New proteoliposome vaccine formulation from N. meningitidis serogroup B, without aluminum hydroxide, retains its antimeningococcal protectogenic potential as well as Th-1 adjuvant capacity

Proteoliposomes purified from the Outer Membrane of Neisseria meningitidis B, have been successfully used as core for adjuvants and vaccine formulations. We have tried to increase their structural definition and to conserve their efficacy and stability avoiding the addition of the aluminum hydroxide to the final formulation. Liposomal particle systems were prepared from components of defined molecular structure, such as a Neisseria meningitidis B protein complex, extracted and purified without forming vesicle structures. Liposomes were prepared from a mixture of dioleoyl phosphatidyl serine and cholesterol, using the classical dehydration-rehydration method. Transmission Electron Microscopy (TEM) was used to characterize the liposomes. BALB/c mice were used for animal testing procedures. Analysis of specific IgG response, serum bactericidal activity as well as DTH reaction was carried out. Isolation and purification of mRNA and real-time PCR, was performed to determine the dominating Th lymphokine pattern. The new antimeningococcal formulation without aluminum hydroxide prepared with components of defined molecular structure assembled itself into Neoproteoliposomes (NPL) ranging from 50 to 70 nm in diameter. The extraction and purification of selected membrane proteins to provide the antigen for this new formulation (PD-Tp), as well as the NPL-formulation favors a Th1 response pattern, suggested by the higher percentages of DTH, increased expression of proinflamatory lymphokine mRNAs when administered by intramuscular and intranasal routes. It stimulates a systemic bactericidal antibody response against Neisseria meningitidis B and immunologic memory similar to the Cuban VA-MENGOC-BC(®) vaccine, even at lower dosages and is less reactogenic at the injection site in comparison with the formulation with aluminum hydroxide. This new adjuvant formulation could be applicable to the development of new and improved vaccines against meningococcal disease, and eventually as modulators of the immune response against other diseases

Cochleates derived from Vibrio cholerae O1 proteoliposomes : The impact of structure transformation on mucosal immunisation

Cochleates are phospholipid-calcium precipitates derived from the interaction of anionic lipid vesicles with divalent cations. Proteoliposomes from bacteria may also be used as a source of negatively charged components, to induce calcium-cochleate formation. In this study, proteoliposomes from V. cholerae O1 (PLc) (sized 160.7±1.6 nm) were transformed into larger (16.3±4.6 µm) cochleate-like structures (named Adjuvant Finlay Cochleate 2, AFCo2) and evaluated by electron microscopy (EM). Measurements from transmission EM (TEM) showed the structures had a similar size to that previously reported using light microscopy, while observations from scanning electron microscopy (SEM) indicated that the structures were multilayered and of cochleate-like formation. The edges of the AFCo2 structures appeared to have spaces that allowed penetration of negative stain or Ovalbumin labeled with Texas Red (OVA-TR) observed by epi-fluorescence microscopy. In addition, freeze fracture electron microscopy confirmed that the AFCo2 structures consisted of multiple overlapping layers, which corresponds to previous descriptions of cochleates. TEM also showed that small vesicles co-existed with the larger cochleate structures, and in vitro treatment with a calcium chelator caused the AFCo2 to unfold and reassemble into small proteoliposome-like structures. Using OVA as a model antigen, we demonstrated the potential loading capacity of a heterologous antigen and in vivo studies showed that with simple admixing and administration via intragastric and intranasal routes AFCo2 provided enhanced adjuvant properties compared with PLc

Bactericide serum assay to assess the immune response induced by meningococcal and cholera vaccines

La susceptibilidad al sistema bactericida del suero es una característica de las bacterias gramnegativas. Existen muchos ejemplos en las enterobacterias, de hecho cualquier procariote que presente una membrana lipídica pudiera ser potencialmente susceptible a la lisis mediada por anticuerpos dependiente del complemento, aunque existen cepas que muestran resistencia al sistema bacteriolítico. Estas son frecuentemente aisladas como agente causal de infecciones que involucran daño tisular, lo que indica que la resistencia a la actividad lítica del suero es determinante de la virulencia en algunas infecciones debido a bacterias gramnegativas. Para algunas enfermedades causadas por estas bacterias la vacunación constituye la medida de prevención más efectiva, como es el caso del cólera y la enfermedad meningocócica. La inducción de anticuerpos con capacidad lítica, producto de la vacunación, se considera en muchos casos el mejor correlato con la protección y se estima que individuos que desarrollan anticuerpos bactericidas, ya sea por una infección clínica o por la vacunación, están protegidos contra la infección o la enfermedad. De ahí que el ensayo bactericida del suero sea la prueba de oro para evaluar la eficacia de muchas vacunas. Ensayos clínicos llevados a cabo con vacunas contra los serogrupos A, B, C, Y y W 135 de N. meningitidis y con vacunas de cólera, ya sean vivas atenuadas o inactivadas, han demostrado la inducción de anticuerpos con actividad lítica que luego han correlacionado con la protección en ensayos de eficacia o frente a un reto experimental. Por lo que resulta imprescindible la estandarización y validación de estos ensayos para su empleo como criterio de inmunogenicidad en el desarrollo de estas vacunas

Consideraciones sobre el empleo de antisueros somáticos en la clasificación por serotipos de cepas de Pseudomonas aeruginosa

El lipopolisacárido (LPS) de bacterias gramnegativas se emplea en el desarrollo de candidatos vacunales, como antígeno expuesto en la preparación o formando parte de esta para aumentar su poder inmunogénico. Sin embargo, esta estructura química de la membrana externa puede ser también utilizada para clasificar bacterias. Según el LPS, presente en la membrana externa bacteriana, Pseudomonas aeruginosa se puede clasificar en 20 tipos somáticos diferentes, clasificación muy útil para estudios epidemiológicos. P. aeruginosa expone sus LPS en la membrana de forma estable, pero ocurren cambios en el fenotipo del LPS bacteriano durante la infección, sucesos que dificultan su clasificación. En estos momentos, los estudios que se desarrollan en el Instituto Finlay necesitan del empleo de tecnologías modernas de clasificación y del diagnóstico molecular para poder establecer patrones más precisos de expresión de los LPS por métodos que junto a los ya existentes permitan diferenciar cepas bacterianas de la misma especie en cualquier tipo de infección

New proteoliposome vaccine formulation from N. meningitidis serogroup B, without aluminum hydroxide, retains its antimeningococcal protectogenic potential as well as Th-1 adjuvant capacity

Proteoliposomes purified from the Outer Membrane of Neisseria meningitidis B, have been successfully used as core for adjuvants and vaccine formulations. We have tried to increase their structural definition and to conserve their efficacy and stability avoiding the addition of the aluminum hydroxide to the final formulation. Liposomal particle systems were prepared from components of defined molecular structure, such as a Neisseria meningitidis B protein complex, extracted and purified without forming vesicle structures. Liposomes were prepared from a mixture of dioleoyl phosphatidyl serine and cholesterol, using the classical dehydration-rehydration method. Transmission Electron Microscopy (TEM) was used to characterize the liposomes. BALB/c mice were used for animal testing procedures. Analysis of specific IgG response, serum bactericidal activity as well as DTH reaction was carried out. Isolation and purification of mRNA and real-time PCR, was performed to determine the dominating Th lymphokine pattern. The new antimeningococcal formulation without aluminum hydroxide prepared with components of defined molecular structure assembled itself into Neoproteoliposomes (NPL) ranging from 50 to 70 nm in diameter. The extraction and purification of selected membrane proteins to provide the antigen for this new formulation (PD-Tp), as well as the NPL-formulation favors a Th1 response pattern, suggested by the higher percentages of DTH, increased expression of proinflamatory lymphokine mRNAs when administered by intramuscular and intranasal routes. It stimulates a systemic bactericidal antibody response against Neisseria meningitidis B and immunologic memory similar to the Cuban VA-MENGOC-BC (R) vaccine, even at lower dosages and is less reactogenic at the injection site in comparison with the formulation with aluminum hydroxide. This new adjuvant formulation could be applicable to the development of new and improved vaccines against meningococcal disease, and eventually as modulators of the immune response against other diseases.This study was in part supported by the agreements of collaboration between the Madrid Autonomic University, Spain and the Havana University, Cuba.Peer Reviewe

Sistema de Lotes de Siembra de la cepa vacunal Vibrio cholerae 638

En la producción de biológicos, especialmente en aquellos obtenidos a partir de microorganismos, resulta imprescindible contar con un suministro de células caracterizado y estable, como punto de partida para la producción. El concepto de Sistema de Lotes de Siembra en dos niveles, en el cual el Lote de Siembra de Referencia es usado para generar el Lote de Siembra de Trabajo, es considerado el enfoque más práctico para lograr este propósito. En este trabajo se elaboraron los Lotes de Siembra de Referencia y de Trabajo de la cepa vacunal Vibrio cholerae 638, primera etapa de la fabricación de una vacuna contra el cólera, cumpliendo con los requerimientos de Buenas Prácticas de Producción (BPP), lo que constituye una exigencia de las autoridades regulatorias nacionales e internacionales. La caracterización de los lotes demostró que se lograron adecuados niveles de viabilidad y se conservaron inalterables las características de la cepa original en cuanto a identidad, pureza, atenuación de su virulencia, capacidad de colonizar el intestino delgado de ratones lactantes y de inducir una respuesta inmune

Seguridad, reactogenicidad e inmunogenicidad de una nueva vacuna de polisacáridos meningocócicos en adultos jóvenes cubanos

Se realizó un estudio aleatorizado, controlado y a doble ciegas, en 352 adultos jóvenes cubanos entre 18 y 35 años de edad, con el objetivo de evaluar la seguridad, reactogenicidad y la inmunogenicidad de una nueva vacuna de polisacáridos de Neisseria meningitidis serogrupos A, C y W135, producida por el Instituto Finlay de Vacunas (La Habana, Cuba), con respecto a su similar comercial Mencevax® ACW de Glaxo Smith Kline. Se tomaron muestras de suero antes y 28 días después de la vacunación. La reactogenicidad de ambas vacunas fue similar. Los síntomas y signos, tanto locales como generales fueron leves y aparecieron principalmente durante las primeras 48 h después de la vacunación. Ningún sujeto presentó eventos adversos graves durante los 28 días del período de vigilancia. La vacuna en estudio mostró ser segura y poco reactogénica; sus porcentajes de seroconversión a los 28 días posteriores a la vacunación fueron de: 92,19 % para el serogrupo A, 88,89 % para C y 90,06 % para W135. No se detectaron diferencias con respecto a la seroconversión. La seroprotección alcanzada con la vacuna en estudio fue de 98,44 %, 91,81 % y 95,32 % para los serogrupos A, C y W135 respectivamente y no fue inferior con respecto a la vacuna control para los tres serogrupos estudiados

Evaluación en animales del efecto protector de una inmunoglobulina anti Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico

Pseudomonas aeruginosa constituye uno de los agentes patógenos oportunistas de mayor frecuencia de aislamiento en los diversos procesos infecciosos, por lo que es reconocido como un gran problema de salud a nivel mundial. Al no existir un fármaco de alta efectividad ni vacunas disponibles contra esta bacteria, se emplea una terapia con inmunoglobulinas polivalentes comerciales que de forma combinada con los antibióticos contribuyen a eliminar la infección, aunque los preparados disponibles en el mercado no contienen concentraciones suficientemente elevadas de anticuerpos específicos contra este microorganismo. En este trabajo se llevó a cabo la evaluación en un modelo animal de una inmunoglobulina anti- Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico mediante un ensayo de reto con una cepa virulenta. Se evaluó dosis y vía de administración de la misma, así como el valor profiláctico o terapéutico de los anticuerpos. Esta gammaglobulina resultó ser protectora en animales mostrando una sobreviviencia cercana a un 75% en comparación con el grupo control no protegido y además se logra eliminar el estado de portador en los individuos infectados