Caractérisation fonctionnelle de la GTPase Ran dans le cancer épithélial de l'ovaire

Le cancer épithélial de l’ovaire est le plus létal des cancers gynécologiques. Les tumeurs de l’ovaire se divisent en différentes classes reflétant l’étendue de la maladie. Les tumeurs à faible potentiel de malignité présentent une survie relative à 5 ans de 90%, alors que pour les tumeurs invasives, la survie à 5 ans chute drastiquement à 35-40%. Au laboratoire, nous avons précédemment identifié la protéine Ran, un membre de la superfamille des GTPases Ras, comme marqueur fortement exprimé dans les cancers épithéliaux de l’ovaire de haut grade et de haut stade dont la surexpression est associée à un mauvais pronostic. Ran est déjà connue pour contribuer au transport nucléocytoplasmique et à la progression du cycle cellulaire, mais son rôle dans le cancer ovarien n’est pas bien défini. En utilisant une approche de shRNA inductibles à la tétracycline basée sur les lentivirus, nous avons montré que la diminution de l’expression de Ran dans des lignées cellulaires agressives du cancer de l’ovaire affecte drastiquement la prolifération cellulaire par l’induction d’une apoptose caspase-3 dépendante. Par un essai de tumeurs en xénogreffes, nous avons démontré que la déplétion de Ran résulte en une diminution de la tumorigenèse et que la formation éventuelle de tumeurs est associée à une sélection des cellules tumorales ayant la capacité de ré-exprimer la protéine Ran. Ces résultats suggèrent un rôle critique pour Ran dans la survie et la tumorigénicité des cellules du cancer ovarien, indiquant que Ran pourrait être une cible thérapeutique intéressante.Epithelial ovarian cancer (EOC) is the most lethal gynecological cancer. Malignant epithelial tumors can be divided into different classes reflecting the extent of the disease. Low malignant potential (LMP) tumors have a 5 years survival rate of 90-95%. For invasive cancers (TOVs), the survival rate drops dramatically to 35-40%. In the laboratory, we previously identified that Ran protein, a member of the Ras GTPase family, is highly expressed in high grade and high stage serous epithelial ovarian cancers, and that its over-expression is associated with a poor prognosis. Ran is known to contribute to both nucleocytoplasmic transport and cell cycle progression, but its role in ovarian cancer is not well defined. Using a lentivirus-based tetracycline inducible shRNA approach, we show that down-regulation of Ran expression in aggressive ovarian cancer cell lines drastically affects cellular proliferation by inducing a caspase-3 dependent apoptosis. Using a xenograft tumor assay, we demonstrate that depletion of Ran results in decreased tumorigenesis, and eventual tumor formation is associated with the selection of tumor cells able to re-express the Ran protein. These results suggest a critical role for Ran in ovarian cancer cell survival and tumorigenicity and suggest that this critical GTPase may be suitable as a therapeutic target

An essential role for Ran GTPase in epithelial ovarian cancer cell survival

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>We previously identified that Ran protein, a member of the Ras GTPase family, is highly expressed in high grade and high stage serous epithelial ovarian cancers, and that its overexpression is associated with a poor prognosis. Ran is known to contribute to both nucleocytoplasmic transport and cell cycle progression, but its role in ovarian cancer is not well defined.</p> <p>Results</p> <p>Using a lentivirus-based tetracycline-inducible shRNA approach, we show that downregulation of Ran expression in aggressive ovarian cancer cell lines affects cellular proliferation by inducing a caspase-3 associated apoptosis. Using a xenograft tumor assay, we demonstrate that depletion of Ran results in decreased tumorigenesis, and eventual tumor formation is associated with tumor cells that express Ran protein.</p> <p>Conclusion</p> <p>Our results suggest a role for Ran in ovarian cancer cell survival and tumorigenicity and suggest that this critical GTPase may be suitable as a therapeutic target.</p

In-line near infrared monitoring of esterification of a molten ethylene-vinyl alcohol copolymer in a twin screw extruder

International audienc

Avis de l'Anses relatif à « une évaluation de la pertinence de la poursuite de la stratégie d’éradication du petit coléoptère des ruches Aethina tumida à La Réunion et de ses évolutions possibles suite à la contamination du réservoir sauvage.

Ciattion suggérée : Anses. (2023). Avis relatif une évaluation de la pertinence de la poursuite de la stratégie d’éradication du petit coléoptère des ruches Aethina tumida à La Réunion et de ses évolutions possibles suite à la contamination du réservoir sauvage (Saisine 2023-SA-0122). Maisons-Alfort : Anses, 21 p.Le 5 juillet 2022, un foyer a été confirmé dans un rucher sur l’île de La Réunion, sur la commune de Saint-Pierre. Suite à sa détection, la DAAF974 (Direction de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Forêt de l’île de La Réunion) avait immédiatement mis en œuvre les mesures prévues par l’arrêté du 23 décembre 2009 dans un objectif d’éradication de ce ravageur de l’Abeille mellifère. Onze autres foyers ont ensuite été identifiés, toujours au sud de l'île, puis confirmés sur les communes de Saint-Philippe et de Saint-Joseph. Dans ce contexte d’émergence de ce danger sanitaire sur une île française jusqu’alors indemne, l’avis de l’Anses avait été sollicité en urgence sur la stratégie de lutte, l’endémisation du parasite, l’impact du réservoir sauvage, l’objectif d’éradication, l’objectif de contrôle et cantonnement, sur les modalités pratiques échantillonnage, taux de prévalence cible, fréquence des visites) de la mise en place d’une surveillance programmée au sein des zones réglementées (zone de protection - ZP - et zone de surveillance - ZS) et sur le reste du territoire de l’île, et sur le risque d’introduction d’A. tumida en France métropolitaine et (3) sur des stratégies de prévention actualisées sur la base d’une revue bibliographique. Les éléments d’appui à cette saisine ont été matérialisés, par une synthèse des éléments d’ores et déjà disponibles à date de la saisine et apportés dès l’accusé de réception du 11 août 2022, par les réponses à ces questions dans deux avis de l’Anses question 1, Anses 2022a, puis questions 2 et 3, Anses 2022b) et par la note d’appui scientifique et technique (AST) 2022-SA-0141 (Anses 2022c).Le 3 février 2023, un treizième foyer d’A. tumida a été identifié dans la ZP de Saint-Philippe etl’Anses a été saisie le 27 février pour notamment « mettre à jour l’avis 2022-SA-0141 afin deréévaluer la possibilité d’éradication du petit coléoptère des ruches sur l’Île de La Réunion etactualiser les recommandations visant à favoriser la réussite de la stratégie d’éradication ».L’avis 2023-SA-0051 (Anses 2023) a été rendu le 17 mars 2023.Les 3 et 28 avril 2023, les quatorzième et quinzième foyers d’A. tumida ont été confirmés dansdes ruchers domestiques dans la ZS de Saint-Philippe suite à des déclarations de la part deprofessionnels. Trois colonies sauvages ont également été confirmées infestées, le 30 mai(deux colonies, 16ème et 17ème foyer) et le 12 juin 2023 (une colonie, 18ème foyer).Dans ce contexte, l’avis de l’Anses est sollicité en urgence pour répondre aux questionssuivantes :« Question 1 : Au regard des résultats de la surveillance, évaluer si la découverte de trois ruchers positifs en 2023 et d’essaims sauvages contaminés à l’intérieur de la zone réglementée plus de huit mois après l’assainissement des 12 premiers foyers conduit à remettre en cause la stratégie d’éradication.Question 2 : Dans le cas où la stratégie d’éradication est abandonnée, la gestion de la maladie incombe à la filière conformément aux dispositions de la loi santé animale. Dans ce cas, quelles seraient les mesures de surveillance et de gestion à prévoir, à court, moyen et long termes. Présenter pour la filière apicole réunionnaise, des recommandations relatives tant aux modalités de gestion des ruchers infestés qu'aux adaptations des pratiques apicoles, que ce soit au niveau individuel ou collectif, à apporter pour « vivre avec » Aethina tumida tout en maintenant une activité économique. ».La réponse à la première question fait l’objet du présent avis. La seconde question ne relèvepas d’un traitement par un groupe d’expertise collective dédié à une évaluation de risquessanitaires en urgence (Gecu)[ Saisine liée n°2022-SA-0141 et n°2023-SA-0051

PUMA and NOXA Expression in Tumor-Associated Benign Prostatic Epithelial Cells Are Predictive of Prostate Cancer Biochemical Recurrence

Background: Given that treatment decisions in prostate cancer (PC) are often based on risk, there remains a need to find clinically relevant prognostic biomarkers to stratify PC patients. We evaluated PUMA and NOXA expression in benign and tumor regions of the prostate using immunofluorescence techniques and determined their prognostic significance in PC. Methods: PUMA and NOXA expression levels were quantified on six tissue microarrays (TMAs) generated from radical prostatectomy samples (n = 285). TMAs were constructed using two cores of benign tissue and two cores of tumor tissue from each patient. Association between biomarker expression and biochemical recurrence (BCR) at 3 years was established using log-rank (LR) and multivariate Cox regression analyses. Results: Kaplan&ndash;Meier analysis showed a significant association between BCR and extreme levels (low or high) of PUMA expression in benign epithelial cells (LR = 8.831, p = 0.003). Further analysis revealed a significant association between high NOXA expression in benign epithelial cells and BCR (LR = 14.854, p &lt; 0.001). The combination of extreme PUMA and high NOXA expression identified patients with the highest risk of BCR (LR = 16.778, p &lt; 0.001) in Kaplan&ndash;Meier and in a multivariate Cox regression analyses (HR: 2.935 (1.645&ndash;5.236), p &lt; 0.001). Conclusions: The combination of PUMA and NOXA protein expression in benign epithelial cells was predictive of recurrence following radical prostatectomy and was independent of PSA at diagnosis, Gleason score and pathologic stage

Immunohistochemical profiling of benign, low malignant potential and low grade serous epithelial ovarian tumors

Abstract Background Serous epithelial ovarian tumors can be subdivided into benign (BOV), low malignant potential (LMP) or borderline and invasive (TOV) tumors. Although the molecular characteristics of serous BOV, LMP and low grade (LG) TOV tumors has been initiated, definitive immunohistochemical markers to distinguish between these tumor types have not been defined. Methods In the present study, we used a tissue array composed of 27 BOVs, 78 LMPs and 23 LG TOVs to evaluate the protein expression of a subset of selected candidates identified in our previous studies (Ape1, Set, Ran, Ccne1 and Trail) or known to be implicated in epithelial ovarian cancer disease (p21, Ccnb1, Ckd1). Results Statistically significant difference in protein expression was observed for Ccnb1 when BOV tumors were compared to LMP tumors (p = 0.003). When BOV were compared to LG TOV tumors, Trail was significantly expressed at a higher level in malignant tumors (p = 0.01). Expression of p21 was significantly lower in LG tumors when compared with either BOVs (p = 0.03) or LMPs (p = 0.001). We also observed that expression of p21 was higher in LMP tumors with no (p = 0.02) or non-invasive (p = 0.01) implants compared to the LMP associated with invasive implants. Conclusion This study represents an extensive analyse of the benign and highly differentiated ovarian disease from an immunohistochemical perspective.</p

RAN Nucleo-Cytoplasmic Transport and Mitotic Spindle Assembly Partners XPO7 and TPX2 Are New Prognostic Biomarkers in Serous Epithelial Ovarian Cancer

<div><p>Purpose</p><p>Epithelial ovarian cancer has the highest mortality rate of all gynecological malignancies. We have shown that high RAN expression strongly correlates with high-grade and poor patient survival in epithelial ovarian cancer. However, as RAN is a small GTPase involved in two main biological functions, nucleo-cytoplasmic transport and mitosis, it is still unknown which of these functions associate with poor prognosis.</p><p>Methods</p><p>To examine the biomarker value of RAN network components in serous epithelial ovarian cancer, protein expression of six specific RAN partners was analyzed by immunohistochemistry using a tissue microarray representing 143 patients associated with clinical parameters. The RAN GDP/GTP cycle was evaluated by the expression of RANBP1 and RCC1, the mitotic function by TPX2 and IMPβ, and the nucleo-cytoplasmic trafficking function by XPO7, XPOT and IMPβ.</p><p>Results</p><p>Based on Kaplan-Meier analyses, RAN, cytoplasmic XPO7 and TPX2 were significantly associated with poor overall patient survival, and RAN and TPX2 were associated with lower disease free survival in patients with high-grade serous carcinoma. Cox regression analysis revealed that RAN and TPX2 expression were independent prognostic factors for both overall and disease free survival, and that cytoplasmic XPO7 expression was a prognostic factor for overall patient survival.</p><p>Conclusions</p><p>In this systematic study, we show that RAN and two protein partners involved in its nucleo-cytoplasmic and mitotic functions (XPO7 and TPX2, respectively) can be used as biomarkers to stratify patients based on prognosis. In particular, we reported for the first time the clinical relevance of the exportin XPO7 and showed that TPX2 expression had the strongest prognostic value. These findings suggest that protein partners in each of RAN’s functions can discriminate between different outcomes in high-grade serous epithelial ovarian cancer patients. Furthermore, these proteins point to cellular processes that may ultimately be targeted to improve the survival in serous epithelial ovarian cancer.</p></div

Potential Cross-Talk between Alternative and Classical NF-κB Pathways in Prostate Cancer Tissues as Measured by a Multi-Staining Immunofluorescence Co-Localization Assay

<div><p>Background</p><p>While the classical NF-κB/p65 pathway is known to be involved in prostate cancer progression and is associated with poor patient outcome, the role of the NF-κB /RelB alternative protein is not well defined. Here we analyzed the activation of both NF-κB pathways in prostate cancer tissues and correlate this activation with clinical features of the disease.</p><p>Methods</p><p>A multiple immunofluorescence technique was employed to concomitantly and quantitatively visualize the nuclear localization of p65 and RelB in 200 paraffin embedded samples. Epithelia were defined using appropriate fluorochrome markers and the resulting immunofluorescent signals were quantified with an automated scoring system.</p><p>Results</p><p>The nuclear frequency of p65 was found to be significantly increased in tumor tissues as compared with normal adjacent tissue, whereas the frequency for RelB was decreased (p < 0.001, Wilcoxon test). As previously reported, p65 nuclear frequency was associated with a risk of biochemical recurrence. Although, RelB nuclear frequency alone did not predict recurrence, the presence of activated RelB reduced the risk of recurrence associated with the activation of p65.</p><p>Conclusion</p><p>For the first time p65/RelB co-distribution was assessed in prostate cancer tissues and suggested a negative crosstalk between the two NF-κB pathways in prostate cancer progression.</p></div