Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) treatment on follicular population and development in non-lactating dairy cows

The aim of this study was to evaluate the long term effects of recombinant bovine somatotropin (rbST) on follicle population and ovulatory follicle development in non-lactating dairy cows. Twenty-one Jersey cows were allocated in rbST (n=11) or control (n=10) groups. On day -60, cows in rbST group received 500 mg of somatotropin (s.c. Lactotropin, Elanco). On day 0, control and rbST cows received an intravaginal progesterone-releasing device (1.9 g, CIDR, Zoetis) and GnRH (100 mg, IM, Factrel, Zoetis). On day 8, cows received PGF2α (25 mg, IM, Lutalyse, Zoetis) and the CIDR was removed. Twelve hours after device removal (D8), serum, follicular fluid and granulosa cells samples were collected. Serum and follicular concentration of estradiol (E2) and progesterone (P4) were analyzed. Total RNA was extracted from granulosa cells to measure gene expression of LHCGR, STAR, HSD-3B1, CYP11A1, CYP19A1, CYP17A1, IGFR and PAPPA by real time PCR. Ultrasonography was performed on days -60, -53, -46, -14, -7, 0 and 8 for antral follicle count. Results were analyzed by repeated measures ANOVA and t-test. There was no effect of rbST treatment on the number of follicles during the 60 days period, as well as no effect on serum and follicular fluid E2 and follicular fluid P4 at the moment of follicle aspiration. There was a reduction in PAPPA (P = 0.006), CYP11A1 (P = 0.04) and CYP19A1 (P = 0.002) mRNA levels in granulosa cells of the pre ovulatory follicle of rbST treated cows. In conclusion, a single dose of rbST did not have long term effects on antral follicle population, serum and follicular E2/P4 concentrations in non-lactating dairy cows. Despite that, rbST injection decreased granulosa cell expression of genes related to steroidogenesis in the pre-ovulatory follicle

Supplementation of in vitro maturation medium with serum from dairy cows at early and late lactation in the in vitro production of bovine embryos

The transition period of dairy cows is characterized by several metabolic alterations, due to the negative energy balance, which negatively affects fertility. The aim of this study was to evaluate the effect of supplementing the in vitro maturation medium with serum from dairy cows at early and late lactation in the oocyte maturation on the rates of nuclear maturation, cleavage and initial embryo development. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were randomly divided into treatments: LL: serum from four cows at 354 ± 3.8 days in milk (DIM); and EL: serum from four cows at 10.8 ± 4.8 DIM. Subsequently, the COCs were submitted to maturation, fertilization; and in vitro culture in an incubator at 39°C with 5% CO2. For analysis of nuclear maturation; oocytes were collected after IVM, denuded and stained with Hoechst®. No difference was observed in the number of oocytes that reached metaphase II among treatments. The cleavage rate was not different between LL (59.3%; 320/540) and EL (47.0%; 243/517) treatments (P>0.05), as embryonic development between LL (15.0%; 81/540) and EL (16.6%; 86/517) (P>0.05). It was concluded that supplementation with serum from cows at different lactation periods during the bovine oocyte IVM did not influence the results of in vitro embryo production

Energetic metabolic profile of ewes presenting low body condition score induced to subclinical hypocalcemia in early postpartum

The aim of the present study is to assess plasma concentrations of metabolites related to energy balance in ewes showing low body condition score (BCS) induced to subclinical hypocalcemia in early postpartum. Sixteen crossbred ewes (Ideal x Corriedale) presenting BCS 0.05), whereas the mean concentrations of these marks after five days were lower in the hypocalcemia group (P0.05) level. These results evidence that, despite the subclinical hypocalcemia induction at early postpartum, ewes presenting low body condition do not change the concentrations of energy balance-related metabolites in the following five days

Alterações hemogasométricas e bioquímicas causadas por dietas com alto balanço cátion-aniônico negativo em vacas leiteiras

O objetivo deste estudo foi avaliar indicadores hemogasométricos e metabólicos nas primeiras horas pós-parto de vacas leiteiras, que receberam diferentes dietas cátion-aniônica no pré-parto. Vacas da raça Holandesa Preta e Branca (HPB) (n=14), multíparas, foram divididas em dois grupos: dieta acidogênica (DA -27,13 mEq/100g de MS) (n=7) e dieta neutra (DN -3,25 mEq/100g de MS) (n=7), fornecidas a partir de 30 dias antes da previsão do parto. Amostras de urina foram coletadas a cada três dias após o início da suplementação até o dia do parto, para a verificação do pH. Amostras de sangue foram coletadas às 0, 6, 12, 24, 36, 48, 60 e 72 horas pós-parto, para análises hemogasométricas e bioquímicas. Os animais que receberam DA apresentaram pH urinário menor. A concentração sérica de cálcio total, cálcio ionizado e a incidência de hipocalcemia subclínica não diferiram entre os grupos. Animais que receberam DA apresentaram redução nos níveis sanguíneos de proteínas plasmáticas totais, globulinas, bicarbonato e pH sanguíneo, além de aumento na atividade de paraoxonase-1 (PON-1) e redução na concentração de haptoglobina em relação aos animais da DN. Como conclusão podemos inferir que, dietas acidogênicas podem alterar o pH sanguíneo, interferir na síntese de proteínas, e provavelmente melhorar a capacidade antioxidante. Palavras-Chave: ácido-base, hipocalcemia subclínica, hemogasometria, vacas leiteiras

Desvio compensatório falangeano proximal e balanço capsular do casco em potros da raça Crioula sob criação extensiva do nascimento ao desmame/Proximal phalangeal compensatory deviation and capsular hoof balance in foals of the Crioula breed under extensive breeding from birth to weaning

Potros da raça Crioula com conformação hígida dos membros, mas com assimetria médio-lateral da cápsula do casco, em função do desequilíbrio estático e dinâmico nos primeiros meses de vida, poderão manifestar desvio compensatório associado a falange proximal. Portanto, o presente estudo teve por objetivo determinar a presença de desvio compensatório falangeano proximal e sua associação com balanço capsular do casco em potros da raça Crioula sob criação extensiva. Foram avaliados 67 potros da raça Crioula, com idades entre um e onze meses, de ambos os sexos, de quatro propriedades localizadas na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As medidas laterais e mediais dos talões do membro torácico esquerdo foram registradas utilizando fita métrica e as superfícies lateral e medial da falange proximal foram mensuradas através de imagens radiográficas na projeção dorso-palmar da região metacarpo-falangeana, sendo consideradas as diferenças entre as faces lateral e medial falangeanas e dos talões do estojo córneo. Os dados foram submetidos à análise estatística descritiva e teste de correlação de Spearman. Não houve efeito do gênero (macho ou fêmea) nas variáveis estudadas (P>0,05). Houve diferença da mensuração linear longitudinal das faces medial e lateral da falange proximal nos potros da raça Crioula criados em sistema extensivo, caracterizando discreto desenvolvimento assimétrico longitudinal. Apesar das diferenças entre as faces da falange proximal (0,4 cm) e entre talões (0,3 cm), essas variações não foram associadas entre si (P= 0,604), não caracterizando a presença de desvio compensatório falangeano. Portanto, o desequilíbrio estático e dinâmico nos primeiros meses de vida, em potros hígidos da raça Crioula, com assimetria médio-lateral natural da cápsula do casco inferior a 0,5 cm não foi associado ao desvio compensatório na falange proximal

Atividade sérica da enzima paraoxonase (PON-1) em equinos submetidos a administração intramuscular de diferentes adjuvantes vacinais / Activity of the enzyme paraoxonase (PON-1) in horses submitted to intramuscular injection of vaccinal adjuvants

A PON-1 é uma proteína de fase aguda inflamatória e sua atividade plasmática tem sido utilizada para fins de diagnóstico e prognóstico. Objetivou-se avaliar a atividade de PON-1 em equinos submetidos a estímulo inflamatório agudo local através da administração de adjuvantes vacinais. Utilizou-se 12 equinos, 8 machos e 4 fêmeas com idades entre 2-4 anos, divididos em 3 grupos: controle (CONT), xantana (Xa) e hidróxido de alumínio (HA). Nos grupos Xa e HA administrou-se 2 mL do respectivo adjuvante vacinal por via intramuscular, e solução salina no grupo CONT. Amostras de sangue seriadas (1 a 72 horas após administração) foram coletadas para avaliação da atividade da PON-1 no soro por espectrofotometria. Clinicamente os animais dos grupos Xa e HA apresentaram edema e sensibilidade no sítio de aplicação do adjuvante. Os valores plasmáticos de PON-1 mínimos e máximos identificados estavam entre 38,5 a 76,5 U/mL, níveis esses semelhantes ao descrito como intervalo de referência para equinos saudáveis. Comparando os grupos, não foi observada diferença nas concentrações de PON-1, independente do momento avaliado (p>0,05). Conclui-se que a atividade da PON-1 não apresentou diminuição frente a processos inflamatórios agudos locais estimulados através da administração dos adjuvantes vacinais em equinos, não se concretizando um marcador de confiabilidade em alterações inflamatórias localizadas

Efeitos de lipopolissacarídeos na ativação e apoptose de folículos ovarianos primordiais em novilhas

The objective of the present study was to evaluate the effect of lipopolysaccharide (LPS) administration on activation and apoptosis of primordial follicles. There was no difference in the total number of follicles as well as in the different types of follicles. Furthermore, the LPS challenge didn’t modulate the expression of genes related with ovarian reserve (HAM), oocyte survival (Survivin), activation rate (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1), and follicular abnormalities. Therefore, the LPS exposure with 24h interval had no effect on activation rate and primordial follicles abnormalities, and also had no effect on expression of anti-apoptotic genes and genes related with ovarian reserve, oocyte survival, activation rate, and primordial follicles abnormalities.O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da administração de lipopolissacarídeo (LPS) na ativação e a apoptose de folículos primordiais. Dez novilhas saudáveis (Bos taurus taurus), com idade média de 14 meses, alojadas em sistema de confinamento e alimentadas com TMR, foram utilizadas neste experimento. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: grupo LPS (LPS; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 0,5μg/kg de peso corporal de lipopolissacarídeo (Sigma Aldrich®) diluído em 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h; e grupo controle (CTR; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h. A primeira injeção de LPS foi realizada no d 1, e no d 5 os animais foram abatidos, os ovários foram pesados e as amostras dos ovários foram coletadas para avaliação histológica e molecular. Não houve diferença no número total de folículos, bem como nos diferentes tipos de folículos. Além disso, o desafio com LPS não modulou a expressão de genes relacionados à reserva ovariana (HAM), à sobrevivência oocitária (Survivin), à taxa de ativação (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1) e às anormalidades foliculares. Portanto, a exposição ao LPS com intervalo de 24h não teve efeito sobre a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais, bem como não teve efeito sobre a expressão de genes antiapoptóticos e de genes relacionados com a reserva ovariana, a sobrevivência oocitária, a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais

Inflammatory markers, oocyte maturation and early embryonic development in cattle

The inflammatory response arises as a mechanism of the immune system to fight infectious agents. Studies suggest an association between inflammation and fertility, mainly due to the modulation and synthesis of inflammatory mediators. High-density lipoprotein (HDL) is the main lipoprotein in follicular fluid. It has anti-inflammatory and antioxidant properties, mainly derived from its lipid composition, apolipoprotein AI (ApoAI) and paraoxonase-1 (PON1). On the other hand, lipopolysaccharides (LPS) are bacterial endotoxins that act as potent stimulator of the inflammatory response. The objective of this study was to evaluate the effect of HDL during in vitro maturation (IVM) on oocyte maturation and early embryonic development and to evaluate the effect of bovine oocyte exposure to LPS in vitro and in vivo on oocyte maturation and embryonic development in cattle. In the first study, cumulus oocyte complex (COCs) were supplemented with HDL protein during IVM, after, were fertilized (IVF) and cultured in vitro (IVC). In the second study, COCs were challenged with LPS during IVM and after, underwent IVF and IVC. Separately, COCs were subjected to IVM without LPS, thereafter they underwent IVF and during the 7 days of IVC they were challenged with LPS. Still in the second study, heifers were challenged with intravenous LPS during follicular wave synchronization. The animals were slaughtered, the ovaries were collected and COC recovery was performed. All recovered COCs underwent IVM, IVF, and IVC. In this way, we found that the addition of the HDL/ApoAI complex of human plasma during IVM, in the absence of PON1 activity, decreases the initial embryonic development. Furthermore, the exposure of bovine oocytes to LPS during IVM decreases the nuclear maturation rate, however, it was not able to affect the initial embryonic development. Similarly, exposure of zygotes to LPS during IVC did not affect embryonic development. However, infusion of LPS into heifers decreased the rate of cleavage, but the embryonic development was similar to that of the non-LPS challenged group. It is concluded that the interaction of HDL-ApoAI-PON1 complex components may affect bovine fertility at oocyte level and subsequent embryonic development. In the same way, the LPS can affect the oocyte and embryonic development; however, the mechanisms by which this happens appear to be different in vitro and in vivo.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESA resposta inflamatória surge como mecanismo do sistema imune para combater agentes infecciosos. Estudos sugerem uma associação entre a inflamação e a fertilidade, principalmente devido à modulação e síntese de mediadores inflamatórios. A lipoproteína de alta densidade (HDL) é a principal lipoproteína no fluido folicular, tem propriedades anti-inflamatória e antioxidante, que derivam principalmente de sua composição lipídica, porção de apolipoproteína AI (ApoAI) e paraoxonase-1 (PON1). Por outro lado, os lipopolissacarídeos (LPS) são endotoxinas bacterianas que agem como potente estimulador da resposta inflamatória. Neste sentido, objetivou-se avaliar o efeito do HDL durante a maturação in vitro (MIV) sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário, e avaliar o efeito da exposição de oócitos bovinos ao LPS in vitro e in vivo, sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial em bovinos. No primeiro estudo, complexos cumulus oócito (COCs) foram suplementados com proteína HDL durante a MIV, após, foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). No segundo estudo, COCs foram desafiados com LPS durante a MIV e após, passaram pela FIV e CIV. Separadamente, COCs foram submetidos à MIV sem LPS, depois disso passaram pela FIV e, durante os 7 dias de CIV foram desafiados com LPS. Ainda no segundo estudo, novilhas foram desafiadas com LPS intravenoso durante a sincronização da onda folicular. Os animais foram abatidos, os ovários foram coletados e foi realizada a recuperação dos COCs. Os COCs selecionados passaram por MIV, FIV e CIV. Dessa forma, encontramos que, a adição do complexo HDL/ApoAI do plasma humano durante a MIV, na ausência de atividade da PON1, diminui o desenvolvimento embrionário inicial. Ainda, a exposição de oócitos bovinos ao LPS durante a MIV diminui a taxa de maturação nuclear, entretanto, não foi capaz de afetar o desenvolvimento embrionário inicial. Da mesma maneira, a exposição de zigotos ao LPS durante o CIV não afetou o desenvolvimento embrionário. No entanto, a infusão de LPS em novilhas diminuiu a taxa de clivagem, porém o desenvolvimento embrionário foi semelhante ao do grupo não desafiado com LPS. Conclui-se que a interação dos componentes do complexo HDL-ApoAI-PON1, pode afetar a fertilidade bovina, em nível de oócito e subsequente desenvolvimento embrionário. Da mesma, forma o LPS, pode afetar o oócito e desenvolvimento embrionário, entretanto, os mecanismos pelos quais isso acontecem parecem ser diferentes in vitro e in vivo

Intrafollicular paraoxonase 1 activity and the steroidogenic potential of the first post-partum dominant follicle in dairy cows

Cows experiencing high levels of inflammation and specific metabolic conditions tend to have slower follicular growth and lower serum and follicular concentrations of oestradiol (E2). Paraoxonase1 (PON1) activity decreases during inflammatory processes. Therefore, the aim of this study was to evaluate the association between serum and intrafollicular (FF) PON1 activity and the serum and intrafollicular levels of E2 and progesterone (P4), as well as the mRNA expression of genes related to steroidogenesis, metabolism and inflammation in the first post-partum dominant follicle of Holstein cows. No correlation was found between PON1 activity, the expression of the analysed genes and levels of follicular E2 and P4, except for a negative correlation between serum E2 and follicular PO1 activity. Also, no correlation was found between serum and follicular PON1 during the first post-partum follicular wave