Systematic evaluation of techniques for the study of the supramolecular architecture of rhodopsin

The eye is outstanding in its sensitivity: it can react to single photons due to the rod photoreceptor, in particular its outer segment. This thesis investigates experimental approaches to study the higher-order structure of the outer segment’s crucial constituent: rhodopsin. The oligomeric state and organization of rhodopsin within disk membranes has been discussed intensively due to its fundamental meaning. The method of choice to analyze rhodopsin in its close-to-native state so far has been cryo-electron microscopy of vitreous sections (CEMOVIS). To analyze one illumination state of rhodopsin (dark state), CEMOVIS was sufficient. However, CEMOVIS has the disadvantage to be time-consuming and error-prone. To analyze different illumination states, CEMOVIS is not efficient enough. The main part of this thesis treats alternative techniques to overcome the disadvantages of CEMOVIS. Additionally, studies of rhodopsin’s temporal bleaching behaviour were carried out. In more detail: First, we aim to analyze the bleaching of intact retinas. This was done quantitatively via UV-VIS-spectroscopy. We could see an exponential bleaching within the short time scale (in the range of ms). Second, alternative techniques to substitute CEMOVIS were considered and their applicability investigated and evaluated. Dual-axis tomography for tomogram acquisition of samples produced via CEMOVIS turned out to be suboptimal. A ROS solubilization prior to cryo-fixation was accompanied by the same disadvantages like CEMOVIS of high-pressure-frozen retinas. The retinal misplacement and thereby the oblique fractioning of ROS during freeze-fracture experiments with retinal cryo-samples impeded direct imaging of exposed ROS disk membranes. Samples for cryo-ET can also be produced with the focused-ion beam (FIB). Tomography is sped up by using the Fib , due to superior sample quality. However, this way to produce samples is again suboptimal and time-consuming at the present. The most promising approach was to reduce dimensionality of the sample via isolation of ROS disks. ROS disks can subsequently be used for vitrification (plunge-freezing) and subsequent cryo-ET or analyzed via atomic force microscopy (AFM). AFM however, does not allow the investigaion of close-to-native state samples. Nevertheless, it has the advantage of being a technique with a greater effectiveness – what we aimed for. A future optimization of this technique will allow for further investigations of, for example, rhodopsin’s supramolecular structure upon illumination. Finally, a tomogram was simulated and compared to real data

‘This might be advertising’: Perception, Understanding and Handling of Online Advertising by Children

Werbung ist im Alltag der Kinder allgegenwärtig – so auch im Internet. Die Erscheinungsformen der Online-Werbung sind nicht nur vielfältig, sondern auch sehr dynamisch, zunehmend personalisiert und entsprechend herausfordernd für junge Online-Nutzerinnen und -Nutzer. Mit der Überschrift dieses Aufsatzes ist unmittelbar die Problematik angesprochen, nämlich, dass bereits die Definition und Operationalisierung von «Onlinewerbung» ein kritisches Moment darstellt. Sowohl aus rechtlicher als auch aus medienpädagogischer Sicht stellt sich die Frage, ob Kinder in der Lage sind, Online-Werbung als solche zu erkennen und ihre Intention zu verstehen. Ein grundlegendes Verständnis von Werbung und eine zuverlässige Kennzeichnung von Werbemitteln werden als Grundvoraussetzung dafür gesehen, dass Kinder Werbung als solche erkennen und angemessen und kompetent damit umgehen können. Im vorliegenden Beitrag stellen wir Ergebnisse einer interdisziplinären Studie vor, in der untersucht wurde, welches Werbeverständnis Kinder im Grundschulalter haben und wie sie Werbung im Internet begegnen. Die Ergebnisse zeigen, wie herausfordernd Online-Werbung für Kinder ist und an welchen Stellen sie Schwierigkeiten haben, ihr Werbekonzept auf Online-Inhalte zu übertragen. Vor dem Hintergrund der Studie diskutieren wir das Konzept der Werbekompetenz sowie die methodischen Herausforderungen im Hinblick auf aktuelle und künftige Formen der Online-Werbung und persuasiver Kommunikation.Advertising is ubiquitous in children's everyday life – and on the Internet. The manifestations of online advertising are not only diverse but also very dynamic, increasingly personalised and therefore challenging for young online users in multiple respects. From the perspectives of both law and media education, the central question arises whether children are able to identify online advertising as such and to understand its intention. A basic understanding of advertising and reliable labelling of advertising material is seen as fundamental requirements for children to identify advertising as such and to be able to handle it appropriately and competently. Concerning the question of advertising literacy, we present findings of an interdisciplinary study in which we investigate the concept of online advertising of primary school age and how they deal with advertising online. The results show how challenging online advertising is for children and at which points they have difficulties in transferring their concept of advertising to online content. Against the background of the study, we discuss the idea of advertising literacy and the methodological challenges about current and future forms of online advertising and persuasive messages

Reflective Writing in Teacher Education in China: Insights from Systemic Functional Linguistics

This article aims to demonstrate the application of theory to teaching practice by examining how two teacher educators drew upon systemic functional linguistics (SFL) as a pedagogical and analytical tool to inform their teaching of reflective writing to Mandarin-dominant teacher candidates enrolled in an ESOL course within an educator preparation program at a university using English Medium Instruction (EMI) in China. First, the authors describe how they incorporated the SFL appraisal framework into their teaching to bring their multilingual student writers’ attention to the language of evaluation as they prepared to construct reflective language learning autobiographies. Second, the authors demonstrate how SFL-informed text analysis of the appraisal resources used within students’ written reflections deepened their understanding of their students’ reflective writing practices and informed their teaching and course development. The article concludes with suggestions for using the SFL appraisal framework to support the reflective writing of their multilingual teacher candidates

Synthesis and Functionalization of Luminescent Nanoparticles for Potential Biological Applications

Im Rahmen der Arbeit wurden lumineszierende Nanopartikel (NP) hergestellt, die aufgrund ihrer optischen Eigenschaften in biologischen Systemen als Fluoreszenzmarkierung Anwendung finden könnten. Der Schwerpunkt lag dabei auf II-VI-QDs, insbesondere CdTe, mit verschiedenen Mercaptocarbonsäure-liganden. Außerdem wurden Lanthanoid-dotierte NP mit verschiedenen Materialien als Wirtsgitter (YVO4, ZrO2, CeO2) hergestellt. In beiden Fällen wurde der Einfluss unterschiedlicher Synthesebedingungen auf die Eigenschaften der Partikel untersucht. Sowohl die Lanthanoid-dotierten NP als auch die CdTe-QDs wurden funktionalisiert. Für diese QDs erfolgten bereits erste Untersuchungen, um sie als Fluoreszenzmarkierung zu verwenden. In Falle der QDs wurde der Einfluss der Reaktionstemperatur, des Verhältnisses von Cd:Te während der Synthese, die Alkylkettenlänge und Art der Liganden auf die optischen Eigenschaften untersucht. Alle diese Faktoren beeinflussen Absorption und Emission auf unterschiedliche Weise. Die CdTe-QDs wurden mit einer ZnS-Schale passiviert, um die Zytotoxizität zu verringern. Außerdem konnte auch hier ein Einfluss der Schale auf die optischen Eigenschaften beobachtete werden. Je nach Partikelgröße wurden v. a. die Emissionsmaxima zu längeren bzw. kürzeren Wellenlängen verschoben. Es konnten ebenfalls CSS-QDs, in Form von CdTe/CdS/ZnS, erhalten werden, welche jedoch zur Polydispersität neigten, weshalb auf eine weitere Untersuchung dieser verzichtet wurde. Neben CdTe wurden auch andere binäre (CdS, ZnS, ZnTe) und tertiäre (ZnSxTe1-x, CdSxTe1-x, ZnxCd1-xTe) II-VI-QDs hergestellt. Diese konnten die CdTe-QDs jedoch nicht hinsichtlich der Eigenschaften übertreffen. Es war darüber hinaus möglich, CdTe/ZnS-MUDA-QDs mit dem Oligosaccharid LNTEt zu funktionalisieren. Diese funktionalisierten Partikel wurden auf ihre Toxizität an SH-SY5Y-Zellen getestet und des Weiteren die Zellaufnahme der funktionalisierten und unfunktionalisierten QDs untersucht. Ln-dotierte Materialien dienten als Alternative zu den QDs, da sie ebenfalls fluoreszierten, aber aus toxikologischer Sicht weniger bedenklich sind. Von den drei unterschiedlichen Wirtsmaterialen erwies sich CeO2 als relativ ungeeignet, da die Lumineszenz nur sehr schwach, wenn überhaupt vorhanden, war. ZrO2 und YVO4 stellten sich als wesentlich geeigneter, wenn auch nicht als optimal, heraus. Im Falle von YVO4:Ln wurde zunächst untersucht, welche Edukte sich für die Synthese eigneten. Dabei zeigte sich, dass Oxide nicht die gewünschten Ergebnisse hinsichtlich der Reproduzierbarkeit lieferten. Bessere Ergebnisse konnten mit den Nitraten erzielt werden. Zudem konnte die breite Größenverteilung mit verschiedenen Carbonsäurederivaten verringert werden. Von zwölf verwendetet Lanthanoiden für die Dotierung, konnte bei sieben (Sm, Eu, Tb, Dy, Ho, Er, Tm) eine Fluoreszenz beobachtet werden. Um eine möglichst starke Lumineszenz zu erzielen, wurden unterschiedliche Dotierungsgrade gewählt, wobei geringere Dotierungsgrade generell bessere Lumineszenzintensitäten lieferten als höhere. ZrO2-NP konnten ohne Liganden reproduzierbar und mit einer relativ engen Größenverteilung synthetisiert werden. Für die Dotierung wurden sowohl die Oxide, als auch wasserlösliche Vorläufer der Lanthanoide verwendet. Von den zwölf verwendet Lanthanoiden wiesen vier (Sm, Eu, Tb, Dy) im Falle der wasserlöslichen Edukte und zwei (Eu, Dy) im Falle der Oxide Fluoreszenz auf. Auch hier wurden meist für geringere Dotierungsgrade höhere Lumineszenzintensitäten erzielt. Eine Codotierung mit Europium und Terbium wurde ebenfalls durchgeführt. Die ZrO2:Eu-NP wurden außerdem erfolgreichen mit einer SiO2-Schale aus APTS und TEOS versehen. Die freien Aminogruppen des APTS konnten mit Carbonsäurederivaten funktionalisiert werden

Gender Dynamics at a Christian Liberal Arts College

Research studies in recent decades have described the limiting effects of a “chilly climate” on women’s opportunities within higher educational settings. Additionally, much has been written about how gender role expectations within evangelical Christianity impact women. This study sought to understand the gender assumptions of faculty and students, to explore the impact these assumptions have on gender dynamics in the classroom, and to reveal the educational experiences and aspirations of female students at a Christian evangelical liberal arts college. Further, this study sought to explore whether female students feel they are thriving or merely surviving their college experience. This research utilized focus group interviews with 16 female and eight male students. The sample groups pulled from the diverse areas of academic study as well as ethnicity. Also, 10 faculty members were interviewed to hear their opinions, feelings, and experiences on the subject

Measuring attitudes towards disability via questionnaires. A qualitative content analysis of existing measurement instruments

Einstellungen zu (Menschen mit) Behinderungen sind seit langer Zeit im Fokus der Forschung. Da es sich um ein latentes Konstrukt handelt, sieht sich die Forschung damit konfrontiert, zu definieren, wie die Einstellungen gemessen werden sollen. Die vorliegende Studie nimmt die Operationalisierung des latenten Konstrukts zum Anlass und untersucht durch eine zusammenfassende qualitative Inhaltsanalyse der aktuell verfügbaren Einstellungsfragebögen (N = 13) was gemessen wird, wenn Einstellungen zu (Menschen mit) Behinderungen erfasst werden sollen. Die Ergebnisse zeigen, dass sich die Items der Fragebögen in den Kategorien Fähigkeitserwartungen, Vulnerabilität/Privilegienverlust, Normative Überformung, Expliziter Ableismus, Wissen und Überzeugungen, Strukturelle Barrieren und Persönlicher Kontakt abbilden lassen. (DIPF/Orig.)Attitudes towards disability are a recurring topic in research. Being a latent construct, research is challenged with the task of defining how attitudes are to be measured. This study focuses on the operationalisation of the latent construct. It examines what is measured when attitudes towards disability are to be assessed. For this purpose, a qualitative content analysis of currently available questionnaires measuring explicit attitudes towards disability (N = 13) is conducted. Seven categories were generated from the data: Ability Expectations, Vulnerability/Loss of Privilege, Normative Overforming, Explicit Ableism, Knowledge and Beliefs, Structural Barriers, and Personal Contact. (DIPF/Orig.

Novel Insights Into N-Glycan Fucosylation and Core Xylosylation in C. reinhardtii

Chlamydomonas reinhardtii (C. reinhardtii) N-glycans carry plant typical beta 1,2-core xylose, alpha 1,3-fucose residues, as well as plant atypical terminal beta 1,4-xylose and methylated mannoses. In a recent study, XylT1A was shown to act as core xylosyltransferase, whereby its action was of importance for an inhibition of excessive Man1A dependent trimming. N-Glycans found in a XylT1A/Man1A double mutant carried core xylose residues, suggesting the existence of a second core xylosyltransferase in C. reinhardtii. To further elucidate enzymes important for N-glycosylation, novel single knockdown mutants of candidate genes involved in the N-glycosylation pathway were characterized. In addition, double, triple, and quadruple mutants affecting already known N-glycosylation pathway genes were generated. By characterizing N-glycan compositions of intact N-glycopeptides from these mutant strains by mass spectrometry, a candidate gene encoding for a second putative core xylosyltransferase (XylT1B) was identified. Additionally, the role of a putative fucosyltransferase was revealed. Mutant strains with knockdown of both xylosyltransferases and the fucosyltransferase resulted in the formation of N-glycans with strongly diminished core modifications. Thus, the mutant strains generated will pave the way for further investigations on how single N-glycan core epitopes modulate protein function in C. reinhardtii

Disruption of Hydrogen Bonds between Major Histocompatibility Complex Class II and the Peptide N-Terminus Is Not Sufficient to Form a Human Leukocyte Antigen-DM Receptive State of Major Histocompatibility Complex Class II

Peptide presentation by MHC class II is of critical importance to the function of CD4+ T cells. HLA-DM resides in the endosomal pathway and edits the peptide repertoire of newly synthesized MHC class II molecules before they are exported to the cell surface. HLA-DM ensures MHC class II molecules bind high affinity peptides by targeting unstable MHC class II:peptide complexes for peptide exchange. Research over the past decade has implicated the peptide N-terminus in modulating the ability of HLA-DM to target a given MHC class II:peptide combination. In particular, attention has been focused on both the hydrogen bonds between MHC class II and peptide, and the occupancy of the P1 anchor pocket. We sought to solve the crystal structure of a HLA-DR1 molecule containing a truncated hemagglutinin peptide missing three N-terminal residues compared to the full-length sequence (residues 306–318) to determine the nature of the MHC class II:peptide species that binds HLA-DM. Here we present structural evidence that HLA-DR1 that is loaded with a peptide truncated to the P1 anchor residue such that it cannot make select hydrogen bonds with the peptide N-terminus, adopts the same conformation as molecules loaded with full-length peptide. HLA-DR1:peptide combinations that were unable to engage up to four key hydrogen bonds were also unable to bind HLA-DM, while those truncated to the P2 residue bound well. These results indicate that the conformational changes in MHC class II molecules that are recognized by HLA-DM occur after disengagement of the P1 anchor residue