Mouse Hepatitis Coronavirus RNA Replication Depends on GBF1-Mediated ARF1 Activation

Coronaviruses induce in infected cells the formation of double membrane vesicles, which are the sites of RNA replication. Not much is known about the formation of these vesicles, although recent observations indicate an important role for the endoplasmic reticulum in the formation of the mouse hepatitis coronavirus (MHV) replication complexes (RCs). We now show that MHV replication is sensitive to brefeldin A (BFA). Consistently, expression of a dominant-negative mutant of ARF1, known to mimic the action of the drug, inhibited MHV infection profoundly. Immunofluorescence analysis and quantitative electron microscopy demonstrated that BFA did not block the formation of RCs per se, but rather reduced their number. MHV RNA replication was not sensitive to BFA in MDCK cells, which are known to express the BFA-resistant guanine nucleotide exchange factor GBF1. Accordingly, individual knockdown of the Golgi-resident targets of BFA by transfection of small interfering RNAs (siRNAs) showed that GBF1, but not BIG1 or BIG2, was critically involved in MHV RNA replication. ARF1, the cellular effector of GBF1, also appeared to be involved in MHV replication, as siRNAs targeting this small GTPase inhibited MHV infection significantly. Collectively, our results demonstrate that GBF1-mediated ARF1 activation is required for efficient MHV RNA replication and reveal that the early secretory pathway and MHV replication complex formation are closely connected

Mise en place d'une base de données Acess® au sein du Centre National de référence Bernard Pépin pour la maladie de Wilson (évaluation de la relation génotype/phénotype chez 75 patients wilsoniens)

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Statut nutritionnel en éléments traces essentiels (cuivre, manganèse, sélénium, zinc) chez des enfants souffrants de maladie coeliaque ou de maladie de Crohn (dosages sériques et analyse capillaire par SAAE et ICP-OES)

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Intérêt du dosage du cuivre échangeable et du calcul du REC dans le diagnostic différentiel et le suivi de la maladie de Wilson

La maladie de Wilson est une affection génétique rare, causée par des mutations du gène codant pour la protéine ATP7B et entraînant une surcharge en cuivre. L'échappement au diagnostic empêche l'instauration d'un traitement, menant à des dommages irréversibles et à plus long terme à la mort. Or la mise au point récente à Paris par l'équipe du docteur El Balkhi du dosage d'une fraction du cuivre plasmatique, le cuivre échangeable, semble constituer, avec le calcul du REC (rapport cuivre échangeable / cuivre sérique total), un argument supplémentaire et pertinent dans le diagnostic et le suivi de la maladie de Wilson. L'objectif de ce travail a donc été d'adapter cette technique à Lyon, et de questionner l'intérêt du dosage du cuivre échangeable et du calcul du REC dans le diagnostic et le suivi des patients wilsoniens, face aux autres outils couramment utilisés. Dans un premier temps, notre travail a consisté en la mise au point et la validation de la technique de dosage du cuivre échangeable. Dans un second temps, nous avons mené deux études cliniques. La première, réalisée sur un total de 268 sujets, a porté sur le diagnostic différentiel de la maladie de Wilson avec d'autres hépatopathies. La deuxième étude s'est intéressée plus spécifiquement au suivi de deux patients wilsoniens. A l'issue de nos travaux, nous avons montré que le REC et le cuivre échangeable sont de très bons marqueurs de diagnostic et de suivi thérapeutique respectivement (en cas de transplantation hépatique réalisée suite à un traitement médicamenteux au long cours, c'est le REC qui est le mieux adapté pour le suivi). Le dosage du cuivre échangeable ainsi que le calcul du REC font ainsi désormais partie du faisceau d'arguments utilisés pour le diagnostic et le suivi thérapeutique de la maladie de Wilson dans le cadre du Centre de Référence WilsonLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Passage des éléments traces essentiels et métaux toxiques dans le lait maternel

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Prise en charge des patients wilsoniens traités par les sels de zinc (intérêt du cuivre échangeable pour le suivi du traitement)

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Apport de la biologie et de la génétique moléculaire au diagnostic de la maladie de Wilson

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Neurological Wilson's disease lethal for the son, asymptomatic in the father.

International audienc

Neurological Wilson's disease lethal for the son, asymptomatic in the father.

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Dietary copper and human health: Current evidence and unresolved issues

International audienceAbstractAlthough copper (Cu) is recognized as an essential trace element, uncertainties remain regarding Cu reference values for humans, as illustrated by discrepancies between recommendations issued by different national authorities. This review examines human studies published since 1990 on relationships between Cu intake, Cu balance, biomarkers of Cu status, and health. It points out several gaps and unresolved issues which make it difficult to assess Cu requirements. Results from balance studies suggest that daily intakes below 0.8 mg/day lead to net Cu losses, while net gains are consistently observed above 2.4 mg/day. However, because of an incomplete collection of losses in all studies, a precise estimation of Cu requirements cannot be derived from available data. Data regarding the relationship between Cu intake and potential biomarkers are either too preliminary or inconclusive because of low specificity or low sensitivity to change in dietary Cu over a wide range of intakes. Results from observation and intervention studies do not support a link between Cu and a risk of cardiovascular disease, cognitive decline, arthritis or cancer for intakes ranging from 0.6 to 3 mg/day, and limited evidence exists for impaired immune function in healthy subjects with a very low (0.38 mg/day) Cu intake. However, data from observation studies should be regarded with caution because of uncertainties regarding Cu concentration in various foods and water. Further studies that accurately evaluate Cu exposure based on reliable biomarkers of Cu status are needed