosphosites such as AKT (pS473) and ERK2 (pY204) were confirmed in our study. We also validated two novel CXCL12-responsive phosphosites, stathmin (pS16) and AKT1S1 (pT246) by Western blot. Pathway analysis and comparisons with other phosphoproteomic datasets revealed that genes from CXCL12-responsive phosphosites are enriched for cellular pathways such as T cell activation, epidermal growth factor and mammalian target of rapamycin (mTOR) signaling, pathways which have previously been linked to CXCL12/CXCR4 signaling. Several of the novel CXCL12-responsive phosphoproteins from our study have also been implicated with cellular migration and HIV-1 infection, thus providing an attractive list of potential targets for the development of cancer metastasis and HIV-1 therapeutics and for furthering our understanding of chemokine signaling regulation by reversible phosphorylation

I Congresso Ibero-Americano de Bibliotecas Escolares

Actas de la primera edición del I Congreso Iberoamericano de Bibliotecas Escolares, CIBES 2015, organizado por la Universidad Carlos III de Madrid (España), la Universidad Estatal Paulista (Brasil) y el Ayuntamiento de Getafe (España). Celebrado: 21 - 23 de octubre de 2015 en la Universidad Estatal Paulista (Marília) y 26 - 28 de octubre de 2015 en la Universidad Carlos III de Madrid (Getafe)Universidad Carlos III de Madrid (España)Universidad Estatal Paulista (Brasil)Ayuntamiento de Getafe (España)Dimensiones y visiones de la biblioteca escolar en una Educación por competencias: la necesidad de una política estratégica / Miguel Ángel Marzal. -- Getafe ciudad educadora, lectora y escritora: Bibliotecas escolares / Lourdes Muñoz Santiuste. -- Presente y futuro: biblioteca escolar-CREA y proyectos interdisciplinares / Rosa Piquín. -- Cultura en información: un reto esencial de la biblioteca escolar / Mónica Baró. -- Bibliotecas escolares de Galicia: un mundo de oportunidades a favor de la Educación / Cristina Novoa. -- 10 años de la Red de Bibliotecas Escolares de Extremadura (REBEX) / Casildo Macías Pereira. -- Biblioteca Escolar y uso ético de la información para una Cultura de Paz / Ana Barrero Tíscar. -- Dinamización de la Biblioteca Escolar Plumita durante el curso escolar 2014/15 / María Antonia Cano Cañada. -- Experiencia de la creación de una biblioteca escolar / Susana Santos Martín. -- Grupo cooperativo Bibliotecas escolares en Red-Albacete / José Manuel Garrido Argandoña y Eva Leal Scasso. -- La BCREA "Juan Leiva". El fomento de la lectura desde la web social / Andrés Pulido Villar. -- Proceso de implantación de una herramienta de autoevaluación en la red de bibliotecas escolares de Extremadura (REBEX) / Casildo Macías Pereira. -- La biblioteca escolar: abriendo fronteras / Lorena Verónica Cabrera Orellana. -- O programa RBE e a avaliaçao das bibliotecas escolares: melhoria, desenvolvimiento e innovaçao / Elsa Conde. -- Profesional de Biblioteconomía y Documentación: esencial en la plantilla de la escuela / Pilar del Campo Puerta. -- Una mirada activa al proceso educativo desde la biblioteca escolar / María Jesús Fontela Fernández . -- Con otra mirada "La ilustración como vehículo de comunicación y aprendizaje en las bibliotecas escolares" / Pablo Jurado Sánchez-Galán. -- Fingertips. Recriar a biblioteca escolar na sala de aula / Rui Alfonso Mateus. -- Hablemos de libros. Cómo transformar una clase de literatura en una comunidad de interpretación de textos / Francisco César Díaz Rey. -- Inclusión social de familias inmigrantes a través de un programa de aprendizaje de la lengua castellana / Ana Carmen Tolino Fernández-Henarejos. -- O desenvolvimento de atividades de mediação de leitura em biblioteca escolar: o caso da biblioteca da Escola Sesc de Ensino Médio / Vagner Amaro. -- La biblioteca escolar. Proceso de enseñanza-aprendizaje de padres a hijos / Ana Carmen Tolino Fernández- Henarejos. -- Leo con y para los demás / Ismael Fernández Fernández, Ana María Moreno Vicente y Ana Beatriz Vicente Pérez. -- Nanas y arrullo. Poesía a la deriva / Bernardo Fuentes Navarrete y Carlos García-Romeral Pérez. -- Gestión y evaluación de servicios bibliotecarios para personas con dislexia: una biblioteca escolar inclusiva desde una perspectiva internacional / Carmen Jorge García-Reyes. -- Sueños lectores compartidos hechos realidad: la biblioteca escolar del C.E.I.P-S.E.S-A.A “LA PAZ” de Albacete / Ana Rosa Cabañero Tobarra, Juan Manuel Herráez, Eva Leal Scasso, María Marín Sánchez, Ana Belén Medrano Martínez y María José Nortes Ruipérez. -- El programa biblioteca escuela en Civican. La literatura como elemento motivador para la alfabetización informacional / Villar Arellano Yanguas. -- La competencia digital en el diseño curricular: desde la biblioteca al aula / Felicidad Campal García. -- O deselvomimento da pesquisa escolar por meio da competência em informaçao / Luciane de Fátima Cavalcante Beckman y Marta Leandro da Mata. -- Proyecto escolar de investigación documental "Te pillé leyendo" / José Manuel Garrido Argandoña. -- Aprender com a Biblioteca Escolar: formar para as literacias / Paula Correia y Isabel Mendinhos. -- Sucedió en el siglo XX / María Antonia Becerra Montalbán, Ángel Bernabé Muñoz y Sofía Vaz Romero. -- El Club de lectura en la nube / Belén Benito Blázquez y Ana Ordás García. -- Promover a leitura e a escrita na era digital: prácticas nas bibliotecas escolares / María Raquel Ramos. -- A biblioteca escolar e o desafío da interculturalidade: o projeto Ser + cidadao / María da Conceição Tomé. -- Cuando la competencia digital encontró a la alfabetización informacional o Mucho ruido y pocas nueces / Felicidad Campal García. -- Hora de ler, un programa para el fomento de la lectura en contexto educativo / Cristina Novoa. -- Hábitos de lectura para las competencias en información y alfabetización en información en bibliotecas escolares de Puerto Rico / Karen Denise Centeno Casillas. -- Repositorios digitales en las bibliotecas escolares andaluzas: situación, modelos y herramientas para su creación / Dolores Olmos Olmos y Andrés Pulido Villar. -- Trabajando las competencias clave con las aventuras de Mozarito en Extremadura / María Teresa Carballosa González y María Esther Nieto Vidal. -- Análisis de modelos de evaluación de la web de la biblioteca escolar / Raúl Cremades García. -- Emociónate con las historias: El bosque de las emociones e historias con mucho teatro / Esther Luis Pérez y Ana María Peromingo Fernández. -- Biblioteca escolar de innovación y continuación / E. María Guerrero Palacios y Silvia Mora Ramírez. -- Uso de estándares y licencias para la creación y difusión de contenidos en las bibliotecas escolares / José Luis Barreiro Cebey. -- La biblioteca escolar digital móvil / Javier Fernández Delgado. -- Uso de aplicaciones móviles para el desarrollo de la competencia lingüística. Proyecto Hansel App Gretel / Dolores Olmos Olmos. -- A memória e a mediação segundo Vigotski / Leda Maria Araújo, Patricia Celia Santana, Sueli Bortolin y Leticia Gorri Molina. -- Bibliotecas escolares como tema de estudo dos alunos de graduação em blioteconomia do Instituto de Ensino Superior da FUNLEC: estado da arte / Tiago Pereira Nocera y Rodrigo Pereira. -- Ações de mediação da leitura e da informação em bibliotecas escolares: um olhar sobre as bibliotecas dos Colégios de Aplicação / Tatyanne Christina Gonçalves Ferreira Valdez y Alberto Calil Júnior. -- Mediação pedagógica numa biblioteca de escola pública em Londrina / Rovilson José da Silva, Teba Silva Yllana y Sueli Bortolin. -- Utilização de categorias por cores em sistema de biblioteca voltado ao público infanto-juvenil / Liliana Giusti Serra. -- Atividades de ensino dos atos de leitura com crianças em risco social / Adriana Naomi Fukushima da Silva y Dagoberto Buim Arena. -- Biblioteca escolar: espaço de significados entre alunos, professores e bibliotecários / Rodrigo Barbosa Paulo, Marisa Xavier, Helen Castro Casarin y Creuza Barbaroto. -- A Biblioteca Escolar no Contexto da Legislação e do Processo Educativo / Eliane Lourdes da Silva Moro, Francisca Rosaline Leite Mota y Raimundo Martins de Lima. -- O jornal impresso como fonte de informação: a importância da formação de leitores críticos / Mariana Pícaro Cerigatto. -- Bibliotecas escolares no estado do Rio Grande do Sul: a trajetória de realização dos fóruns gaúchos pela melhoria das bibliotecas escolares / Eliane Lourdes da Silva Moro y Lizandra Brasil Estabel. -- O acesso à informação dos usuários surdos na biblioteca escolar / André Luís Onório Coneglian y Mayara Melo Santana. -- Aprendizagem coletiva de bibliotecários e a competência de pesquisa dos docentes: o caso do Instituto Federal do Espírito Santo / Maristela Almeida Mercandeli Rodrigues y Beatriz Quiroz Villardi. -- Biblioteca escolar: atores, parâmetros e competências / Mavi Galante Mancera Dall´Acqua Carvalho y Claudio Marcondes de Castro Filho. -- Estratégias de aprendizagem de escrita no Ensino Fundamental II / Érika Christina Kohle. -- Bebês e livros: leitura nas bebetecas. Kenia Adriana de Aquino Modesto Silva, Juliane Francischeti Martins Motoyama y Renata Junqueira de Souza. -- Práticas alternativas para organização de acervos nos espaços de leitura em ambientes escolares / Luciana Souza Gracioso, Ariovaldo Alves, Débora Nascimento, Suelen Redondo, Tainara Torika Kiri de Castro, Elizabete Angelon y Eduardo Barbosa. -- Reflexões sobre a modelagem e criação de uma Rede Virtual de Leitores para Bibliotecas Escolares / Carla Floriana Martins y Raoni Guerra Rajão. -- Biblioteca escolar: espaço de formação leitora? / Silvana Ferreira de Souza Balsan y Renata Junqueira de Souza. -- “Se a Biblioteca Escolar é minha mãe, o Google é meu pai”: representações da relação entre Biblioteca Escolar e Google no imaginário de alunos do ensino técnico / Adriana Bogliolo Sirihal-Duarte, Maria L. Amorim Antunes y Raquel Miranda Vilela Paiva. -- Desafios e propostas para a universalização das bibliotecas escolares no Brasil e na Espanha / Rodrigo Pereira, Daniela Spudeit y Fernanda de Sales. -- Bibliotecário educador: possibilidades de atuação no contexto da biblioteca escolar / André Carlos da Silva, Valéria Martin Valls y Mariana de Paula Silva. -- Uma ONG para Bibliotecas Escolares : estratégia para ampliar a igualdade e capacidade de acesso e uso da informação e educação escolar de qualidade / Suelen Camilo Ferreira y Luciana de Souza Gracioso. -- O aluno com deficência: o papel do bibliotecário na disponibilidade de recursos acessíveis na biblioteca escolar / Adriano de Sales Coelho, Rosilene de Melo Oliveira y Marcos Pastana Santos. -- Biblioteca digital virtual e o uso do tablete: uma possibilidade de construção de novas práticas de leitura na escola / Barbara Cibelli da Silva Monteagudo y Dagoberto Buim Arena. -- A importância da biblioteca na educação de crianças de 0 a 3 anos / Yngrid Karolline Mendonça Costa y Cyntia Graziella Guizelim Simões Girotto. -- Comportamento Informacional de adolescentes: a relação com bibliotecas e escolas / Nelson Sebastian Silva-Jerez y Helen de Castro S. Casarin

The role of cytoskeleton and membrane dynamics in HIV-1 entry and infection

Background: In HIV-1 viral fusion and infection, F-actin is required for CD4-co-receptor redistribution in viral cell contact areas, but little is known about the molecular mechanisms un- derlying this fundamental process. We investigated whether HIV-1 Env might promote viral entry by activating ERM (ezrin- radixin-moesin) proteins in a PI4P5-K Ialpha-mediated PIP2 production-dependent manner to regulate F-actin reorganization and CD4/co-receptors clustering and direct interaction. Observations: In this study, we show that HIV-1 virus promotes pore fusion formation and viral infection by inducing PIP2 pro- duction. This process appeared to be mediated by the PI4P5-K Ia kinase. Over-expression of wtPI4P5-K Ia increased HIV-1 Env-mediated PIP2 production and enhanced viral fusion and replication, in permissive lymphocytes. PIP2 production and HIV-1 infection were reduced in cells over-expressing the kinase-dead mutant D227A (D/A)-PI4P5-K Ia, or after knock- down of endogenous PI4P5-K Ia. Moreover, X4-tropic HIV-1 viral fusion and infection required the activation of moesin, an actin adaptor protein of the ERM family, in a PIP2-dependent manner. HIV-1-gp120-induced CD4/CXCR4 association and clustering, occurred during early viral entry, and required moesin-mediat- ed plasma membrane-actin anchoring. Suppression of moesin impeded HIV-1-envelope-mediated F-actin reorganization, CD4/ CXCR4 clustering and interaction, and inhibits HIV-1 entry and infection in lymphocytes. Remarkably, moesin-specific silencing or a dominant-negative construct alters the trafficking of nascent endocytic clatrhin-coated vesicles, which accumulates near the plasma membrane carrying the TfR receptor. Conclusions: · PI4P5-K Ialpha-mediated PIP2 production is involved in the regulation of HIV-1 viral infection. · Moesin is involved in the control of trafficking of CCVs and activated moesin promotes F-actin redistribution and CD4/CXCR4 clus- tering is required for X4-tropic HIV-1 infection in permissive lymphocytes