Az intracelluláris XIII-as faktor lehetséges szerepe a monocita/makrofág sejtvonalban = The possible role of Factor XIII in monocytes/macrophages

Ismert tény, hogy a véralvadás XIII-as faktorának A alegysége (FXIII-A) a monocita/makrofág sejtvonalban is szintetizálódik, de a sejtekből nem szekretálódik. A FXIII-A intracelluláris lokalizációja és szubsztrát profilja alapján feltehetően szerepet játszik intracelluláris folyamatokban is. Humán monocita kultúrákon, különböző aktiváló ágensek (interleukin 4, interferon gamma, Mycobacterium bovis) jelenlétében elvégzett vizsgálataink igazolták, hogy klaszikus és alternatív aktiváció során a FXIII-A gén expressziója (mRNS és fehérje szinten egyaránt) ellentétesen szabályozódik. A FXIII-A gén expressziójának jellemzése érdekében FXIII-A deficiens és egészséges egyének alternatív úton aktivált monocita-eredetű makrofágjainak expressziós profilját hasonlítottuk össze microarray vizsgálatokkal. Cytoscape/BiNGO and Ingenuity Pathways Analysis programokkal elvégeztük az eltérően expresszálódó gének funkcionális csoportosítását. Eredményeink igazolták, hogy a FXIII-A fontos szerepet játszik a makrofágok alternatív aktivációja során lejátszódó génexpressziós változásokban. A FXIII-A hiányában a legmarkánsabb génexpressziós eltérések az immunfunkciókban és a sebgyógyulásban szerepet játszó gének körében jelentkeznek. | It is known that Factor XIII subunit A of blood coagulation (FXIII-A) is synthesized but not secreted by the monocyte/macrophage cell line. On the basis of its intracellular localization and substrate-profile FXIII-A is thought to be involved in certain intracellular processes. Our study in long term culture of human monocytes during their differentiation into macrophages in the presence of activating agents (interleukin 4, interferon gamma, Mycobacterium bovis) inducing the classical and alternative activation pathways clearly showed that the expression of FXIII-A both at the mRNA as well as the protein level is inversely regulated during the two activation programmes. To characterize the effect of FXIII-A on gene expression microarray profiles of alternatively activated monocyte-derived macrophages of FXIII-A deficient patients and healthy controls were compared and functional clustering of the differently expressed genes was carried out by using Cytoscape/BiNGO and Ingenuity Pathways Analysis programs. Our results revealed that FXIII-A has important role(s) in mediating gene expression changes in macrophages during alternative activation. In the absence of FXIII-A, the most prominent differences are related to immune functions and to wound response

Genomiális eltérések és génexpresszió közötti kapcsolat vizsgálata, melanomák metasztázisképzésre jellemző genetikai markerek kutatása = Association between genomic alterations and gene expression, search for genetic markers in association with melanoma metastasis formation

A projekt keretében melanomák genom és génexpressziós eltéréseit analizáltuk. Q-PCR-el gyakori mutációt találtunk a BRAF és NRAS onkogénekre. BRAF mutációval asszociálódott jellegzetes eltérések a 7p22, 7q21, 7q31 szakaszok többlete és a 10q21, 10q26 lókuszok vesztése voltak. Hierachikus klaszter analizissel két jellegzetes molekuláris alosztályt figyeltünk meg, amely a kevésbé aggresszív tumoroktól az agresszív daganatokat egyértelműen elválasztották. 1095 eltérő expressziójú gén az ulcerációval asszociálódott. Közülük 1021 gén alulregulált volt a rosszprognózisú csoportban, és érdekes, hogy ugyanezek a gének magas expressiójuak voltak a másik csoportban. Metasztázisok génexpressziója az ulcerációval mutatott azonos mintázatot. Az ulcerált felszínű melanomákban csökkent expressziójú gének funkcióját vizsgálva kimutattuk, hogy többségük a bőr- és szőrfejlődési funkció, dermatológiai betegségek, daganatfejlődés, sejtosztódás a sejtciklus, sejt-sejt interakció és sejtmotilitás szabályozó folyamatokhoz tartozik, a p53, ERK/MAP, IP3/AKT és WNT/? katenin, Nf-?B molekulási útvonalakon hatva. Interfázisos FISH analízissel kimutattuk, hogy az EGFR génkópiaszám többlete, primer melanomákban rossz prognózissal társul. A 9p21-es lokusz delécióját mind a korai, mind a késői melanomákban megfigyeltük. Nem találtunk szoros korrelációt a 9p21-es lokusz genetikai eltérései és a daganatok klinikopatológiai tulajdonságai között. | Within the framework of this project using Q-PCR we found frequent mutation of the BRAF and NRAS oncogenes in primary melanomas. Genom alterations exclusively associated with BRAF mutation were gains of 7p22, 7q21, 7q31, and losses of 10q21, 10q26. Unsupervised cluster analysis of geneexpression data revealed two characteristic molecular subclasses of melanoma, segregating aggressive tumors from less aggressive ones. Differentially expressed genes (1095) were associated with ulceration. Majority these (1021) were downregulated in subclass with bad prognosis and upregulated in the less aggressive group. Geneexpression signature of metastastases displayed similar signature, majority of the genes defined for the ulcerated lesions showed reduced expression in metastatic tumors. Using functional annotations five networks were identified belonging into the hair and skin development-, cancer-, cellular growth- and proliferation and affect the p53, Wnt/?-catenin and Nf-?B signaling pathways. By FISH we demonstrated that elevated copies of EGFR gene is associated with poor prognosis. Outcome of patients whose primary tumors had highly amplified EGFR gene was poor. Correlation between the gene amplification, mRNA level and protein expression was not linear. 9p21 deletion was present in early and late stages of the disease with similar frequency. We could not find strong correlation the 9p21 status of melanomas and the patients? clinical parameters

Cannabinoids Enriched Extracts from Industrial Hemp Residues

Obtaining phytocannabinoids, associated with various medicinal and therapeutic properties with no reported side effects, is one of the hot topics. The phychotropic Δ9-tetrahydrocannabinol (THC) is less than 0.2 % in industrial cultivars therefore can be grown legally in many EU countries. Harvesting and processing of hemp for fiber or seeds generates large amount of wastes containing substantial amounts of bioactives such as cannabidiol (CBD) which are the primary cannabinoids along with cannabidiolic acid (CBDA), cannabinol (CBN), cannabigerol (CBG), and cannabichromene (CBC). The aim of this work was to optimize the extraction of cannabinoids from industrial hemp threshing residue using supercritical carbon dioxide extraction in pilot scales. The effects of extraction pressure and temperature on the extraction yield were evaluated. Three ground and pelleted samples of the same type but with different harvesting time were also compared. After derivatization of the samples the cannabinoids and the minor THCs were quantified by GC-MS. The extraction yields were between 0.2 – 6.59 g/100 g dry mass depending on the source of hemp residue and on the process parameters of the extraction process. By increasing the pressure of extraction (in the range of 25-45 MPa at 45 °C) the extraction yields increased, meanwhile the yields of cannabinoids showed no significant increase. The volatile compounds were successfully separated from the cannabinoids with fractionated separation. From hemp threshing residues essential oil free extracts with high content of cannabinoids were obtained at 35 MPa extraction pressure and 45 °C temperature setting the first separator at 8 MPa and 40 °C.&nbsp