The RIP140 Gene Is a Transcriptional Target of E2F1

RIP140 is a transcriptional coregulator involved in energy homeostasis and ovulation which is controlled at the transcriptional level by several nuclear receptors. We demonstrate here that RIP140 is a novel target gene of the E2F1 transcription factor. Bioinformatics analysis, gel shift assay, and chromatin immunoprecipitation demonstrate that the RIP140 promoter contains bona fide E2F response elements. In transiently transfected MCF-7 breast cancer cells, the RIP140 promoter is transactivated by overexpression of E2F1/DP1. Interestingly, RIP140 mRNA is finely regulated during cell cycle progression (5-fold increase at the G1/S and G2/M transitions). The positive regulation by E2F1 requires sequences located in the proximal region of the promoter (−73/+167), involves Sp1 transcription factors, and undergoes a negative feedback control by RIP140. Finally, we show that E2F1 participates in the induction of RIP140 expression during adipocyte differentiation. Altogether, this work identifies the RIP140 gene as a new transcriptional target of E2F1 which may explain some of the effect of E2F1 in both cancer and metabolic diseases

Role of transcriptional coregulator RIP140 in E2Fs factors signaling pathway

Le contrôle du cycle cellulaire, processus fondamental pour la prolifération cellulaire, est souvent altéré au cours de la tumorigenèse. Les facteurs de transcription E2Fs sont des régulateurs majeurs de l'expression de gènes impliqués dans le cycle cellulaire, la réplication de l'ADN, la mort cellulaire programmée ou encore la différenciation cellulaire. La famille des facteurs E2Fs contient des membres qui agissent comme activateurs ou répresseurs de la transcription et dont l'activité est régulée par un grand nombre de corégulateurs transcriptionnels, incluant notamment les protéines à poche pRb, p107, p130. RIP140 (Receptor Interacting Protein of 140kDa) a été identifié comme un corépresseur de nombreux récepteurs nucléaires, une autre grande famille de facteurs de transcription qui, pour certains, régulent positivement l'expression du gène RIP140.Ce travail de thèse a permis d'identifier RIP140 comme un nouveau répresseur de l'activité transcriptionnelle du facteur E2F1, dans des expériences de transfection transitoire ainsi que sur l'expression de gènes endogènes. Nous avons également montré que l'expression ectopique de RIP140 bloque la progression des cellules dans le cycle cellulaire. Dans les cancers du sein, le niveau d'expression de RIP140 présente une corrélation inverse avec celui de différents gènes cibles des facteurs E2Fs et semble discriminer les tumeurs luminales des tumeurs basales. Nous avons également démontré que le niveau d'ARNm RIP140 est régulé au cours du cycle cellulaire et que le promoteur du gène RIP140 est une cible directe des facteurs E2Fs. Cette régulation implique des sites de liaison des facteurs E2Fs et Sp1 de la région proximale du promoteur. La régulation de ce gène par E2F1 a également été observée au cours du processus de différenciation adipocytaire en utilisant un modèle murin E2F1-/-.En conclusion, ce travail a permis d'identifier RIP140 comme un nouvel acteur de la voie de signalisation par les facteurs E2Fs.Cell cycle control, a fundamental process which controls cell proliferation, is frequently altered during tumorigenesis. The E2F transcription factors are central regulators of target gene expression involved in cell cycle regulation, DNA replication, apoptosis and differentiation. The E2F transcription factors family encompasses members which act as activators or repressors. Their activities are regulated by a large number of transcriptional coregulators, including in particular the pocket proteins pRb, p107, p130.The transcription coregulator RIP140 (Receptor Interacting Protein of 140kDa) has been identified as a partner of numerous nuclear receptors, another important transcription factor family. Some of these nuclear receptors positively regulate RIP140 gene expression.This work identified RIP140 as a new repressor of E2F1 transcriptional activity, both in transient transfection experiments and on the expression of endogenous target genes. We also showed that ectopic expression of RIP140 blocks cell cycle progression. In breast cancers, the level of RIP140 expression is inversely correlated with various target genes of E2Fs factors and seems to discriminate luminal from basal tumors. We also demonstrated that the RIP140 mRNA expression is regulated during cell cycle and that the RIP140 promoter is a direct target of E2F transcription factors. This regulation involves both E2F and Sp1 binding sites in the proximal region of the RIP140 promoter. The regulation of the RIP140 gene by E2F1 was also observed during adipocyte differentiation using an E2F1-/- mouse model.In conclusion, this study identified RIP140 as a new regulator of the E2F signalling pathway and as a novel E2F1 target gene. These results open new perspectives concerning the roles that this transcriptional coregulator might play in the control of cell proliferation and tumorigenesis

Rôle du corégulateur transcriptionnel RIP140 dans la signalisation par les facteurs E2Fs

Le contrôle du cycle cellulaire, processus fondamental pour la prolifération cellulaire, est souvent altéré au cours de la tumorigenèse. Les facteurs de transcription E2Fs sont des régulateurs majeurs de l'expression de gènes impliqués dans le cycle cellulaire, la réplication de l'ADN, la mort cellulaire programmée ou encore la différenciation cellulaire. La famille des facteurs E2Fs contient des membres qui agissent comme activateurs ou répresseurs de la transcription et dont l'activité est régulée par un grand nombre de corégulateurs transcriptionnels, incluant notamment les protéines à poche pRb, p107, p130. RIP140 (Receptor Interacting Protein of 140kDa) a été identifié comme un corépresseur de nombreux récepteurs nucléaires, une autre grande famille de facteurs de transcription qui, pour certains, régulent positivement l'expression du gène RIP140.Ce travail de thèse a permis d'identifier RIP140 comme un nouveau répresseur de l'activité transcriptionnelle du facteur E2F1, dans des expériences de transfection transitoire ainsi que sur l'expression de gènes endogènes. Nous avons également montré que l'expression ectopique de RIP140 bloque la progression des cellules dans le cycle cellulaire. Dans les cancers du sein, le niveau d'expression de RIP140 présente une corrélation inverse avec celui de différents gènes cibles des facteurs E2Fs et semble discriminer les tumeurs luminales des tumeurs basales. Nous avons également démontré que le niveau d'ARNm RIP140 est régulé au cours du cycle cellulaire et que le promoteur du gène RIP140 est une cible directe des facteurs E2Fs. Cette régulation implique des sites de liaison des facteurs E2Fs et Sp1 de la région proximale du promoteur. La régulation de ce gène par E2F1 a également été observée au cours du processus de différenciation adipocytaire en utilisant un modèle murin E2F1-/-.En conclusion, ce travail a permis d'identifier RIP140 comme un nouvel acteur de la voie de signalisation par les facteurs E2Fs.Cell cycle control, a fundamental process which controls cell proliferation, is frequently altered during tumorigenesis. The E2F transcription factors are central regulators of target gene expression involved in cell cycle regulation, DNA replication, apoptosis and differentiation. The E2F transcription factors family encompasses members which act as activators or repressors. Their activities are regulated by a large number of transcriptional coregulators, including in particular the pocket proteins pRb, p107, p130.The transcription coregulator RIP140 (Receptor Interacting Protein of 140kDa) has been identified as a partner of numerous nuclear receptors, another important transcription factor family. Some of these nuclear receptors positively regulate RIP140 gene expression.This work identified RIP140 as a new repressor of E2F1 transcriptional activity, both in transient transfection experiments and on the expression of endogenous target genes. We also showed that ectopic expression of RIP140 blocks cell cycle progression. In breast cancers, the level of RIP140 expression is inversely correlated with various target genes of E2Fs factors and seems to discriminate luminal from basal tumors. We also demonstrated that the RIP140 mRNA expression is regulated during cell cycle and that the RIP140 promoter is a direct target of E2F transcription factors. This regulation involves both E2F and Sp1 binding sites in the proximal region of the RIP140 promoter. The regulation of the RIP140 gene by E2F1 was also observed during adipocyte differentiation using an E2F1-/- mouse model.In conclusion, this study identified RIP140 as a new regulator of the E2F signalling pathway and as a novel E2F1 target gene. These results open new perspectives concerning the roles that this transcriptional coregulator might play in the control of cell proliferation and tumorigenesis.MONTPELLIER-BU Médecine UPM (341722108) / SudocSudocFranceF

Implication physiologique du facteur d'initiation de la traduction eIF3f dans ledéveloppement musculaire: Caractérisation des souris Knock-Out eIF3f.

Le facteur d'initiation de la traduction eIF3f est une des sous-unités constituant le facteur d'initiation dela traduction eIF3 nécessaire à l'initiation de la traduction des ARNm. Dans le muscle squelettique, desétudes effectuées au laboratoire ont démontré que ce facteur joue un rôle important dans lamaintenance de la masse musculaire squelettique. Ainsi, la surexpression de eIF3f entraine unehypertrophie associée à une augmentation de la synthèse protéique via la voie mTORC1. De plus,eIF3f, substrat de l'ubiquitin ligase MAFbx, est dégradé par le protéasome dans des conditionsatrophiques. L'importance biologique de l'adressage vers le protéasome est soulignée par le fait quel'expression d'un mutant de eIF3f insensible à la polyubiquination par Mafbx entraine à une protectioncontre l'atrophie induite par le jeûne ainsi qu'une hypertrophie. La majorité de ces études ayant étéréalisée in vitro sur des modèles cellulaires, nous avons développé des souris dont le gène codantpour eIF3f a été inactivé. Nos résultats montrent d'une part que ce facteur est indispensable audéveloppement embryonnaire et d'autre part qu'il est impliqué dans la régulation de la massemusculaire et de son métabolisme

Implication physiologique du facteur d'initiation de la traduction eIF3f dans ledéveloppement musculaire: Caractérisation des souris Knock-Out eIF3f.

Le facteur d'initiation de la traduction eIF3f est une des sous-unités constituant le facteur d'initiation dela traduction eIF3 nécessaire à l'initiation de la traduction des ARNm. Dans le muscle squelettique, desétudes effectuées au laboratoire ont démontré que ce facteur joue un rôle important dans lamaintenance de la masse musculaire squelettique. Ainsi, la surexpression de eIF3f entraine unehypertrophie associée à une augmentation de la synthèse protéique via la voie mTORC1. De plus,eIF3f, substrat de l'ubiquitin ligase MAFbx, est dégradé par le protéasome dans des conditionsatrophiques. L'importance biologique de l'adressage vers le protéasome est soulignée par le fait quel'expression d'un mutant de eIF3f insensible à la polyubiquination par Mafbx entraine à une protectioncontre l'atrophie induite par le jeûne ainsi qu'une hypertrophie. La majorité de ces études ayant étéréalisée in vitro sur des modèles cellulaires, nous avons développé des souris dont le gène codantpour eIF3f a été inactivé. Nos résultats montrent d'une part que ce facteur est indispensable audéveloppement embryonnaire et d'autre part qu'il est impliqué dans la régulation de la massemusculaire et de son métabolisme

Caractérisation de l'activité du facteur d'initiation de la traduction eIF3f dans lesmyoblastes C2C12.

Le facteur d'initiation de la traduction eIF3f est une des sous-unités du complexe eIF3 nécessaire àl'initiation de la traduction des ARNm. Au niveau musculaire, les études effectuées au laboratoire ontdémontré que ce facteur joue un rôle important dans la régulation atrophie/hypertrophie. Ainsi, lasurexpression de eIF3f entraine une hypertrophie associée à une augmentation de la synthèseprotéique via la voie mTORC1 alors que dans des conditions atrophiques, eIF3f substrat de l'ubiquitinligase MAFbx, est dégradé par le protéasome ce qui a pour conséquence de réduire la synthèseprotéique. Nous montrons ici que eIF3f présente une activité antiproliférative dans les myoblastesassociée à une inhibition de la progression dans le cycle cellulaire et impacte sur la sortie des cellulesde ce cycle. Les études protéomiques et transcriptomiques effectuées sur des C2C12 surexprimanteIF3f indiquent des modifications des niveaux d'expression des protéines associées au cycle cellulair

Caractérisation de l'activité du facteur d'initiation de la traduction eIF3f dans lesmyoblastes C2C12.

Le facteur d'initiation de la traduction eIF3f est une des sous-unités du complexe eIF3 nécessaire àl'initiation de la traduction des ARNm. Au niveau musculaire, les études effectuées au laboratoire ontdémontré que ce facteur joue un rôle important dans la régulation atrophie/hypertrophie. Ainsi, lasurexpression de eIF3f entraine une hypertrophie associée à une augmentation de la synthèseprotéique via la voie mTORC1 alors que dans des conditions atrophiques, eIF3f substrat de l'ubiquitinligase MAFbx, est dégradé par le protéasome ce qui a pour conséquence de réduire la synthèseprotéique. Nous montrons ici que eIF3f présente une activité antiproliférative dans les myoblastesassociée à une inhibition de la progression dans le cycle cellulaire et impacte sur la sortie des cellulesde ce cycle. Les études protéomiques et transcriptomiques effectuées sur des C2C12 surexprimanteIF3f indiquent des modifications des niveaux d'expression des protéines associées au cycle cellulair

Physiological implication of the eukaryotic initiation factor eIF3f in the muscular homeostasis

Physiological implication of the eukaryotic initiation factor eIF3f in the muscular homeostasis. EMBO workshop - Molecular Mechanisms of muscle growth and wasting in health and diseas

: Vitamine B6 et cancer

International audienceVitamin B6 is well-known for its role as a cofactor in many enzymatic reactions and recently, several epidemiological studies have highlighted the importance of this vitamin as a protective agent against various cancers: elevated vitamin B6 plasma levels were associated with a lower risk of colorectal cancer development, for example. In vivo studies have shown that vitamin B6 decreased cell proliferation and enhanced the immune response. At the cellular level, antioxidant, pro-apoptotic and anti-angiogenic effects have been identified. At the molecular level, vitamin B6 is able to inhibit the transactivation potential of various nuclear receptors. Interestingly, a recent paper has described the conjugation of vitamin B6 to RIP140 (receptor interacting protein of 140 kDa), a protein that acts as a transcriptional corepressor of nuclear receptors. This post-translational modification increases the transcriptional repression of RIP140 and regulates its subcellular localization and its ability to interact with different protein partners. Finally, vitamin B6 is involved in the methyl donor cycle ant thus, some of the antitumor properties of vitamin B6 may involve an indirect effect on the level of DNA or histone methylation. All of these mechanistic and clinical data justify further studies to decipher the mechanism of action of vitamin B6 and its clinical interest in combination with molecules typically used in chemotherapy or hormonal therapy

Long-term treatment with the pure anti-estrogen fulvestrant durably remodels estrogen signaling in BG-1 ovarian cancer cells.

International audienceMost ovarian cancers are estrogen-positive and hormonal treatments using anti-estrogens or aromatase inhibitors are under investigation for treating the tumors that are resistant to conventional therapies. In this study, the long-term effects of two anti-estrogens, namely 4-hydroxytamoxifen and fulvestrant (or ICI182,780), were investigated in ERα-positive BG1 epithelial ovarian cancer cells. To this aim, cells were grown in the presence of anti-estrogen concentrations that were sufficient to saturate the estrogen receptors, but were neither cytotoxic nor cytostatic as indicated by the absence of inhibition of cell proliferation. In these conditions and despite the lack of cytostatic effect of the drugs, long-term treatment (3 months) with the pure anti-estrogen fulvestrant induced a specific, reproducible and irreversible inhibition of ERα expression. This inhibition was accompanied by loss of estrogen-induced cell proliferation and gene expression as indicated by the analysis of several estrogen-responsive genes. ERα down-regulation was not linked to deregulated expression of transcription factors which drive ERα transcription and did not involve DNA methylation or histone deacetylation. Altogether, these results demonstrate that non-cytotoxic concentrations of pure anti-estrogens affect estrogen signaling and might be relevant for the treatment for ovarian cancers