Development of a duplex PCR for the identification of Fasciola hepatica in lymnaeid snails

Fasciola hepatica is a parasitic trematode that causes fascioliasis, a disease that affects domestic livestock and humans. The complex life cycle of F. hepatica involves lymnaeid snails as intermediate hosts. Detection of F. hepatica in snails is a useful tool for the control of fascioliasis in livestock. Detection methods involve crushing the snails and microscopic observation, but have low sensitivity and are time-consuming. To overcome these disadvantages, researchers are developing molecular methods. In this work, we developed a duplex PCR that allows the detection of F. hepatica in snails as two single and bright bands: one corresponding to the parasite and one to the snail, the latter of which works as an internal control to detect PCR inhibitors. To avoid false-positive results, we also evaluated the method of disinfection of the material used for snail collection. The duplex PCR developed showed a sensitivity high enough to detect a single miracidium per snail, and significantly shortened the time required to analyze a large number of snails.Fasciola hepatica es un parásito trematodo que causa fasciolosis, una enfermedad que afecta al ganado doméstico y al ser humano. El complejo ciclo de vida de F. hepatica involucra a los caracoles lymnaeidos como huéspedes intermediarios. La detección de F. hepatica en caracoles es una herramienta útil para el control de la fasciolosis en el ganado. Los métodos de detección implican el aplastamiento de los caracoles y la observación microscópica, pero tienen baja sensibilidad y consumen mucho tiempo. Para superar estas desventajas, se encuentran en desarrollo métodos de diagnóstico molecular. En este trabajo, se desarrolló una PCR dúplex que permite la detección de F. hepatica en caracoles como dos bandas simples y brillantes: una banda corresponde al parásito y otra al caracol, funcionando esta última como control interno para detectar inhibidores de la PCR. Para evitar resultados falsos positivos, también evaluamos el método de desinfección del material utilizado para la manipulación de caracoles. La PCR dúplex desarrollada mostró una sensibilidad lo suficientemente alta como para detectar un solo miracidio por caracol y acortó significativamente el tiempo de trabajo de análisis de una gran cantidad de caracoles.EEA BarilocheFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Alvarez, Lucia Paula. Universidad Nacional del Comahue. Instituto Andino Patagónico de Tecnologías Biológicas y Geoambientales. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. 2 Instituto Andino Patagónico de Tecnologías Biológicas y Geoambientales; ArgentinaFil: Soler, Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche. Grupo Sanidad Animal; ArgentinaFil: Larroza, Marcela Patricia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche. Grupo Sanidad Animal; Argentin

Protocolo de extracción de ADN para la detección de Brucella ovis en semen

Protocolo 1: Extracción con fenol/cloroformo: Adaptado de Matrone, M., Keid, L.B., Rocha, V.C., Vejarano, M.P., Ikuta, C.Y., Rodriguez, C.A., Ferreira, F., Dias, R.A., Ferreira Neto, J.S., 2009. Evaluation of DNA extraction protocols for Brucella abortus pcr detection in aborted fetuses or calves born from cows experimentally infected with strain 2308. Braz J Microbiol. 40, 480-489.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Alvarez, Lucía Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Área de Producción Animal. Grupo de Sanidad Animal; ArgentinaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentin

Protocolo de PCR para la detección de Brucella ovis

Adaptado de Xavier, M.N., Silva, T.M., Costa, E.A., Paixao, T.A., Moustacas, V.S., Carvalho, C.A., Jr., Sant'Anna, F.M., Robles, C.A., Gouveia, A.M., Lage, A.P., Tsolis, R.M., Santos, R.L., 2010. Development and evaluation of a species-specific PCR assay for the detection of Brucella ovis infection in rams. Vet Microbiol. 145, 158-164.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Alvarez, Lucía Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Área de Producción Animal. Grupo de Sanidad Animal; ArgentinaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentin

Protocolo de PCR para la detección de Brucella melitensis y REV-1

Primers utilizados: REV Fw 5’ CAG GCA AAC CCT CAG AAG C 3’ REV Rv 5’ GAT GTG GTA ACG CAC ACC AA 3’ Amplifican un de 218 pb en REV-1. Cita: Garcia-Yoldi, D., et al., Multiplex PCR assay for the identification and differentiation of all Brucella species and the vaccine strains Brucella abortus S19 and RB51 and Brucella melitensis Rev1. Clin Chem, 2006. 52(4): p. 779-81.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Alvarez, Lucía Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Área de Producción Animal. Grupo de Sanidad Animal; ArgentinaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentin

Protocolo de PCR para la detección de Brucella ovis, Histophilus somni y Actinobacillus seminis

Adaptado de Primers utilizados correspondientes al gen BOV_A0500 de B. ovis, tomados de: Tsolis, R.M., Seshadri, R., Santos, R.L., Sangari, F.J., Lobo, J.M., de Jong, M.F., Ren, Q., Myers, G., Brinkac, L.M., Nelson, W.C., Deboy, R.T., Angiuoli, S., Khouri, H., Dimitrov, G., Robinson, J.R., Mulligan, S., Walker, R.L., Elzer, P.E., Hassan, K.A., Paulsen, I.T., 2009. Genome degradation in Brucella ovis corresponds with narrowing of its host range and tissue tropism. PLoS One. 4, e5519.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Alvarez, Lucía Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Área de Producción Animal. Grupo de Sanidad Animal; ArgentinaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentin

Protocolo de extracción de ADN para la detección de Brucella melitensis en tejidos

Adaptado de Matrone, M., Keid, L.B., Rocha, V.C., Vejarano, M.P., Ikuta, C.Y., Rodriguez, C.A., Ferreira, F., Dias, R.A., Ferreira Neto, J.S., 2009. Evaluation of DNA extraction protocols for Brucella abortus pcr detection in aborted fetuses or calves born from cows experimentally infected with strain 2308. Braz J Microbiol. 40, 480-489.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Alvarez, Lucía Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Área de Producción Animal. Grupo de Sanidad Animal; ArgentinaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentin

Brote atípico de ectima contagioso en ovinos Merino de la Patagonia Argentina

El ectima contagioso es causado por el virus ORF afectando mucosas y piel de ovinos y caprinos. En este trabajo se describe un brote de ectima contagioso que comienza en el mes de junio en un establecimiento donde no se habían detectado brotes de ectima en los últimos 5 años, en animales de entre 8 y 9 meses de edad. Se revisaron clínicamente 183 corderos Merino que conformaban el lote problema. Se tomaron muestras de costras de 9 animales afectados para la identificación molecular del virus. A la revisación clínica se detectaron costras en morro (97.8%), conjuntivitis (51.4%), costras en rodete coronario (14.8%), moco en narices (13.1%), congestión de conjuntiva ocular (6.0%), lagrimeo (2.7%) y llagas en encías (2.2%). Mediante la técnica de amplificación por PCR se confirmó la presencia del genoma del virus ORF en todas las muestras analizadas. Llamativamente, el brote presentó características atípicas, como haberse iniciado en el mes de junio (invierno) y haber afectado a animales de entre 8 y 9 meses de edad. Se hipotetiza que el origen del brote pudo haberse debido a la introducción de 32 ovejas nuevas con lesiones residuales de ectima. El presente caso alerta sobre la necesidad de revisar cuidadosamente cada vez que se introducen animales a establecimientos libres de la enfermedad, como así también la necesidad de disponer de una vacuna efectiva para mantener protegidas a las majadasContagious ecthyma, caused by the ORF virus, affects sheep and goats. Clinically it is characterised by the presence of crusty lesions on the lips and nose. Here we report an outbreak of contagious ecthyma, in a sheep farm free of the disease for at least five years. One hundred eighty three Merino lambs were clinically examined. Crust samples were taken from the lips of 9 clinically affected animals for molecular analysis. Crust in lips and nose (97.8%) conjunctivitis (51.4%), crusts in coronets (14.8%), nasal secretion (13.1%), congestion of ocular conjunctiva (6%), lacrimation (2.7%) and sores in gums (2.2%) were detected after clinical examination. PCR confirmed the presence of DNA of ORF virus in the 9 samples analysed. The age of the affected lambs, (between 8 and 9 month old) and the month of the onset of the outbreak (June) were considered atypical. We hypothesize that the origin of the outbreak could have been the admission to the flock of 32 new ewes with residual lesions of ecthyma. The present case alerts about the need of performing a carefully clinical examination when animals are introduced to a farm free of the disease, and also the need of having an effective vaccine to keep animals protected.Inst. de BiotecnologíaFil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Grupo Salud Animal; ArgentinaFil: Peralta, Andrea Veronica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Alvarez, Lucia Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Grupo Salud Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Martínez, Agustín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Grupo Salud Animal; Argentin

Aprendiendo en Red: aportes metodológicos para un mejor uso de los contenidos multimediales

El programa “Conectar Igualdad” tiene por objeto reducir la brecha digital existente hoy en nuestro país. Si bien la mayoría de los alumnos del nivel secundario han tenido contacto con las herramientas digitales, (son considerados “nativos digitales”) el uso que de ellas realizan lejos esta de favorecer su formación integral. Por su parte, los docentes encuentran diferentes dificultades a la hora de incorporar las TICs. Convencidos de que el objetivo general del programa propicia la igualdad de oportunidades educativas de las generaciones futuras, el objetivo de este proyecto es contribuir a la capacitación de docentes, alumnos y familias involucradas en el proyecto, en el uso de las netbooks como “reales” herramientas facilitadoras y mediadoras del proceso de enseñanza-aprendizaje. El proyecto se encuentra en su etapa de ejecución en tres de las escuelas destinatarias (Escuelas Media n° 1, ESB n° 12 y ESB n° 6). Las tres ubicadas en el Barrio de Villa Italia en la ciudad de Tandil. El presente proyecto se viene desarrollando desde mediados del año 2011 en el marco del Programa de Voluntariado Universitario del Ministerio de Educación de la Nación. El camino recorrido ha permitido desarrollar un trabajo en red que articula a docentes y estudiantes de la Unicen con la comunidad educativa de tres escuelas de Tandil ubicadas en el Barrio de Villa Italia. En esta ponencia se presenta el trabajo que se está realizando y los resultados preliminares obtenidos, así como una reflexión sobre el concepto de extensión y el lugar que ocupa en la formación universitaria a partir del desarrollo de esta experiencia. De la misma manera, se abordan las estrategias metodológicas sobre las cuales se desarrolla el proyecto con base en el aprendizaje colaborativo, considerando que el trabajo en red en contexto de colaboración e intercambio tiene una influencia positiva en cuanto a la motivación y la calidad del aprendizaje (según Vigotsky). El trabajo colaborativo interinstitucional que se desarrolla contiene propuestas didácticas coordinadas de las cuales participan todos los actores involucrados de las instituciones escolares y universitaria. El diseño y planificación de talleres para alumnos y docentes se baso en un diagnóstico previo y fue debidamente consensuado en cada una de sus instancias, articulando el trabajo del equipo de voluntarios docentes, alumnos y graduados con cada una de las escuelas en coordinación con los inspectores del nivel y jefatura distrital. El trabajo colaborativo con tecnologías multimediales permite la construcción de representaciones mentales a partir de palabras e imágenes con la intención de promover aprendizajes (según Mayer). La interactividad entre los miembros y el registro de los intercambios tiene por objeto fomentar la base de conocimiento propia de una cultura participativa (siguiendo el concepto de Jenkins). Finalizada la primera experiencia de talleres a docentes y alumnos en la ESB n° 12 es importante destacar los resultados obtenidos en términos de los materiales multimediales producidos por docentes y alumnos. Lo cual implico el manejo técnico de los programas necesarios (power point, gimp. Movie maker,etc.), y fundamentalmente la construcción conjunta de conocimientos y materiales de enseñanza-aprendizaje

Identification and molecular characterization of Orf virus in Argentina

Orf virus (ORFV) is the etiological agent of contagious ecthyma (CE), a pustular dermatitis of sheep and goats. Outbreaks of ORFV have been observed in all geographical regions of the world, including Argentina. The origin and identity of Argentinian ORFVs are unknown, and no comparative or phylogenetic studies of these viruses have been performed. In this study, we described the sequencing and analysis of five ORFV molecular markers: a partial B2L gene (ORF011), VIR (ORF020), an envelope mature protein (ORF109), vIL10 (ORF127), and GIF (ORF117) from two particular Argentinian outbreaks of CE.Facultad de Ciencias Veterinaria

The multikinase inhibitor EC‐70124 synergistically increased the antitumor activity of doxorubicin in sarcomas

Cytotoxic drugs like doxorubicin remain as the most utilized agents in sarcoma treatment. However, advanced sarcomas are often resistant, thus stressing the need for new therapies aimed to overcome this resistance. Multikinase inhibitors provide an efficient way to target several pro-tumorigenic pathways using a single agent and may constitute a valuable strategy in the treatment of sarcomas, which frequently show an aberrant activation of pro-tumoral kinases. Therefore, we studied the antitumor activity of EC-70124, an indolocarbazole analog that have demonstrated a robust ability to inhibit a wide range of pro-survival kinases. Evaluation of the phospho-kinase profile in cell-of-origin sarcoma models and/or sarcoma primary cell lines evidenced that PI3K/AKT/mTOR, JAK/STAT or SRC were among the most highly activated pathways. In striking contrast with the structurally related drug midostaurin, EC-70124 efficiently prevented the phosphorylation of these targets and robustly inhibited proliferation through a mechanism associated to the induction of DNA damage, cell cycle arrest and apoptosis. In addition, EC-70124 was able to partially reduce tumor growth in vivo. Importantly, this compound inhibited the expression and activity of ABC efflux pumps involved in drug resistance. In line with this ability, we found that the combined treatment of EC-70124 with doxorubicin resulted in a synergistic cytotoxic effect in vitro and an increased antitumor activity of this cytotoxic drug in vivo. Altogether, these results uncover the capability of the novel multikinase inhibitor EC-70124 to counteract drug resistance in sarcoma and highlight its therapeutic potential when combined with current treatmentsPeer ReviewedPostprint (author's final draft